秦海斌 溫 海 孫 勇 宋珍華 高一龍 馬大君 朱 騫

論文受以下基金項目資助：十三五國家重點研發(fā)計劃（2016YFC0800310），公安部科技強警基礎(chǔ)工作專項項目（2015GABJC32）。

警犬訓(xùn)練與實戰(zhàn)應(yīng)用中，公犬在膽量、兇猛性、耐力和持久性等警用性能上要明顯優(yōu)于母犬，且母犬存在發(fā)情周期，發(fā)情母犬不僅自身的訓(xùn)練和使用效率下降，其在訓(xùn)練和實戰(zhàn)場地散發(fā)的信息激素會干擾公犬的作業(yè)，因而警犬訓(xùn)練、使用單位在選擇受訓(xùn)犬時會更趨向于公犬，導(dǎo)致公犬數(shù)量供不應(yīng)求、優(yōu)質(zhì)母犬卻面臨淘汰的不平衡供求現(xiàn)象存在，造成巨大的資源浪費。

近幾年，在警犬的性別控制方面出現(xiàn)了多種新型技術(shù)，但此類技術(shù)對儀器設(shè)備及下游配套繁育技術(shù)要求很高，目前在警犬繁育工作中并未大規(guī)模應(yīng)用。因此，為了保證母犬訓(xùn)練使用的穩(wěn)定性，母犬被選做受訓(xùn)犬后通常會被施以去勢術(shù)，雖然去勢在一定程度上解決了我國警犬犬源不足的問題，但卵巢及子宮的摘除對警犬健康、行為和神經(jīng)類型的影響方面尚存在較大爭議。有學(xué)者認為卵巢摘除后體內(nèi)雌激素、孕激素水平的變化會對犬的骨骼發(fā)育、精神狀態(tài)、認知行為產(chǎn)生不良影響，也有研究證實雌性動物去勢后會降低生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)生，同時增加攝食量和肌肉增長速度，提升運動機能?？傊壳皩τ谌莺竽溉眯阅苁欠癜l(fā)生變化，以及這種變化能否提升母犬的訓(xùn)練使用效率仍未得到科學(xué)證明。

本實驗對幼訓(xùn)期母犬施以雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，以此去勢模型為基礎(chǔ)，通過測量去勢后母犬體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的動態(tài)變化，與未去勢母犬的相應(yīng)指標進行比較，并結(jié)合其訓(xùn)練成績進行對比分析，旨在從中樞神經(jīng)遞質(zhì)方面闡述母犬去勢對警犬訓(xùn)練使用的影響，證明去勢對警犬技術(shù)的積極意義。

一、材料與方法

（一）實驗動物與分組

健康幼齡母犬（4～6月齡）共16頭，經(jīng)初步訓(xùn)練后確定在膽量、銜取、興奮性等主要警用性能方面無缺陷，隨機分為2組，實驗組、對照組各8頭。實驗組在6月齡左右施以卵巢摘除術(shù)，經(jīng)3周康復(fù)治療后投入正常訓(xùn)練，康復(fù)期飼養(yǎng)于犬用不銹鋼代謝籠；對照組不經(jīng)手術(shù)處理，3周后直接投入訓(xùn)練。

（二）母犬卵巢摘除

術(shù)前10min肌注安痛定注射液2～5mL，術(shù)部可用普魯卡因作局麻。術(shù)部常規(guī)消毒，右手持手術(shù)刀，將皮膚髖結(jié)節(jié)前下方切開3～5cm切口，鈍性分離腹肌，右手食指在髖結(jié)節(jié)前下方探摸子宮角，用指尖壓住沿腹壁向外鉤出，在子宮角末端卵巢被一層厚脂肪包裹，按壓質(zhì)硬，呈塊狀，如蠶豆大小，和脂肪一起結(jié)扎卵巢后切除。牽引子宮角，導(dǎo)出另一側(cè)卵巢，用同法結(jié)扎切除。將兩側(cè)子宮角納入腹腔，撒布青霉素粉80萬IU，常規(guī)縫合腹膜、皮膚，術(shù)部清洗消毒。1周后拆線。

（三）樣本的采集

實驗組的尿液采集：手術(shù)2周后采集康復(fù)后尿液，通過犬用不銹鋼代謝籠的尿液收集盒采集24h尿液，記錄尿液體積，按照1%體積比加入濃鹽酸，作為待檢尿液。實驗組血清采集：在收集尿液完成后，用促凝管采自犬前肢內(nèi)側(cè)靜脈血1mL，2000r/min離心后收集血清，作為待檢血清。對照組的尿液和血清采集方法同上。

（四）單胺類神經(jīng)遞質(zhì)指標的測定

樣本前處理：分別將血清樣本、標準品、內(nèi)標品取出平衡至室溫。取血清250μL加入內(nèi)標400μL，再加入乙腈200μL混勻，11000r/min離心5min。取上清液，用1mL的移液槍轉(zhuǎn)移0.7mL上清液到另外一個1.5mLEP管，在-80℃預(yù)冷凍后，用真空冷凍干燥器凍干2h，剩余體積少于20μL；依次向上述1.5mLEP管加入30μL 0.1M NaOH溶液和50μL丹磺酰氯乙腈溶液(4mg/mL)，旋渦混合30s，然后避光反應(yīng)5min；反應(yīng)完后每管加入7μL反應(yīng)終止劑和20μL超純水，旋渦混合30s后，再次在4℃下11000r/min離心5min，取上清液80μL于96 孔板準備液質(zhì)上樣分析。

色譜條件： 流動相A1為1%甲酸水溶液，流動相B1為乙腈( 含1%甲酸)；流速為0.5mL/min。按A1∶B1=65%∶35%等度洗脫。

質(zhì)譜分析：將萃取得到的樣品上機檢測，每次進樣量為15μL。離子化模式為電噴霧( electrospray ionization，ESI) 正離子模式。質(zhì)譜儀設(shè)置參數(shù)見表1

（五）去勢前后母犬主要警用行為性狀的測量

依據(jù)《警犬銜取與膽量行為性狀檢測規(guī)范》（該規(guī)范文件中涉及的檢測方法將另文發(fā)表）中規(guī)定的警犬銜取、膽量、興奮性、占有欲、持久性、穩(wěn)定性等20個測量指標，對去勢前后母犬的主要行為性狀進行評分測量，并與同齡未去勢母犬的相同指標進行對比分析，評價去勢對母犬主要警用行為的影響。

（六）去勢母犬的訓(xùn)練及考核

去勢后的母犬，由訓(xùn)導(dǎo)員隨機選擇相應(yīng)訓(xùn)練項目（緝毒、搜爆）投入警犬培訓(xùn)，培訓(xùn)期3個月，培訓(xùn)結(jié)束后對警犬進行常規(guī)考核，考核內(nèi)容包括服從、搜索形式、示警準確性、行為表現(xiàn)等作業(yè)能力，與未去勢母犬及公犬的訓(xùn)練成績進行比較分析，評價去勢對訓(xùn)練成績的影響。

（七）數(shù)據(jù)統(tǒng)計

去勢前后尿液及血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的測量值的差異性分析、去勢前后母犬主要警用行為性狀的測量值的差異性分析、犬的訓(xùn)練成績差異性分析，均采用SPSS 20.0進行兩獨立樣本的非參數(shù)檢驗(Mann-Whitney U 秩和檢驗)。

二、測量結(jié)果

（一）尿液中單胺類激素的變化

研究中共采集到的去勢前幼犬尿液32份，實驗組（去勢前后）母犬尿液16份，對照組（不去勢）母犬尿液16份，利用質(zhì)譜測定24h尿液中的腎上腺素、去甲腎上腺素、尿多巴胺，取其均值進行比較分析，測定結(jié)果見表2，統(tǒng)計分析顯示，與去勢前相比，實驗組和對照組的各個指標在去勢后都相應(yīng)升高；去勢后實驗組各指標均低于對照組，但在統(tǒng)計學(xué)分析中實驗組和對照組無顯著差異。說明去勢術(shù)并未影響尿液中的激素水平。

表1 質(zhì)譜檢測參數(shù)設(shè)置

表2 24h尿液中激素水平測量值

表3 血清中單胺類激素及其代謝物水平的測量值

（二）血清中單胺類激素及其代謝物的水平變化

研究中共采集到去勢前實驗組、對照組幼犬血清16份，去勢后實驗組血清8份，對照組血清8份，利用質(zhì)譜測定血清中的腎上腺素(E)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)及其代謝物變甲腎上腺素（MN）、去變甲腎上腺素(NMN)、高香草酸(HVA)、香草扁桃酸(VMA)，取其均值進行比較分析，測定結(jié)果見表3。統(tǒng)計顯示，與去勢前相比，血清中單胺類激素及其代謝物水平多數(shù)呈現(xiàn)增高趨勢，香草扁桃酸呈現(xiàn)降低趨勢；去勢后實驗組所有指標均高于對照組，但對照組與實驗組間的統(tǒng)計學(xué)差異不顯著。去勢術(shù)并未影響母犬在短期內(nèi)分泌激素的能力。

（三）去勢前后母犬主要警用行為性狀的測量

對去勢前后母犬的主要行為性狀進行評分測量，20個指標的單項指標分數(shù)為6分，總分為120分，以總分的均值進行對比分析，去勢前、實驗組、對照組的得分見表4。結(jié)果顯示：與去勢前相比，實驗組和對照組的警犬銜取、膽量、興奮性、占有欲、持久性、穩(wěn)定性等方面的得分總值均有提高，但實驗組與對照組的得分值無統(tǒng)計學(xué)差異。

（四）去勢母犬的訓(xùn)練及考核成績比較

8頭去勢母犬最終被選擇投入到緝毒、搜爆基礎(chǔ)能力培訓(xùn)，培訓(xùn)過程中去勢母犬在服從、搜索形式、示警準確性、行為表現(xiàn)、體能、耐力等方面與其他未去勢母犬未見明顯的差別，但在攝食量上明顯增加。訓(xùn)練成績的統(tǒng)計分數(shù)見表5，實驗組與對照組的訓(xùn)練成績無統(tǒng)計學(xué)差異。

三、討論

長期以來對犬的去勢或絕育的必要性一直存在不同的觀點，絕育對犬的健康和行為的影響存在正反兩個方面。有利方面包括：去勢能夠避免一系列相關(guān)疾病的發(fā)生，降低母犬患乳腺癌、子宮積膿、卵巢瘤、卵巢囊腫、假孕和難產(chǎn)等疾病幾率，降低公犬發(fā)生前列腺增生和感染，減小會陰疝的發(fā)生率，預(yù)防肛周腺瘤的發(fā)生和減少公犬的尿液標記；不利方面包括，對于大型犬，絕育后發(fā)生骨質(zhì)疏松、十字韌帶斷裂、患骨肉瘤、遺尿的機率增加，攻擊性增強。因此，母犬是否進行絕育需要充分權(quán)衡利弊才能做出選擇。

表4 主要警用行為測驗得分值

表5 去勢后母犬的訓(xùn)練成績

但對工作犬而言，絕育往往是保證實戰(zhàn)效率的必需措施，除了關(guān)注犬的健康，工作犬領(lǐng)域更加關(guān)注去勢對學(xué)習(xí)、行為和運動能力的影響，觀察發(fā)現(xiàn)，與非絕育犬相比公犬去勢后往往更加溫順、母犬的攻擊性會增強，這與犬體內(nèi)激素代謝水平的改變有關(guān)，但對于去勢后犬體內(nèi)激素水平如何變化及這種變化能否對犬的學(xué)習(xí)、行為和運動的產(chǎn)生不良影響，目前尚缺乏科學(xué)的研究。

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)主要包含腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）、 5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA），他們在哺乳動物的神經(jīng)調(diào)控中發(fā)揮重要作用：多巴胺是下丘腦和腦垂體腺中的關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)，多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)在快感與行為動機方面起著極其重要的作用，其含量或者功能異常以及其代謝產(chǎn)物異常可能引發(fā)抑郁癥。同時，腦內(nèi)多巴胺與軀體運動功能的加強、垂體內(nèi)分泌機能的加強以及精神活動的調(diào)節(jié)都有關(guān)系；去甲腎上腺素可引起動物嗜睡，體溫降低，出現(xiàn)攝食行為，腦內(nèi)去甲腎上腺素減少會表現(xiàn)出精神抑郁，反之過量會表現(xiàn)出狂躁；腎上腺素在經(jīng)歷刺激（例如興奮、恐懼、緊張等）時被大量釋放，導(dǎo)致呼吸加快（提供大量氧氣），心跳與血液流動加速，瞳孔放大，為身體活動提供更多能量，使反應(yīng)更加快速；也有研究認為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與動物的學(xué)習(xí)和記憶能力有密切關(guān)系。因此，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的水平變化，能夠反映出哺乳動物精神（興奮與抑制）、攝食、運動、學(xué)習(xí)、記憶等行為是否處于正常狀態(tài)，因此在人類醫(yī)學(xué)中通常作為抑郁癥、狂躁癥、焦慮癥、注意缺陷障礙的醫(yī)學(xué)評級指標，對評價去勢母犬精神狀態(tài)及主要警用行為同樣具有重要意義?；谏鲜隹茖W(xué)原因，本文以單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化為研究點，討論去勢對母犬警用行為的影響。

分析發(fā)現(xiàn)，母犬去勢后尿液中的腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）與正常對照犬無明顯差異；實驗組血液中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物的水平的變化高于對照組母犬，說明去勢后母犬對外界刺激的反應(yīng)更加敏感；但幼犬主要警用行為的測量成績以及去勢母犬的訓(xùn)練成績，與非去勢母犬不存在明顯差異，說明去勢不影響母犬的訓(xùn)練及使用。綜合上述結(jié)果可知，去勢后母犬的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的代謝發(fā)生了一定程度的改變，但這種改變與正常犬比較并不顯著，且此改變不影響犬的學(xué)習(xí)、行為、運動等主要警用行為，對犬的訓(xùn)練成績不存在不良影響，結(jié)合去勢對健康的有利方面，我們認為母犬去勢對于保障工作犬的訓(xùn)練和實戰(zhàn)應(yīng)用效果是一種有利的措施。

值得注意的是，犬絕育或去勢后容易發(fā)生體重增加、肥胖、骨質(zhì)疏松等代謝性疾病，這需要在后期的訓(xùn)練過程中注意調(diào)節(jié)能量、鈣質(zhì)以及其他微量元素的攝入，適當增加犬的運動量，并注意監(jiān)測犬的其他相關(guān)生理、生化、內(nèi)分泌指標，以充分保障犬的健康和各項生理機能。