何麗娟 畢世杰 蔣慶峰

[摘要] 目的 觀察比較不同發(fā)育天數(shù)凍融囊胚移植的臨床結(jié)局。方法 回顧性分析該院2014年1月—2017年12月438例行凍融復(fù)蘇胚移植患者臨床診療資料，所有患者在征得個(gè)體同意的情況下，按照囊胚不同發(fā)育天數(shù)將所有患者均分為A組與B組，A組219例患者待個(gè)體患者子宮內(nèi)膜厚度在8 mm以上，胚胎發(fā)育5 d，復(fù)蘇5 h后移植，B組219例患者待個(gè)體患者子宮內(nèi)膜厚度在8 mm以上，胚胎發(fā)育6 d，復(fù)蘇5 h后移植，比較兩組患者凍融復(fù)蘇胚移植結(jié)果。 結(jié)果 A組患者胚胎復(fù)張率、妊娠率分別為97.7%、66.2%，均明顯高于B組（χ2=6.576、6.587，P<0.05）。A組患者流產(chǎn)率、異位妊娠率分別為6.4%、1.4%，均明顯低于B組（χ2=5.987、5.891，P<0.O5）。 結(jié)論 胚胎發(fā)育天數(shù)可影響凍融胚胎移植成功率，胚胎發(fā)育5 d更有利于胚胎著床，從而提高個(gè)體妊娠率，降低流產(chǎn)以及異位妊娠發(fā)生率。

[關(guān)鍵詞] 不同發(fā)育天數(shù)；凍融囊胚移植；臨床結(jié)局

[中圖分類號(hào)] R711.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）02（b）-0062-03

Comparison of Clinical Outcomes of Freeze-thaw Blastocyst Transfer in Different Development Days

HE Li-juan， BI Shi-jie， JIANG Qing-feng

Department of Reproductive Medicine， Chuxiong People's Hospital， Chuxiong， Yunnan Province， 675000 China

[Abstract] Objective To observe the clinical outcomes of freeze-thaw blastocyst transfer with different development days. Methods A retrospective analysis of 438 cases of frozen-thawed resuscitation embryo transfer in our hospital from January 2014 to December 2017. All patients were enrolled in accordance with the different development days of blastocysts and were divided into group A and group B， group A of 219 patients with individual patients with endometrial thickness of 8mm or more， embryo development for 5 days， resuscitation after 5 hours of transplantation， group B of 219 patients to individual patients with endometrial thickness of 8 mm or more， the embryos were developed for 6 days and transplanted 5 hours after resuscitation. The results of freeze-thaw resuscitation embryo transfer in the two groups were compared. Results The embryo recruitment rate and pregnancy rate in group A were 97.7% and 66.2%， respectively， which were significantly higher than those in group B（χ2=6.576， 6.587， P<0.05）. The abortion rate and ectopic pregnancy rate of group A were 6.4% and 1.4%， respectively， which were significantly lower than those of group B（χ2=5.987， 5.891， P<0.05）. Conclusion The number of embryo development days can affect the success rate of frozen-thawed embryo transfer. Embryo development for 5 days is more conducive to embryo implantation， thus improving individual pregnancy rate and reducing the incidence of abortion and ectopic pregnancy.

[Key words] Different development days； Freeze-thaw blastocyst transfer； Clinical outcome

近年些胚胎移移植技術(shù)在不斷的完善和發(fā)展，胚胎移植成功率與個(gè)體胚胎質(zhì)量、母體準(zhǔn)備情況具有緊密的聯(lián)系，在保證卵子以及精子質(zhì)量良好的情況下，進(jìn)行囊胚培養(yǎng)對(duì)挑選優(yōu)質(zhì)胚胎，提高個(gè)體妊娠率顯的格外重要，囊胚移植前凍融歸于囊胚培養(yǎng)的關(guān)鍵一步[1-3]。該次實(shí)驗(yàn)回顧性分析該院2014年1月—2017年12月438例行凍融復(fù)蘇胚移植患者臨床診療資料，探究囊胚不同發(fā)育天數(shù)凍融復(fù)蘇胚移植結(jié)果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究經(jīng)醫(yī)院倫理會(huì)同意，方便選取該院接收的438例行凍融復(fù)蘇胚移植患者為該次研究對(duì)象，在征得個(gè)體患者同意的情況下按照囊胚不同發(fā)育天數(shù)將所有患者均分為A組（219例）與B組（219例），A組219例行凍融復(fù)蘇胚移植患者，年齡在29～37歲，患者平均年齡在（32.6±2.3）歲，不孕時(shí)間最短為1年，不孕時(shí)間最長(zhǎng)為3年以上，患者平均不孕時(shí)間在（2.4±0.5）年，患者胚胎移植口內(nèi)膜平均厚度（9.54±0.56）mm。B組219例行凍融復(fù)蘇胚移植患者，年齡在28～39歲，患者平均年齡在（31.7±2.1）歲，不孕時(shí)間最短為1年，不孕時(shí)間最長(zhǎng)為3年以上，患者平均不孕時(shí)間在（2.3±0.4）年，患者胚胎移植口內(nèi)膜平均厚度（9.51±0.56）mm。兩組患者在年齡、不孕時(shí)間、胚胎移植口內(nèi)膜平均厚度等一般資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。該次研究均采用雙囊胚移植，患者年齡在40歲以內(nèi)，子宮內(nèi)膜厚度在8～12 mm，均嚴(yán)格按照相關(guān)系統(tǒng)操作常規(guī)促排卵治療后預(yù)排卵日，B超引導(dǎo)下經(jīng)陰道穿刺取卵。

1.2 方法

1.2.1 囊胚培養(yǎng) 對(duì)個(gè)體患者進(jìn)行胚胎移植前個(gè)體評(píng)分，而后給予個(gè)體患者常規(guī)長(zhǎng)方案或短方案進(jìn)行促排卵治療，將卵子與精子通過(guò)常規(guī)體外授精以及卵胞漿內(nèi)單精子注射技術(shù)進(jìn)行誘使其受精。受精第3天將胚胎移植至G2培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。A組在培養(yǎng)第5天后選擇囊胚擴(kuò)張，透明帶變薄，囊胚開(kāi)始孵化或已完全孵化，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松的囊胚進(jìn)行凍融。B組在培養(yǎng)第6 d后選擇囊胚擴(kuò)張，透明帶變薄，囊胚開(kāi)始孵化或已完全孵化，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松的囊胚進(jìn)行凍融.

1.2.2 囊胚冷凍與復(fù)蘇 將選擇好的囊胚放入30 uL培養(yǎng)液中利用激光破膜儀系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行人工皺縮。當(dāng)囊腔接近完全皺縮時(shí)將囊胚放入冷凍平衡液中1 min，而后將其放入ES基礎(chǔ)平衡液中2 min，期間用吸管反復(fù)吹吸胚胎，使其處于平衡狀態(tài)，將胚胎放于載體上用液氮進(jìn)行保存。取出待復(fù)蘇囊胚，進(jìn)行解凍抑制。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組兩組患者均進(jìn)行胚胎移植，一次移植2枚胚胎，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組兩組患者解凍1、2 h后均在顯微鏡下觀察單個(gè)囊胚恢復(fù)情況，并在B超下經(jīng)陰道行宮腔內(nèi)囊胚移植術(shù)，囊胚移植2周后檢測(cè)兩組患者血人絨毛膜促性腺激素（HCG），若患者血HCG檢測(cè)為陽(yáng)性，在移植4周后行B超檢查，B超檢測(cè)時(shí)檢出孕囊胎心則表示臨床妊娠，若妊娠12周后胎停發(fā)育或妊娠物排出則診斷為早期流產(chǎn)。

1.3 觀察指標(biāo)

①觀察比較A、B兩組個(gè)體胚胎復(fù)張率、妊娠率。

②觀察比較A、B兩組個(gè)體流產(chǎn)率、異位妊娠率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件統(tǒng)計(jì)分析資料；其中計(jì)量資料用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胚胎移植情況比較

觀察比較A、B兩組個(gè)體胚胎復(fù)張率、妊娠率，具體情況，A組患者胚胎復(fù)張率明顯高于B組（97.7% vs 93.6%），A組患者妊娠率明顯高于B組（66.2% vs 51.6%），數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 胚胎移植結(jié)果比較

觀察比較A、B兩組個(gè)體流產(chǎn)率、異位妊娠率，具體情況，A組患者流產(chǎn)率明顯低于B組（6.4% vs 8.7%）、A組患者異位妊娠率明顯低于B組（1.4% vs 2.8%），數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

胚胎移植又被稱為受精卵移植，通過(guò)體外受精方式或其他方式得到胚胎，并將其移植到同種生理狀態(tài)雌性個(gè)體體內(nèi)，從而促使其發(fā)育成新個(gè)體的一種技術(shù)[4-5]。近些年我國(guó)接受胚胎移植的個(gè)體例數(shù)逐漸增多，提高胚胎移植成功率，降低胚胎移植后流產(chǎn)率以及異位妊娠率具有較高的臨床意義[6]。囊胚具有著床能力，相關(guān)研究顯示雙囊胚移植與單囊胚移植相比，可有效提高妊娠率，故囊胚移植過(guò)程中多移植兩個(gè)囊胚。除此之外，相關(guān)臨床研究認(rèn)為囊胚移植過(guò)程中囊胚凍融可在一定程度提高母體內(nèi)膜對(duì)囊胚的耐受性，但目前對(duì)囊胚發(fā)育天數(shù)存在一定的爭(zhēng)議。囊胚在凍融前應(yīng)合理評(píng)估囊胚質(zhì)量，挑選優(yōu)質(zhì)囊胚，淘汰質(zhì)量較差的囊胚，從而保證囊胚正常發(fā)育與子宮內(nèi)膜發(fā)育同步。相關(guān)研究學(xué)者人為囊胚發(fā)育時(shí)間越短，囊胚細(xì)胞中DNA等遺傳因子損失也就越少，發(fā)育6 d的囊胚與發(fā)育5 d的囊胚因所含DNA等微量元素的缺失，其發(fā)育速度較慢，發(fā)育6 d的囊胚凍融復(fù)蘇過(guò)程中抗冷凍能力較低，可在一定程度上影響胚胎移植成功率，降低胚胎復(fù)張率、妊娠率，提高妊娠后流產(chǎn)以及異位妊娠發(fā)生率[7-13]。囊胚凍融后是否出現(xiàn)凍融損傷可直接影響囊胚發(fā)育潛能，因此在囊胚解凍后1～2 h內(nèi)應(yīng)使用顯微鏡觀察囊胚，從囊胚形態(tài)上判斷囊胚各個(gè)細(xì)胞細(xì)胞膜折光性及透明帶完整性，囊胚解凍后觀察囊胚外形是目前判斷囊胚潛在發(fā)育能力的重要標(biāo)志之一。相關(guān)臨床研究顯示凍融囊胚在解凍后15 min即可觀察后囊胚腔增大的現(xiàn)象，解凍后2 h觀察囊胚腔擴(kuò)張情況，會(huì)有部分囊胚出現(xiàn)孵出現(xiàn)象，有一部分才剛剛開(kāi)始擴(kuò)張，因此囊胚質(zhì)量及凍融損傷均是影響囊胚腔擴(kuò)容重要影響因素，在凍融的過(guò)程中可出現(xiàn)部分囊胚細(xì)胞死亡，從而致使囊胚解凍過(guò)程中囊胚腔的生成。凍融囊胚解凍過(guò)程中觀察囊胚腔擴(kuò)張直接預(yù)示著囊胚凍融后滋養(yǎng)層細(xì)胞與囊胚內(nèi)部細(xì)胞團(tuán)的關(guān)系，可是凍融囊胚發(fā)育潛能重要標(biāo)志之一，若囊胚凍融患后滋養(yǎng)層細(xì)胞與囊胚內(nèi)部細(xì)胞團(tuán)分離，凍融囊胚則失去擴(kuò)張能力以及后續(xù)發(fā)育潛能，這樣的囊胚移植后不能著床，著床后其流產(chǎn)率高。呂興鈺等臨床研究顯示發(fā)育5 d的囊胚蘇醒移植后與發(fā)育6 d的囊胚相比，其臨床結(jié)局不存在明顯差異[14]。但是有部分研究結(jié)論與該次研究結(jié)果相反，李城，等臨床研究顯示發(fā)育5 d的的囊胚冷凍復(fù)蘇胚胎移植后其妊娠率為56.48%，明顯高于發(fā)育6 d的凍融胚胎妊娠率44.85%，該研究認(rèn)為發(fā)育6 d的囊胚其發(fā)育潛能低于發(fā)育5 d的囊胚，胚胎發(fā)育天數(shù)可直接影響胚胎發(fā)育速度。該次研究顯示發(fā)育5 d的囊胚冷凍復(fù)蘇胚胎移植后其妊娠率為66.2%，明顯高于發(fā)育6 d的凍融胚胎妊娠率，與李城等臨床研究結(jié)果一致[15]。該次研究在既往臨床研究的基礎(chǔ)上比較發(fā)育5 d與發(fā)育6 d的囊胚冷凍復(fù)蘇胚胎移植后其胚胎復(fù)張率、流產(chǎn)率以及異位妊娠發(fā)生率等相關(guān)數(shù)據(jù)，研究具有一定的進(jìn)步意義。該次研究顯示為發(fā)育5 d的囊胚冷凍復(fù)蘇胚胎移植后其胚胎復(fù)張率97.7%，明顯高于發(fā)育6 d的凍融胚胎胚胎復(fù)張率，且發(fā)育5 d的囊胚冷凍復(fù)蘇胚胎移植后其流產(chǎn)率為6.4%，明顯高于發(fā)育6 d的凍融胚胎流產(chǎn)率，且發(fā)育5 d的囊胚冷凍復(fù)蘇胚胎移植后其異位妊娠率為1.4%，明顯高于發(fā)育6 d的凍融胚胎異位妊娠率，由此可見(jiàn)，發(fā)育5 d后進(jìn)行凍融胚胎移植與發(fā)育6 d后進(jìn)行凍融胚胎移植相比，發(fā)育5 d后進(jìn)行凍融胚胎移植更有利于胚胎著床。

綜上所述，發(fā)育5 d后進(jìn)行凍融胚胎移植能有效提高妊娠率，降低流產(chǎn)以及異位妊娠率，有較高的臨床推廣價(jià)值。

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（收稿日期：2018-11-14）