楊志宏,張小妮,王小娟,李 芳,楊桂鳳

(1.秦皇島市第一醫(yī)院 老年病科，河北 秦皇島066004；2.秦皇島市第一醫(yī)院 麻醉科復(fù)蘇室，河北 秦皇島066004)

2型糖尿病是臨床中常見的一種內(nèi)分泌疾病，也是導(dǎo)致患者殘疾甚至死亡的主要原因之一，對患者的生活及家庭帶來沉重的負擔(dān)[1]。而且目前還沒有能夠治愈2型糖尿病的有效方案，主要是通過降低患者的血糖值來最大限度的減少2型糖尿病的發(fā)生[2]。隨著人們生活水平的不斷提高以及生活方式的不斷改變，2型糖尿病的發(fā)病率和死亡率逐年上升，對2型糖尿病相關(guān)指標的監(jiān)測也成為了研究治療2型糖尿病重要課題之一[3]。有研究指出，血清超敏C反應(yīng)蛋白、TG、chemerin及瘦素均參與了2型糖尿病的發(fā)病過程，并且具有較高的特異性，能夠?qū)?型糖尿病患者的進一步治療和診斷提供重要的價值幫助[4]。本文對2型糖尿病患者的超敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)、甘油三酯(Three acyl glycerol，TG)、血清趨化素(chemerin)及瘦素(Leptin，LP)表達進行檢測，旨在研究超敏C反應(yīng)蛋白、TG、chemerin及LP在2型糖尿病中的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 材料

研究對象：選取2017年2月-2018年2月我院收治的2型糖尿病患者50例作為本次研究組，其中包括男性患者23例，女性患者27例，年齡45-68歲，平均年齡(50.2±3.5)歲；同時選取同期于我院進行健康體檢的健康志愿者30人作為本次研究的正常組，其中男性14人，女性16人，年齡43-68歲，平均年齡(49.8±4.1)歲。兩組研究對象性別比例、平均年齡等一般資料相比較均無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性(P>0.05)。排除標準：排除高血壓患者；排除病歷資料不全患者；排除惡性腫瘤患者；排除長期服用抗糖尿病藥物患者；排除腎臟器官、功能嚴重衰竭患者；排除精神疾病患者。本文研究所有研究對象及家屬均知情，簽署家屬知情通知書，并獲得我院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1免疫比濁法檢測hs-CRP水平 分別采集兩組研究對象的清晨空腹狀態(tài)下靜脈血5 ml，置入抗凝試管中，使用離心機以3 000 r/min的速度進行血清分離，20 min后提取樣本血清至試管，然后放入-80℃的冰箱冷藏待測?？乖贵w結(jié)合在稀釋過程中反應(yīng)形成可溶的免疫復(fù)合物，加入聚乙醇，自液相被析出，產(chǎn)生微粒，溶液產(chǎn)生濁度，當(dāng)其濃度固定時，形成的免疫復(fù)合物隨著抗原量的增加升高，溶液濁度也逐漸加重，成正比。利用比濁計測定光的密度值，分析血清hs-CRP的表達水平。

1.2.2高效液相色譜法檢測血清chemerin水平 將待測的標本注入在色譜柱中，在壓力下進行固定相移動，經(jīng)過固定相與待測標本中不同物質(zhì)相互作用，物質(zhì)會依次的離開色譜柱，應(yīng)用檢測器捕捉物質(zhì)信號，嚴格按照高效液相色譜儀說明書上的操作步驟進行，對比分析所測的chemerin水平。

1.2.3放射免疫測定血清LPT水平 采用氯氨T法制備125I-LPT試劑，在水浴中和LPT聯(lián)合制備125I-LPT。在制待測標本中加入0.01 mol/L100 μl的PBS，加入稀釋抗體100 μl以及100 μl125I-LPT試劑，充分混合后在4℃的環(huán)境下放置1 d，第2天取出加入14%100 μl PEG溶液和100 μl二抗，混合均勻離心處理并棄上清液在γ儀上觀察其放射性計數(shù)。

1.2.4乙酰丙酮法檢測TG水平 待測標本加入異丙醇提取血清中的甘油三酯，氧化鋁吸附磷脂和游離的甘油，氫氧化鈉鉀皂化，過碘酸鈉氧化甘油生成甲醛，和乙酰丙酮在銨離子和加熱的條件下產(chǎn)生黃色的3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶，其顯色的程度和血清中的甘油三脂的濃度水平成正比。對比分析TG水平。

1.2.5空腹血糖檢測 抽取兩組研究對象空腹靜脈血2 ml，加入肝素抗凝試管中，使用高效液相色譜法對兩組研究對象空腹血糖進行檢測，將待測的標本注入在色譜柱中，在壓力下進行固定相移動，經(jīng)過固定相與待測標本中不同物質(zhì)相互作用，物質(zhì)會依次的離開色譜柱，應(yīng)用檢測器捕捉物質(zhì)信號，嚴格按照高效液相色譜儀說明書上的操作步驟進行，比對分析所測的空腹血糖水平。

1.2.6雙抗體夾心法檢測血清尿酸和膽固醇水平 取已提取的兩組研究對象血清樣本，使用雙抗體夾心法對其血清尿酸及膽固醇水平進行檢測。將待測血清吸附在微量滴板的小孔里進行洗滌，加入待測抗原，如過兩者是特異的，則會產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng)，把多出來的抗體洗除，然后加入與待測抗原中呈現(xiàn)出特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使其形成“夾心”現(xiàn)象，接著加入該酶的底物，如果能看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，則說明在孔壁上存在著相對應(yīng)的抗原，從而通過顯色后讀取濃度的具體數(shù)據(jù)來計算出血清尿酸和膽固醇的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。計量資料采用均數(shù)±標準差(mean±SD)描述，兩組間比較采用配對t檢驗，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，P值<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義的標準。采用SAS9.4軟件對單獨檢測和聯(lián)合檢測的特異性、敏感度和準確度進行計算分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象臨床常規(guī)指標比較

如表1所示，對兩組研究對象臨床常規(guī)指標進行統(tǒng)計比較，2型糖尿病組患者體重指數(shù)、空腹血糖、血清尿酸以及膽固醇指標水平均高于正常組對象，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組研究對象臨床常規(guī)指標比較

2.2 兩組研究對象血清hs-CRP、chemerin表達水平對比

如表2所示，對兩組研究對象血清hs-CRP、chemerin表達水平進行對比，2型糖尿病組患者hs-CRP、chemerin表達水平均明顯高于正常組研究對象，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 兩組研究對象血清hs-CRP、chemerin表達水平對比

2.3 兩組研究對象血清TG、LP表達水平對比

如表3所示，對兩組研究對象TG、LP表達水平進行對比，2型糖尿病組患者TG、LP表達水平均顯著高于正常組研究對象，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 兩組研究對象血清TG、LP表達水平對比

2.4 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP與2型糖尿病患者臨床特征的關(guān)系

如表4所示，不同性別和年齡的2型糖尿病患者hs-CRP、TG、chemerin及LP表達水平比較不具有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，體重指數(shù)、空腹血糖、血清尿酸以及膽固醇高水平表達的2型糖尿病與低水平表達的2型糖尿病患者hs-CRP、TG、chemerin及LP表達水平比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

2.5 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP單獨檢測與聯(lián)合檢測的診斷效能對比

如表5所示，血清hs-CRP、TG、chemerin及LP聯(lián)合檢測的特異性、敏感度、準確度均顯著高于單獨檢測。

3 討論

2型糖尿病是一種與生活方式密切相關(guān)的疾病，而且2型糖尿病還伴有多種并發(fā)癥，已經(jīng)成為世界第三大疾病，嚴重影響著患者的生活質(zhì)量[5]。在2型糖尿病的發(fā)病過程中，患者體內(nèi)的特異性指標會發(fā)生改變，參與疾病的發(fā)生和發(fā)展，所以對這些生物指標的檢測成為了觀察患者病變程度的主要依據(jù)[6]。

超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)是一種敏感的生理標志物，與胰島素抵抗、高血糖以及2型糖尿病有著明確的相關(guān)性。對機體內(nèi)注射hs-CRP能夠引發(fā)致糖異生，從而導(dǎo)致代償性超胰島素血癥和高血糖癥的并發(fā)，說明在糖尿病的發(fā)病機制中，炎癥因素起到了一定的作用[7,8]。糖尿病可能是由于自身免疫系統(tǒng)啟動的進行性細胞因子介導(dǎo)出現(xiàn)的急性反應(yīng)表現(xiàn)，而hs-CRP具有自然宿主防御的特征，hs-CRP的免疫功能主要包括調(diào)節(jié)血小板活性。增加白細胞的反應(yīng)性、補體結(jié)合以及炎癥部位清除細胞碎屑等[9,10]。在本研究中發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者的hs-CRP表達水平較高，說明hs-CRP參與了2型糖尿病的發(fā)病過程，在2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展中起到了重要作用，對hs-CRP的監(jiān)測能夠?qū)颊呒膊〉牟∽兂潭冗M行了解，同時hs-CRP也是2型糖尿病患者在接受治療過程的一個受控穩(wěn)定性指標。有相關(guān)研究表明，脂肪組織是一個重要的內(nèi)分泌器官，能夠分泌出與機體能量代謝相關(guān)的激素和細胞因子，而且這些因子在2型糖尿病的發(fā)病機制中都具有重要的作用，并且越來越受到人們的重視[11]。Chemerin是近些年發(fā)現(xiàn)的脂肪細胞因子新成員，也是一種脂肪細胞分泌出來具有趨化作用的膜結(jié)合蛋白，在人體的多種組織中廣泛表達，包括腎上腺、肝臟、胰腺、卵巢、胎盤、皮膚、肺等，主要表達于肝臟和肺[12,13]。Chemerin在組織損傷部位以及炎癥部位具有激活、募集免疫細胞的提點，所以被認為可能參與了脂肪組織的炎性反應(yīng)。由專家學(xué)者指出，Chemerin能夠?qū)χ炯毎姆只⒋x起到調(diào)節(jié)作用，還會促進脂肪分解效應(yīng)的產(chǎn)生，增強胰島素刺激引起的葡萄糖攝取[14]。在本文研究中，2型糖尿病血清中Chemerin的表達水平很高，說明Chemerin在2型糖尿病的發(fā)病過程中發(fā)揮了重要作用，對脂肪細胞的分化、脂肪代謝以及糖代謝都造成了一定的影響。

表4 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP與2型糖尿病患者臨床特征的關(guān)系

表5 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP單獨檢測與聯(lián)合檢測的診斷效能對比

有研究指出，甘油三酯(TG)表達水平偏高的患者患有2型糖尿病的幾率更高，其發(fā)病機制可能是由于TG的高表達導(dǎo)致內(nèi)皮受損以及氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，從而激活NF-κB通路，引起炎癥介質(zhì)的高表達，致使血糖升高[15,16]。TG升高在2型糖尿病的形成過程中發(fā)揮著重要的作用，而且高水平的TG還能夠引起胰腺炎，使胰島素分泌障礙，導(dǎo)致1型糖尿病的發(fā)生，甚至還會引起不可逆性胰腺炎的發(fā)生，形成永久性的1型糖尿病。雖然可以通過藥物將TG的高表達控制在正常水平范圍內(nèi)，但是仍會表達為高血糖[17]。在本文研究中，2型糖尿病患者TG水平有著更高的表達，說明TG的升高誘導(dǎo)炎癥介質(zhì)的高表達，導(dǎo)致患者血糖升高，促使了2型糖尿病的發(fā)生。血清瘦素(LP)是一種慢性因子，也屬于一種激素，主要的分泌場所是機體的脂肪組織，對患者的食欲有抑制作用，而且還會減輕患者的體重，避免肥胖情況的發(fā)生，同時還會對胰島素的分泌有一定的抑制效果，使胰島素在外周的敏感性提高，血清瘦素在人體中高水平表達，能夠增強機體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，加快炎癥反應(yīng)的速度，也會使體內(nèi)的炎癥因子聚集增多，導(dǎo)致胰島素出現(xiàn)抵抗現(xiàn)象[18]。瘦素進入血液循環(huán)后，通過與定位于外周組織、中樞組織以及其它多種形式存在的受體瘦素相結(jié)合，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，對機體中許多生理系統(tǒng)及代謝通路造成影響。有相關(guān)研究表明，瘦素參加了胰島素抵抗的形成，在2型糖尿病的發(fā)病過程中發(fā)揮著一定作用[19]。在生理狀態(tài)下，瘦素能夠通過多種機制對胰島素分泌造成抑制作用，使胰島素分泌能力下降，導(dǎo)致胰島素抵抗的出現(xiàn)。本文2型糖尿病患者血清中瘦素含量明顯增高，說明瘦素的升高加快了機體炎癥反映的速度，同時對胰島素產(chǎn)生的抑制作用，在2型糖尿病的發(fā)展中起到了重要作用，與王立坤[20]在其研究中的結(jié)論一致。

綜上訴述，血清超敏C反應(yīng)蛋白、TG、chemerin及瘦素均參與了2型糖尿病的發(fā)病過程，且4項指標聯(lián)合檢測的特異度、敏感度和準確度較高，為型糖尿病的診斷及治療提供重要的價值幫助。