商振達(dá)，譚占坤，李家奎，卓 嘎，王宏輝，謝國(guó)平，劉鎖珠*

(1. 西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏 林芝860000； 2. 西藏高原飼料加工工程研究中心，西藏 林芝 860000；3. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430070)

西藏地區(qū)位于中國(guó)青藏高原西南部，畜牧業(yè)是其農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)，具有不可替代的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)作用[1]。但由于西藏高海拔、高寒的惡劣自然環(huán)境，導(dǎo)致草地生產(chǎn)能力極低，牧草生長(zhǎng)期短，優(yōu)質(zhì)飼料資源嚴(yán)重缺乏，難以為家畜提供充足的飼草資源，當(dāng)前飼料的短缺已成為制約西藏畜牧業(yè)發(fā)展的重要問題[2]。因此，開發(fā)擴(kuò)大飼料來源，是解決西藏地區(qū)家畜飼糧短缺的有效措施。

青飼玉米作為一種優(yōu)質(zhì)的飼料作物，具有再生能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、適口性好等優(yōu)點(diǎn)[3-4]，近年來在西藏拉薩、林芝、山南、昌都等地廣泛種植。青貯作為一種青飼料的貯存技術(shù)或方法，具有減少飼草養(yǎng)分損失，有利于動(dòng)物消化吸收，增高飼草的利用價(jià)值、擴(kuò)大飼料來源、調(diào)整飼草供應(yīng)時(shí)期等作用。青貯是一個(gè)非常復(fù)雜的生化物質(zhì)轉(zhuǎn)化和微生物活動(dòng)的過程，青貯過程中飼草的營(yíng)養(yǎng)成分和微生物菌群的變化都會(huì)對(duì)青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)產(chǎn)生很多影響。因此，深入了解玉米的營(yíng)養(yǎng)成分和青貯過程中微生物菌群結(jié)構(gòu)的變化情況，可以更好的分析影響青貯玉米發(fā)酵品質(zhì)的因素，進(jìn)而提高玉米青貯的成功率[5-8]。

大量的研究表明，青飼料的不同種植季節(jié)和收割時(shí)間會(huì)影響其營(yíng)養(yǎng)成分[9-10]。近年來，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，該技術(shù)在微生物研究領(lǐng)域已被廣泛使用，高通量測(cè)序技術(shù)能夠更深入、直觀、準(zhǔn)確地檢測(cè)到青貯飼料微生物群落的多樣性，可以測(cè)定微生物從門、綱、目、科、屬各個(gè)水平上的構(gòu)成及豐度[11-14]。因此，本研究對(duì)西藏林芝地區(qū)不同種植時(shí)間玉米的營(yíng)養(yǎng)成分和青貯玉米的發(fā)酵品質(zhì)進(jìn)行測(cè)定分析，并利用高通量技術(shù)檢測(cè)不同種植時(shí)間對(duì)玉米青貯后微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響，為提高西藏地區(qū)青貯玉米的發(fā)酵品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

將種植于西藏林芝西藏農(nóng)牧學(xué)院實(shí)習(xí)牧場(chǎng)試驗(yàn)地完熟期的春玉米和夏玉米于2017年10月15日刈割。其中，春玉米種植時(shí)間為2017年3月20日，夏玉米種植時(shí)間為2017年6月10日。全株春玉米和全株夏玉米的化學(xué)成分見表1。

表1 青貯材料營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 The nutritional ingredients of silage materials

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，設(shè)置8個(gè)處理，分別為全株春玉米青貯組(分別為A1青貯7天、B1青貯14天、C1青貯30天、D1青貯60天)、全株夏玉米青貯組(分別為A2青貯7天、B2青貯14天、C2青貯30天、D2青貯60天)，每組青貯結(jié)束后打開小型實(shí)驗(yàn)用青貯窖取樣進(jìn)行分析，每個(gè)處理取3袋作為3個(gè)重復(fù)，共24袋。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1青貯飼料的制作 將全株春玉米和夏玉米均切成1～3 cm后稱取55 g，快速裝填并壓實(shí)于110 ml的小型實(shí)驗(yàn)用青貯窖中密封后，置于室溫條件下保存，分別在青貯第7,14,30和60 d后打開，取樣進(jìn)行分析。

1.3.2樣品預(yù)處理 青貯窖打開后，取出全部青貯飼料將其混勻，稱35 g放入100 m1的廣口三角瓶，加入105 g的去離子水(青貯飼料:水=1:3)，在4℃的冰箱內(nèi)浸提24小時(shí)。然后對(duì)青貯飼料進(jìn)行榨汁和過濾，將上清液用過濾漏斗通過二層沙布和濾紙過濾，保存濾液(—20℃冷凍箱保存)待測(cè)。濾液用來測(cè)定pH值、乳酸、氨態(tài)氮和揮發(fā)性脂肪酸。將剩余的部分青貯飼料收集起來烘干，稱重粉碎，測(cè)定干物質(zhì)、總氮、粗蛋白以及水溶性碳水化合物含量。部分剩余的，未烘干青貯飼料裝入無菌的50 ml凍存試管中，保存于—20℃冰箱中，用于測(cè)定青貯飼料中微生物菌群的多樣性。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1青貯飼料發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定 干物質(zhì)(Dry matter，DM)采用將青貯飼料放置于105℃的烘箱中烘2 h，然后將烘箱調(diào)至65℃的恒溫繼續(xù)烘60 h直至恒重的方法測(cè)定[15]；用HANNA pH211精密pH計(jì)(意大利HANNA公司)對(duì)青貯樣品處理后的過濾液直接測(cè)定pH；使用日立高效液相色譜儀測(cè)定青貯飼料中揮發(fā)性脂肪酸(Volatile fatty acids，VFAs)含量；采用苯酚-次氯酸鈉比色法[16]和硫酸-蒽酮比色法[17]分別測(cè)定氨態(tài)氮(Ammonia nitrogen，AN)和水溶性碳水化合物(Water soluble carbohydrate，WSC)含量；總氮(Total nitrogen)通過凱氏定氮法測(cè)定[18]。

1.4.2青貯飼料微生物多樣性的測(cè)定 將以每個(gè)青貯組中的3個(gè)重復(fù)樣品均勻的混合在一起。使用試劑盒提取青貯飼料中的微生物組總DNA，利用前引物和后引物獲得細(xì)菌16S rRNA基因V3-V4高變異區(qū)。擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化，采用Illumina公司的TruSeq Nano DNA LT Library Prep Kit制備測(cè)序文庫(kù)。使用MiSeq測(cè)序儀進(jìn)行2×300 bp的雙端測(cè)序并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。Illumina HiSeq測(cè)序及結(jié)果分析均由上海派森諾生物科技股份有限公司協(xié)助完成。

1.5 數(shù)據(jù)處理

使用QIIME軟件，調(diào)用UCLUST這一序列比對(duì)工具[19]，對(duì)前述獲得的序列按97%的序列相似度進(jìn)行歸并和OTU(Operational Taxonomic Unit)[20]劃分，將OTU序列與Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)[21]的模板序列相比對(duì)，獲取每個(gè)OTU所對(duì)應(yīng)的分類學(xué)信息。通過不同生物信息學(xué)算法計(jì)算Alpha多樣性，使用QIIME軟件進(jìn)行各分類水平的分類學(xué)組成分析，并用R軟件(R package)將數(shù)據(jù)繪制成柱狀圖，通過主成分分析(Principal component analysis，PCA)方法，對(duì)群落數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)進(jìn)行自然分解，從而觀測(cè)樣本之間的差異[22]。通過IBM SPSS Statistics軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 西藏地區(qū)春玉米與夏玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分變化

整個(gè)青貯過程中，春玉米青貯組中干物質(zhì)含量和pH值始終顯著(P<0.05)高于夏玉米青貯組，而夏玉米青貯組中乳酸和乙酸含量始終顯著(P<0.05)高于春玉米青貯組。隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，春玉米與夏玉米青貯組中，干物質(zhì)含量都顯著下降(P<0.05)或下降(P>0.05)，青貯第7 d干物質(zhì)含量最高，分別為311.63 g·kg-1和182.61 g·kg-1；pH值都有先下降后上升的趨勢(shì)，青貯第30 d時(shí)pH值最低，分別為4.15和3.77；相應(yīng)的，乳酸含量都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，青貯第30 d時(shí)乳酸含量最高，分別為37.61 g·kg-1和70.30 g·kg-1。乙酸含量都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，春玉米青貯組在青貯第30 d時(shí)，乙酸含量最高(16.33 g·kg-1)，而夏玉米青貯組在青貯第14 d時(shí)，乙酸含量最高(34.83 g·kg-1)。整個(gè)青貯過程中，各青貯組中丁酸含量均低于10 g·kg-1，且同一青貯時(shí)間下，夏玉米組中丁酸含量均低于春玉米組(表2)。

如表3所示，春玉米青貯組中氨態(tài)氮/總氮的值均顯著高于(P<0.05)或高于(P>0.05)夏玉米青貯組，而各春玉米青貯組中水溶性碳水化物含量均顯著低于(P<0.05)或低于(P>0.05)各夏玉米青貯組。隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，各青貯試驗(yàn)組中氨態(tài)氮/總氮的值逐漸升高，在青貯第7 d時(shí)，青貯組中氨態(tài)氮/總氮的值最低，分別為45.15 g·kg-1和35.80 g·kg-1，而青貯第60 d時(shí)，青貯組中氨態(tài)氮/總氮的值最高，分別為55.36 g·kg-1和54.92 g·kg-1，但都低于100 g·kg-1，且同一青貯天數(shù)下，各夏玉米青貯組中氨態(tài)氮/總氮的值均低于春玉米青貯組；各青貯試驗(yàn)組中水溶性碳水化合物含量逐漸下降，在青貯第7 d時(shí)，青貯組中水溶性碳水化合物含量最高，分別為38.73 g·kg-1和53.58 g·kg-1，而青貯第60 d時(shí)，青貯組中水溶性碳水化合物含量最低，分別為21.51 g·kg-1和25.46 g·kg-1，且同一青貯天數(shù)下，各夏玉米青貯組中水溶性碳水化合物含量均高于春玉米青貯組。

2.2 西藏地區(qū)春玉米與夏玉米青貯發(fā)酵微生物多樣性(細(xì)菌)研究

2.2.1測(cè)序結(jié)果及Alpha多樣性分析 本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組，共8份青貯飼料樣品的菌群V3-V4區(qū)進(jìn)行測(cè)序，共計(jì)獲得有效序列288 470條，樣品平均有效序列為36 058條。按照97%的相似度對(duì)OTUs進(jìn)行精簡(jiǎn)，并對(duì)獲得的OTUs在門、綱、目、科、屬、種六個(gè)分類水平上進(jìn)行鑒定，結(jié)果如圖1所示。

從圖2可見，物種觀察指數(shù)稀釋曲線隨著測(cè)試深度的不斷加深逐漸增加，其斜率逐漸減小，趨于平臺(tái)期，說明樣本測(cè)序量已經(jīng)飽和，大多數(shù)菌群被覆蓋，足夠反映樣本中絕大部分細(xì)菌物種的信息。由各青貯試驗(yàn)組的Alpha多樣性指數(shù)可知(表4)，隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，春玉米青貯組中Chao1和ACE指數(shù)[23-24]呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，表明春玉米青貯組中微生物群落的豐富度先升高后下降，而在夏玉米青貯中，兩種指數(shù)呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，表明夏玉米青貯組中微生物群落的豐富度先下降后升高。除此之外，Simpson指數(shù)[25]和Shannon指數(shù)[26]在春玉米和夏玉米青貯組中的變化規(guī)律也不一樣。綜合分析四種Alpha多樣性指數(shù)可知，青貯原料的營(yíng)養(yǎng)成分不同，會(huì)影響青貯過程中微生物菌群的結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律。

表2 西藏地區(qū)春玉米和夏玉米青貯過程中pH值、干物質(zhì)和揮發(fā)性脂肪酸含量的變化Table 2 Changes of pH,DM and Volatile fatty acid contents of spring corn silages and summer corn silages during ensilage in Tibet

注：不同小寫字母表示相同處理不同青貯天數(shù)間差異顯著；不同大寫字母表示相同青貯天數(shù)不同處理間差異顯著(P<0.05)下同。±是指標(biāo)準(zhǔn)差

Note:Values with different lowercase letters indicate significant differences among ensiling days in the same treatment,values with different uppercase letters indicate significant difference among treatments in the same ensiling day at the 0.05 level,the same as below.± is the standard deviation.

表3 西藏地區(qū)春玉米和夏玉米青貯過程中氨態(tài)氮/總氮和水溶性碳水化合物含量的變化Table 3 Changes of AT/TN and WSC content of spring corn silages and summer corn silages during ensilage in Tibet

圖1 OTU分類地位鑒定圖Fig.1 The classification of OTUs in di□erent silage samples

圖2 各青貯組稀疏曲線圖Fig.2 Rarefaction analysis of experimental group

表4 各青貯組中菌群微生物多樣性指數(shù)Table 4 Diversity index of experimental group

2.2.2各青貯實(shí)驗(yàn)組微生物群落主成分分析 基于OTUs水平的主成分分析(PCA)結(jié)果見圖3，兩點(diǎn)之間的距離越近，表明兩個(gè)樣本之間的微生物群落結(jié)構(gòu)相似度越高。由圖可知，8個(gè)青貯試驗(yàn)組的8個(gè)樣品能夠較明顯的區(qū)分開，說明不同青貯組中微生物群落的組成差異較明顯。其中春玉米青貯組中，隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，各組中微生物菌群組成的差異逐漸增大。夏玉米青貯組中，青貯第7 d和第14 d時(shí)，微生物菌群組成幾乎相同，而青貯14 d后，隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，各組中微生物菌群組成的差異逐漸增大。同一青貯天數(shù)時(shí)，夏玉米與春玉米青貯組中微生物菌群組成也存在一定的差異。

圖3 PCA分析的樣本三維排序圖Fig.3 3D Sorting Chart of PCA Analysis

2.2.3基于門水平的微生物群落結(jié)構(gòu)分析 圖4顯示了在門水平上春玉米和夏玉米不同青貯天數(shù)試驗(yàn)組中微生物菌群結(jié)構(gòu)的變化(豐度>1%)，8個(gè)樣品中共鑒定出21個(gè)門，其中豐度大于1%的門有5個(gè)，分別為變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)，其豐度值依次為50.7%，38.5%，6.1%，2.1%和2.0%，占菌群分類的99.4%以上，0.6%左右的為其他菌門。

比較不同青貯試驗(yàn)組樣品可知，青貯前30 d時(shí)，春玉米青貯組中變形菌門的豐度均高于夏玉米青貯組，而青貯60 d時(shí)，略低于夏玉米青貯組；青貯前30 d時(shí)，春玉米青貯組中厚壁菌門的豐度均低于夏玉米青貯組，而青貯60 d時(shí)，高于夏玉米青貯組；青貯第7和14 d時(shí)，春玉米青貯組中藍(lán)細(xì)菌門的豐度高于夏玉米青貯組，而青貯第30和60 d時(shí)，低于夏玉米青貯組；整個(gè)青貯過程中，春玉米青貯組中擬桿菌門的豐度均低于夏玉米青貯組；春玉米青貯組中放線菌門的豐度只要在青貯第60 d時(shí)低于夏玉米青貯組，其他青貯天數(shù)時(shí)均高于夏玉米青貯組。

圖4 基于門水平上各青貯組中微生物豐度柱狀圖Fig.4 The histograms of abundances of microbes at phylum level in each silage group

2.2.4基于屬水平的微生物群落結(jié)構(gòu)分析 圖5顯示了在屬水平上不同青貯組中微生物菌群結(jié)構(gòu)的變化(豐度>1%)，8個(gè)樣品中共鑒定出402個(gè)屬。如圖所示，豐度大于1%的屬有11個(gè)，總豐度占到78.1%，分別為假單細(xì)胞菌屬(Pseudomonas)，豐度為29.5%，乳酸桿菌屬(Lactobacillus)，豐度為24.2%，兩種菌屬為優(yōu)勢(shì)菌屬；隨后依次為貪銅菌屬(Cupriavidus)，豐度為4.0%；魏斯氏菌屬(Weissella)，豐度為3.8%；明串珠菌屬(Leuconostoc)，豐度為3.3%；鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)，豐度為3.3%；乳球菌屬(Lactococcus)，豐度為3.2%；泛菌屬(Pantoea)，豐度為2.4%；沙雷菌屬(Serratia)，豐度為2.1%；真桿菌屬(Eubacterium)，豐度為1.1%；志賀氏菌屬(Escherichia-Shigella)，豐度為1.1%。其他的菌屬雖然豐度較低，但也存在一定的數(shù)量。

比較不同青貯試驗(yàn)組樣品可知，隨著青貯的進(jìn)行，假單細(xì)胞菌屬在春玉米和夏玉米青貯組中豐度都先升高后下降。春玉米青貯組中乳桿菌屬的豐度隨青貯天數(shù)增加而升高，在夏玉米青貯組中乳酸桿菌屬在青貯30 d后，豐度明顯下降，且除青貯第60 d外，夏玉米青貯組中乳酸桿菌屬豐度都要高春玉米青貯組。除此之外，在春玉米和夏玉米青貯組中均檢測(cè)到了其他LAB菌種，如魏斯氏菌屬、明串珠菌屬和乳球菌屬，但春玉米青貯組中三種LAB菌種的豐度都要高于夏玉米青貯組；春玉米青貯組中鞘氨醇單胞菌屬、泛菌屬、沙雷菌屬的豐度均高于夏玉米青貯組；各青貯組中均未檢測(cè)出革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌屬和梭菌屬。

圖5 基于屬水平上各青貯組中微生物豐度柱狀圖Fig.5 The histograms of abundances of microbes at genus level in each silage groups

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，春玉米與夏玉米由于種植時(shí)間不同，導(dǎo)致其營(yíng)養(yǎng)成分有明顯差異，春玉米中干物質(zhì)和粗纖維含量高于夏玉米，而夏玉米中水溶性碳水化合物和粗蛋白含量高于春玉米，這與Neylon[27]、Weiss[28]和Johnson[29]對(duì)飼用玉米的研究結(jié)果相似。從春玉米和夏玉米青貯過程中營(yíng)養(yǎng)成分變化可見，春玉米青貯組中干物質(zhì)含量、pH值和氨態(tài)氮/總氮的值始終高于夏玉米青貯組，相應(yīng)的乳酸含量始終低于夏玉米青貯組，這與夏玉米中水溶性碳水化合物含量高，而較高的水溶性碳水化合物，可以為乳酸菌提供更多的發(fā)酵底物有效的降低青貯飼料的pH值和氨態(tài)氮含量，提高乳酸產(chǎn)量有關(guān)[30-32]。隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，春玉米和夏玉米青貯中干物質(zhì)含量逐漸降低，pH值先下降后上升，相應(yīng)的乳酸含量先上升后下降，青貯30 d時(shí)，pH最低而乳酸含量最高，青貯條件最佳。整個(gè)青貯過程中，春玉米青貯組中除青貯30 d外，pH值都沒有降至常規(guī)成功青貯要求的pH值，而夏玉米青貯組中pH值均降至常規(guī)成功青貯要求的pH值[33](4.2以下)，說明夏玉米青貯的條件要優(yōu)于春玉米青貯。

本研究中，整個(gè)青貯過程中，乳酸含量的變化規(guī)律和乙酸含量的變化規(guī)律一致。表明在整個(gè)青貯過程中異性乳酸發(fā)酵占主導(dǎo)地位。丁酸和氨態(tài)氮/總氮是衡量青貯飼料優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)質(zhì)青貯飼料中丁酸含量和氨態(tài)氮/總氮值應(yīng)低于10 g·kg-1DM和100 g·kg-1TN[34]，本試驗(yàn)中，雖然各組丁酸含量和氨態(tài)氮/總氮均低于這一標(biāo)準(zhǔn)，但夏玉米青貯組中丁酸含量和氨態(tài)氮/總氮的值均低于春玉米青貯組。隨著青貯天數(shù)的增加，各青貯組中的氨態(tài)氮/總氮值逐漸升高。表明青貯后期較多的蛋白質(zhì)可能被好氧性微生物降解為氨態(tài)氮。

青飼玉米青貯發(fā)酵過程中微生物菌群的豐度和結(jié)構(gòu)的變化影響著青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分[35-36]。因此本研究基于高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)玉米青貯飼料的微生物菌群進(jìn)行檢測(cè)，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到，樣本測(cè)序量已經(jīng)飽和，大多數(shù)菌群被覆蓋，足夠反映樣本中絕大部分細(xì)菌物種的信息。由四種Alpha多樣性指數(shù)可知，青貯原料的營(yíng)養(yǎng)成分不同，會(huì)影響青貯過程中微生物菌群的結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律。且隨著青貯天數(shù)的逐漸增加，各組中微生物菌群組成的差異逐漸增大。本研究檢測(cè)到的菌群共分21個(gè)門，優(yōu)勢(shì)菌門依次為變形菌門、厚壁菌門、藍(lán)細(xì)菌門、放線菌門、擬桿菌門，共分402個(gè)屬，優(yōu)勢(shì)菌屬為假單細(xì)胞菌屬和乳酸桿菌屬。本研究中，夏玉米青貯組中厚壁菌門和擬桿菌門豐度高于春玉米青貯組，且春玉米青貯組中的變形菌門高于夏玉米青貯組，說明夏玉米青貯組對(duì)粗纖維的降解效果[37]和碳水化合物的利用效果[38]均好于春玉米青貯，且其抑制變形菌門的效果較好。

本研究中，假單細(xì)胞菌屬的豐度在春玉米和夏玉米青貯過程中的變化規(guī)律不同，其原因有待進(jìn)一步研究。在春玉米青貯中乳桿菌屬的豐度始終低于假單細(xì)胞菌屬，說明在春玉米中，乳桿菌屬作為一種產(chǎn)乳酸菌，其抑制好氧性的假單細(xì)胞菌的效果較差。而在夏玉米青貯中，除青貯60 d外，其他青貯組中乳桿菌屬的豐度均高于假單細(xì)胞菌屬，說明夏玉米中，乳桿菌屬抑制好氧性細(xì)菌的效果較好[39]。在本研究中，除乳酸桿菌外，還存在其他豐度較低的LAB菌種，如魏斯氏菌屬、明串珠菌屬、乳球菌屬，且夏玉米青貯組中各種LAB菌種(乳酸桿菌屬、魏斯氏菌屬、明串珠菌屬、乳球菌屬)的豐度和要高于春玉米青貯組；各青貯組中均未檢測(cè)到青貯飼料的重要腐敗菌(革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌屬和梭菌屬)。除此之外，鞘氨醇單胞菌屬、泛菌屬、沙雷菌屬等菌屬也存在于青貯玉米中，玉米營(yíng)養(yǎng)成分不同也會(huì)使其豐度出現(xiàn)變化，這幾種菌屬的功能還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

不同種植時(shí)間會(huì)影響西藏地區(qū)玉米的營(yíng)養(yǎng)成分，而不同的營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)導(dǎo)致青貯玉米發(fā)酵品質(zhì)不同以及微生物菌群結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律不同。相比春玉米青貯，夏玉米青貯后降低了青貯飼料的pH值，提高了乳酸含量，降低了丁酸含量和氨態(tài)氮/總氮的值。除此之外，夏玉米青貯后還提高了厚壁菌門和擬桿菌門的豐度，降低了變形菌門的豐度；提高了LAB菌種的豐度，有效的抑制了腐敗菌的生長(zhǎng)。因此，夏玉米的青貯效果優(yōu)于春玉米。