朱宇航，黃思洋，陳華保，常小麗，閆芳芳，張宗錦，龔國淑*

1. 四川農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院，成都市溫江區(qū)惠民路211 號 611130

2. 四川省煙草公司攀枝花市公司，四川省攀枝花市龍珠路31 號 617099

煙 草 赤 星 病 [Alternaria alternata（Fries）Keissler]是一種真菌性病害，具有潛育期短，爆發(fā)快等特點[1-2]。在溫濕度適宜的條件下，短時間內(nèi)可大面積流行[3]。煙草赤星病在四川省各大煙區(qū)均有發(fā)生，攀枝花-涼山煙區(qū)發(fā)生最為嚴重，煙葉損失高達30%以上，給煙葉生產(chǎn)造成巨大損失。目前，煙草赤星病的防治主要以化學防治為主，藥劑主要為菌核凈和多抗霉素[4-6]。由于長期、大量使用菌核凈和多抗霉素，導致煙草赤星病菌產(chǎn)生抗藥性，田間防治效果明顯降低[7-9]。因此，新藥劑的篩選已迫在眉睫。黃艷飛等[10]發(fā)現(xiàn)氟硅唑、醚菌酯、嘧菌酯等對煙草赤霉病菌菌絲生長的抑制效果顯著。陳杰等[11]通過田間試驗發(fā)現(xiàn)10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑對煙草赤星病具有顯著的防治效果。

氟啶胺、啶氧菌酯、啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺、噁唑菌酮5 種藥劑是國內(nèi)外生產(chǎn)中廣泛使用的低毒、低殘留殺菌劑[12-22]。其中，氟啶胺和嘧菌環(huán)胺對柑橘鏈格孢褐斑?。ˋ. alternata）和灰霉病有較好的田間防效[12-13，18]，啶酰菌胺對番茄早疫?。ˋ.solani）和大豆菌核?。⊿clerotinia sclerotiorum）的防治效果也較好[14，19]，啶氧菌酯對辣椒炭疽病和葡萄霜霉病有特效[15-16]，噁唑菌酮能夠很好地防治疫病和黃萎病[17，22]。但這5 種藥劑用于煙草赤星病的防治研究鮮見報道。為此，研究氟啶胺、啶氧菌酯、啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺、噁唑菌酮等5 種原藥及其所對應的殺菌劑對煙草赤星病菌的室內(nèi)毒力和田間防治效果，旨在篩選出新的、高效的殺菌劑用于煙草赤星病的防治。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗地位于四川省攀枝花市仁和區(qū)平地鎮(zhèn)（北緯N26°15′44.26″，東經(jīng)E101°48′28.26″），海拔2 036 m，屬于南亞熱帶河谷氣候。干濕季分明，每年6～10 月降雨集中，日照時間長，有效積溫高。

試驗地土壤為紫色巖風化物發(fā)育的水稻土，微酸。地勢平坦、肥力均勻，歷年種植煙草，為煙草赤星病常發(fā)區(qū)。2017 年，煙草旺長至成熟期間，平均氣溫20.9 ℃/月，平均降水量＞300 mm/月。

供試藥劑。①供試原藥（室內(nèi)實驗）：98%氟啶胺、95%啶氧菌酯、95%啶酰菌胺、95%嘧菌環(huán)胺、95%噁唑菌酮，均由四川農(nóng)業(yè)大學無公害農(nóng)藥實驗室提供。②供試殺菌劑（田間試驗）的具體名稱、劑型、施藥濃度及生產(chǎn)廠家見表1。施藥濃度采用廠家推薦的最佳濃度。

表1 田間供試殺菌劑Tab.1 Fungicides used in field experiments

供試煙草品種為云煙87，易感煙草赤星病。由四川農(nóng)業(yè)大學雪茄工程技術研究中心提供。煙草赤星病菌的菌株編號為YC-PZH，對煙草具有強致病性，分離自四川省攀枝花市烤煙種植區(qū)，該地區(qū)從未使用過本文中的供試藥劑。

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測定

采用菌絲生長速率法[23]進行供試藥劑的室內(nèi)毒力測定。將5 種原藥分別溶于丙酮，配置成10 g/L 母液備用（現(xiàn)配現(xiàn)用）。用0.1%吐溫80 的無菌水將5 種原藥母液按下列梯度進行稀釋，其中啶氧菌酯、啶酰菌胺和噁唑菌酮的濃度梯度均為0、62.5、125.0、250.0、500.0 和1 000.0 mg/L，氟啶胺和嘧菌環(huán)胺的濃度梯度均為0、6.25、12.50、25.00、50.00 和100.00 mg/L?？瞻讓φ眨涸诤?.1%吐溫80的無菌水中加入丙酮（0.1%吐溫80 的無菌水∶丙酮=100∶1，體積比）。將不同濃度的5 種原藥母液加入45 ℃的PDA 培養(yǎng)基中（PDA 培養(yǎng)基∶原藥=9∶1，體積比），制備成含藥PDA 培養(yǎng)基。其中，啶氧菌酯、啶酰菌胺和噁唑菌酮的濃度梯度均為0、6.25、12.50、25.00、50.00 和100.00 mg/L；氟啶胺和嘧菌環(huán)胺的濃度梯度均為0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000 mg/L。

PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉10 g，水1 L。

將煙草赤星病菌菌株YC-PZH 用PDA 培養(yǎng)基暗培養(yǎng)（25 ℃）約7 d，用打孔器在菌落邊緣等距離切取直徑5 mm 的菌餅。將菌餅接種于不同濃度的含藥PDA 培養(yǎng)基和對照PDA 培養(yǎng)基（直徑10 cm）中，每個處理重復3 次。接菌后，將平板置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，暗培養(yǎng)7 d 后，采用“十字交叉法”測量菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。

1.2.2 田間試驗

試驗設計。采用隨機區(qū)組進行田間試驗，試驗田四周設保護行。按攀枝花市優(yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)技術[24]進行田間管理。選用5 種殺菌劑，以清水為空白對照，共6 個處理，每個處理3 次重復。共18個小區(qū)，每個小區(qū)面積為100 m2。

田間調(diào)查。采用對角線5 點取樣法進行調(diào)查。每點隨機選取5 株煙草，每株煙草調(diào)查5 片完整煙葉（從下往上），剔除萎蔫、破損煙葉。按照殺菌劑說明書上的濃度要求，對煙草進行施藥處理。分別于2017 年7 月29 日、8 月5 日和8 月12 日施藥，共3 次。在第1 次施藥前、第1 次施藥后7 d 和第3次施藥后7 d 調(diào)查目標煙葉赤星病的發(fā)病情況。

煙草赤星病的調(diào)查分級標準（以葉片為單位分級調(diào)查）按煙草病蟲害分級及調(diào)查方法[20]進行。病情指數(shù)[25]和防治效果[26]的計算方法：

式中：CK0為空白對照施藥前病情指數(shù)；CK1為空白對照施藥后病情指數(shù)；PT0為藥劑處理施藥前病情指數(shù)；PT1為藥劑處理施藥后病情指數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

運用SPSS 19.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析，以藥劑質(zhì)量濃度的對數(shù)值為橫坐標、抑制率對應的幾率值為縱坐標進行作圖，得到毒力回歸方程及有效抑制中濃度（EC50）值。再用Duncan（0.05）比較各試驗處理之間的差異顯著性。

2 結果

2.1 不同藥劑對煙草赤星病菌的室內(nèi)毒力測定

由圖1 和表2 可知，在測試濃度范圍內(nèi)，5 種藥劑均能在一定程度上抑制煙草赤星病菌菌絲的生長，但毒力存在明顯差異，毒力由強到弱依次為98%氟啶胺＞95%嘧菌環(huán)胺＞95%啶氧菌酯＞95%啶酰菌胺＞95%噁唑菌酮。其中98%氟啶胺抑制效果最好，EC50為0.138 2 mg/L；其次為95%嘧菌環(huán)胺，EC50為3.568 9 mg/L；95%噁唑菌酮抑制效果最差，EC50為30.098 3 mg/L。毒力回歸方程的斜率代表藥劑對病菌的敏感性，斜率越大，敏感性越高[27]。從表2 可知，5 種藥劑對煙草赤星病菌的敏感性存在差異，其中95%嘧菌環(huán)胺對煙草赤星病菌最為敏感，95%啶酰菌胺最不敏感，兩者斜率相差7.713 倍。

圖1 10 mg/L 濃度下5 種藥劑的抑菌效果Fig.1 Inhibitory effects of five fungicides at concentration of 10 mg/L

2.2 不同殺菌劑對煙草赤星病菌的田間防效試驗

由表3 可知，5 種殺菌劑對煙草赤星病均有一定的防治效果。第1 次施藥后7 d，不同殺菌劑處理之間的病情指數(shù)差異不顯著，但防治效果差異顯著，而且病情指數(shù)增長幅度相比對照有所下降，說明病害發(fā)生得到了初步控制。第3 次施藥后7 d，不同藥劑處理病情指數(shù)相比對照顯著下降，說明連續(xù)施藥后病情得到了有效控制，病害明顯減輕。各藥劑之間平均防效差異顯著，防效由強到弱依次為50%氟啶胺SC＞22.5%啶氧菌酯SC＞62%嘧菌環(huán)胺WG＞52.5%噁酮·霜脲氰WG＞50%啶酰菌胺WG。其中50%氟啶胺SC 的防治效果最好，為70.44%；其次是22.5%啶氧菌酯SC 和62%嘧菌環(huán)胺WG，防效分別為64.26%和63.09%；50%啶酰菌胺WG 防治效果最差，為39.53%。從施藥到調(diào)查結束，試驗田未發(fā)生任何異常情況，各殺菌劑處理后對煙草均未產(chǎn)生藥害，表現(xiàn)安全。試驗田收成良好，煙葉品級較高。經(jīng)四川省煙草公司攀枝花市公司和四川省煙草專賣局質(zhì)量監(jiān)督檢測站抽檢后，在煙葉上未發(fā)現(xiàn)5 種殺菌劑殘留超標。

表3 5 種殺菌劑對煙草赤星病的田間防治效果①Tab.3 Control efficacy of five fungicides on tobacco brown spot in fields

3 討論

目前，化學防治仍是煙草赤星病的主要防治途徑，菌核凈和多抗霉素曾是很多煙葉產(chǎn)區(qū)的主推藥劑，但由于生產(chǎn)上長期高濃度、高頻率的使用，已導致病原菌對菌核凈和多抗霉素產(chǎn)生了較嚴重的抗藥性[4-9]。本研究中，測定了5 種常用藥劑對煙草赤星病菌（A. alternata）的毒力及其田間防治效果。根據(jù)毒力測定和田間防效的數(shù)據(jù)，篩選出能有效防治煙草赤星病菌的兩種藥劑：氟啶胺和嘧菌環(huán)胺。氟啶胺屬于吡啶胺衍生物，是線粒體氧化磷酰化解偶聯(lián)劑，為廣譜高效的保護性殺菌劑，對鏈格孢屬（Alternaria）、疫霉屬（Phytophthora）和核盤菌屬（Sclerotinia）真菌具有顯著的殺菌效果[28-30]。在國外使用多年未見抗藥性報道，且與其他藥劑無交互抗性，對易產(chǎn)生抗藥性的病菌具有良好防效[30]。嘧菌環(huán)胺屬于苯胺基嘧啶胺類化合物，是蛋氨酸生物合成抑制劑，能有效抑制病原菌分泌侵染所需的酶類，起到保護作用[31-32]。且嘧菌環(huán)胺同三唑類、苯基吡咯類、咪唑類、二酰酸亞胺類、嗎啉類殺菌劑均無交互抗性，是具有保護、治療、葉片穿透及根部內(nèi)吸活性的高效安全殺菌劑[31，33]。因此，氟啶胺和嘧菌環(huán)胺不僅可以單獨施用，也可同其他藥劑混用或復配，兼治多種病害。但有關氟啶胺和嘧菌環(huán)胺與其他藥劑復配用于防治煙草病害還需進一步研究。

4 結論

①98%氟啶胺和95%嘧菌環(huán)胺對煙草赤星病菌有強烈的抑制作用，EC50分別為0.138 2 和3.568 9 mg/L。②在推薦的最佳濃度下，3 種殺菌劑（50%氟啶胺SC、22.5%啶氧菌酯SC 和62%嘧菌環(huán)胺WG）對煙草赤星病的田間防治效果較好，分別為70.44%、64.26%和63.09%。③綜合室內(nèi)毒力和田間效果的數(shù)據(jù)，氟啶胺和嘧菌環(huán)胺能有效控制病害、使用安全、無抗藥性風險，推薦用于煙草赤星病的防治。