于金鑫，方超，周佳怡，姚園園，曾鑫年，劉家莉

（華南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院/廣東省昆蟲行為調(diào)控工程技術研究中心，廣州 510642）

學習是生物體獲取信息的一個重要手段[1]。在對昆蟲學習能力的研究中已發(fā)現(xiàn)，其可通過嗅覺[2]、視覺[3]等的學習去尋找和定位寄主[4]。昆蟲的嗅覺系統(tǒng)具有高度專一和極其靈敏的特性，是昆蟲識別和感知環(huán)境的重要感覺器，因此，有關昆蟲嗅覺學習的研究也較深入且主要集中在聯(lián)系性嗅覺學習上。西方蜜蜂（Apis mellifera）[5]可將花朵的氣味與花蜜或花粉聯(lián)系，從而提高搜尋蜜源植物的效率；德國小蠊（Blattella germanica）[6]和雙斑蟋（Gryllus bimaculatus）[7]通過聯(lián)系學習薄荷精油和蔗糖溶液而變得更趨向于薄荷精油；沙漠蝗（Schistocerca gregaria）[8]學習氣味刺激和食物間的聯(lián)系進而更偏好選擇學習的氣味；寄生蜂（Parasitoids）[9]也可通過過往的經(jīng)歷來提高對學習寄主的選擇率。由上述研究可知，聯(lián)系性嗅覺學習在昆蟲的寄主選擇中扮演著重要的角色。

經(jīng)典性條件反射（classical conditioning）因其可精確化控制條件刺激（conditioned stimuli,CS）和非條件刺激（unconditioned stimuli,US）的作用時間和頻率而被廣泛應用于聯(lián)系性嗅覺學習的研究中，昆蟲的條件性伸喙反射則是其中的一種經(jīng)典模式，多被應用于蜜蜂、果蠅、實蠅等具有長喙的昆蟲研究中。在訓練昆蟲學習時，將條件刺激和非條件刺激重疊給予，若試蟲成功進行聯(lián)系性學習，則其對非條件刺激的伸喙反射行為也可由條件刺激激發(fā)，結果表現(xiàn)為對條件刺激的伸喙反射率升高[10]。然而，經(jīng)典性條件反射中的伸喙反射行為并不能完全反應自由活動狀態(tài)下昆蟲的行為反應，因此，在學習后的記憶持續(xù)性測試中，觀察昆蟲對學習后氣味的行為反應將更有利于反映學習對昆蟲嗅覺偏好的影響。

橘小實蠅（Bactracera dorsalis）又名柑橘小實蠅、東方果實蠅、黃蒼蠅、果蛆等，屬雙翅目（Diptera）、實蠅科（Tephritidae）、寡鬃實蠅亞科（Dacinae）、果實蠅屬（Bactrocera），寄主遍及250多種果蔬，是一種重要的檢疫性害蟲[11]。我們在前期研究中采用伸喙反射的經(jīng)典性條件訓練法已發(fā)現(xiàn)橘小實蠅具有較強的聯(lián)系性嗅覺學習能力，可將薄荷精油與蔗糖溶液聯(lián)合，學習后對薄荷精油的伸喙反射率顯著升高。甜橙是橘小實蠅的寄主之一，其對甜橙揮發(fā)物的學習能力及學習后的行為變化目前尚不十分清楚。本研究擬采用甜橙精油為條件刺激，運用伸喙反射的經(jīng)典性條件訓練法調(diào)查橘小實蠅對甜橙精油的學習能力，并進一步探索學習后橘小實蠅對甜橙精油的選擇偏好性是否發(fā)生變化，以明確嗅覺學習對其寄主選擇的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試蟲源

供試橘小實蠅為廣東省昆蟲行為調(diào)控工程技術研究中心2010年建立的室內(nèi)種群，在光周期為14 h光照∶10 h黑暗、溫度26～28℃、濕度60%～80%的實驗室條件下飼養(yǎng)。將人工產(chǎn)卵器[12]內(nèi)壁涂抹果汁，放入飼養(yǎng)籠內(nèi)供成蟲產(chǎn)卵，收集到的卵置于人工飼料（含香蕉、酵母、玉米粉、蔗糖、纖維、苯甲酸鈉、鹽酸、蒸餾水）中飼養(yǎng)，待幼蟲老熟后，轉到含水量為60%的細沙中待其化蛹。

羽化后的成蟲放入30 cm×30 cm×30 cm的飼養(yǎng)籠內(nèi)飼養(yǎng)，籠內(nèi)放入人工飼料[m（酵母）∶m（蔗糖）=1∶3］和水供成蟲取食，將羽化后2～3 d的雄蟲從籠內(nèi)隔離出單獨飼養(yǎng)，選用16～19 d的未交配雄性成蟲作為供試蟲源。

試蟲前處理：從實驗種群中隨機挑選20～30頭雄成蟲，置于30 cm×30 cm×30 cm的飼養(yǎng)籠內(nèi)饑餓12 h（僅提供水，不提供飼料），以提高其對蔗糖溶液的嗜好性。試驗當天，供試昆蟲被固定于一塑料管（長3.5 cm，直徑8 mm）中，并保證其頭和前足可在管外自由活動[12]。試驗30 min前使用蔗糖溶液測試，僅選用對蔗糖溶液有伸喙反應的個體繼續(xù)試驗，每頭試蟲僅用1次。據(jù)報道，橘小實蠅成蟲每天活躍最高峰在8：00—11：00 a.m.[13-14]，所以所有試驗的時間固定為每日9：00—11：00 a.m.。在訓練過程中死亡的個體被剔除（死亡率低于5%）。

1.1.2 供試藥品

薄荷精油、甜橙精油（廣州嘉媚樂天然用品連鎖公司）；蔗糖（分析純，天津市大茂化學試劑廠）；甲醇（一級色譜純，天津四友精細化學品有限公司）；正己烷（分析純，上海潤捷化學試劑有限公司）。

1.1.3 供試儀器

氣泵（RESUNAIR-2000）、燒瓶、通風罩等。

1.1.4 氣味刺激裝置

由氣泵產(chǎn)生的氣流經(jīng)活性炭除雜后再經(jīng)過裝有蒸餾水的燒瓶，使氣流保持一定的濕度，氣流速率由流量計調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)后的氣流（2 L/min）通過裝有氣味源的燒瓶，以使氣味混入氣流中來提供氣味刺激。刺激時氣流末端對準試蟲觸角并保持1 cm的距離（圖1）。此外，在訓練位置后設有一個排氣罩，不僅用于穩(wěn)定氣流且可及時將訓練產(chǎn)生的氣味排出室內(nèi)[12]。

圖1 嗅覺學習氣味刺激裝置Fig.1 Odor delivery system

將50 μL甜橙精油滴于“W”型濾紙（4 cm×4 cm）上，濾紙置于錫箔紙上，隨后放置在通風櫥內(nèi)干燥10 min后備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 橘小實蠅的聯(lián)系性嗅覺學習

1.2.1.1 經(jīng)典性嗅覺條件訓練法

本試驗參考陳小燕等[12]所用的經(jīng)典性嗅覺條件反射方法，選用甜橙精油作為條件刺激，因甜橙為橘小實蠅的寄主之一，用10%蔗糖溶液作為非條件刺激，聯(lián)合對橘小實蠅進行獎賞性的嗅覺學習訓練。訓練時，首先將橘小實蠅放置于訓練位置適應10 s，然后先給予氣味刺激3 s，并記錄其是否伸喙，接下來的3 s同時給予條件刺激和非條件刺激。給予非條件刺激時使用蘸取蔗糖水的牙簽碰觸橘小實蠅的喙，待橘小實蠅伸喙后使其取食3 s。每頭試蟲訓練5次，訓練的時間間隔為10 min，分別記錄5次訓練時試蟲對甜橙精油的伸喙反射率。接受此訓練法的實驗組即為對稱組。

1.2.1.2 非對稱性訓練對照組

在非對稱訓練組中，橘小實蠅共接受9次訓練，即5次氣味單獨刺激和4次食物單獨刺激（訓練所用氣味刺激為50 μL甜橙精油原液，食物刺激為10%蔗糖溶液），2種刺激以每5 min的間隔交替刺激試蟲。在氣味刺激訓練時，給予氣味6 s并記錄氣味釋放前3 s時試蟲對氣味產(chǎn)生的伸喙反射；在食物刺激時，給予食物3 s。2種刺激間隔5 min是為了保證測定氣味刺激誘導的伸喙反射間隔與實驗組嗅覺訓練的時間間隔一致，即為10 min。

1.2.1.3 氣味刺激試驗組與食物刺激試驗組

試驗中用于條件刺激和非條件刺激的嗅覺和味覺刺激也可能通過習慣性反應、敏感性反應或是其他非聯(lián)系性學習來影響橘小實蠅的伸喙反射。為了明確非聯(lián)系性學習的影響，設置了氣味刺激試驗組和食物刺激試驗組。在氣味刺激試驗組中，僅用甜橙精油刺激橘小實蠅6 s，刺激前3 s時測試試蟲對氣味的伸喙反應，每頭試蟲刺激5次，每次間隔10 min。在食物刺激試驗組中，喂食10%蔗糖溶液5次，喂食時間間隔設為10 min，最后一次喂食10 min后測試試蟲對甜橙精油的伸喙反應。

1.2.1.4 記憶時長的測定

橘小實蠅接受5次聯(lián)系性嗅覺訓練，每次間隔10 min，訓練方法同1.2.1.1。3組試蟲分別在最后一次訓練結束后的10 min、3 h和6 h后被測定對條件刺激甜橙精油的伸喙反應。

1.2.2 嗅覺學習對橘小實蠅選擇偏好性的影響

1.2.2.1 橘小實蠅氣味選擇性測定

本試驗選用Y型嗅覺儀（圖2）測定橘小實蠅對氣味的選擇偏好性。Y型管主臂長20 cm，兩臂長20 cm，兩臂夾角為60°。在Y型管前端10 cm處放置光源（76 lx），并罩白紙以減弱光的強度，利用趨光性來提高橘小實蠅的出管選擇率。由氣泵產(chǎn)生的氣流經(jīng)流量計調(diào)節(jié)流量（500 mL/min）后，再經(jīng)活性炭除雜，蒸餾水加濕后進入放有氣味源的燒瓶，最后載有氣味的氣流進入Y型管來測試橘小實蠅對兩臂氣味的選擇性。試驗時，在Y型管直臂接入一定量的試蟲數(shù)，10 min后觀察進入兩臂2/3處的試蟲數(shù)。試蟲僅測試一次，每次測試后更換濾紙，調(diào)換氣味源方向，更換Y型管。測試后的Y型管用甲醇清潔干凈后備用。本試驗選用的氣味源A為甜橙精油，氣味源B為薄荷精油，測試時，吸取各精油50 μL滴于4 cm×4 cm的濾紙上，晾置10 min后置于氣味源燒瓶中。

圖2 Y型嗅覺儀Fig.2 Y-type olfactometer

1.2.2.2 嗅覺學習訓練前后橘小實蠅的氣味選擇偏好性測定

將未經(jīng)訓練的試蟲固定于塑料管內(nèi)，固定時間與5次訓練所需時間一致，固定時間結束后，試蟲從管內(nèi)被釋放至一干凈養(yǎng)蟲籠內(nèi)，10 min后用于選擇性測試。測試總蟲數(shù)不低于30頭，測定后計算選擇率。試蟲在接受聯(lián)系性訓練（方法見1.2.1.1）、非對稱訓練（方法見1.2.1.2）、氣味單獨刺激和食物單獨刺激（方法見1.2.1.3）后由固定管中釋放出來，置于干凈養(yǎng)蟲籠內(nèi)10 min后用于測試，測試所用方法見1.2.2.1。

1.2.3 嗅覺學習對橘小實蠅化學趨風性（chemoanemotaxis）的影響

1.2.3.1 橘小實蠅化學趨風性測定

本試驗選用自制微型風洞（圖3），長50 cm，直徑3 cm，由氣泵產(chǎn)生的氣流經(jīng)流量計調(diào)節(jié)流量（500 mL/min）后，再經(jīng)活性炭除雜，蒸餾水加濕后進入放有氣味源的燒瓶（氣味源為滴于4 cm×4 cm的濾紙上的甜橙精油）中，最后載有氣味的氣流進入風洞以測試橘小實蠅的化學趨風性。每次測試1頭，每頭試蟲僅測試1次，每次測試后更換濾紙，并用甲醇清潔風洞，每次測試時間5 min，統(tǒng)計記錄到達風洞氣味源的試蟲數(shù)。

圖3 微型風洞裝置Fig.3 Mini wind tunnel equipment

1.2.3.2 訓練前后橘小實蠅對甜橙精油化學趨風性的影響

將未經(jīng)訓練的橘小實蠅固定于試管內(nèi)，固定時間與5次訓練所需時間一致，固定時間結束后，試蟲從管內(nèi)被釋放至一干凈養(yǎng)蟲籠內(nèi)，10 min后測試其對甜橙精油的趨性，測試總蟲數(shù)不低于30頭，測定后計算趨性率。試蟲在接受聯(lián)系性訓練、非對稱訓練、氣味單獨刺激和食物單獨刺激后由固定管中釋放出來，10 min后測試其對甜橙精油的趨性，測試總蟲數(shù)不低于30頭，測定后計算趨性率。

1.2.4 數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計分析

學習后條件反射率（conditioned response）：統(tǒng)計每次訓練中進行伸喙反射的橘小實蠅個體占比（發(fā)生伸喙反射的個體占總測試蟲數(shù)的百分率）。用科克倫試驗（Q）[Cochran's test（Q）]分析5次連續(xù)訓練對伸喙反射的影響。用列聯(lián)表G檢驗分析某一訓練次數(shù)下不同訓練組間伸喙反射率的差異。多組間伸喙反射率差異采用χ2多重比較，顯著性經(jīng)Brunden矯正，矯正α′=α/2（k－1），k為樣本數(shù)。

學習表現(xiàn)力（learning performance）：統(tǒng)計每頭試蟲在5次訓練中總的伸喙次數(shù)（0～5次）。用Kruskal-Wallis（KW）和 Scheffé事后多重比較（post hoc tests）分析多組間橘小實蠅的學習表現(xiàn)力，用Mann-WhitneyU檢驗比較2組間橘小實蠅的學習表現(xiàn)力[15]。

Y型管選擇率：對條件氣味甜橙精油的選擇率=（進入甜橙精油氣味管臂試蟲數(shù)/做出選擇的試蟲數(shù)）×100%。

化學趨風性：對甜橙精油的趨向率=（到達氣味源的試蟲數(shù)/供試蟲數(shù)）×100%。

各試驗組間選擇率和趨向率的比較采用χ2多重比較法，統(tǒng)計分析所使用軟件為SPSS 9.0。

2 結果與分析

2.1 甜橙精油作為條件刺激的嗅覺學習

2.1.1 對稱性與非對稱性訓練下的嗅覺學習

橘小實蠅對甜橙氣味的伸喙反射率隨5次連續(xù)訓練顯著增加（Cochran試驗，Q=299.28，df=4，P＜0.001；圖4），由第1次的8.1%增加至第5次的75.7%。在所有訓練試蟲中，僅有11.9%的試蟲在所有5次訓練中均未伸喙。當以甜橙精油和蔗糖溶液交替刺激試蟲各5次時，伸喙反射率隨訓練次數(shù)增加無顯著變化（Q=1.62，df=4，P=0.81）。對稱組與非對稱組在第2次訓練中所測得的伸喙反射率已存在顯著差異（G=33.54，df=1，P＜0.01）。在隨后的訓練次數(shù)中仍保持著差異（第3次訓練，G=62；第4次訓練，G=68.4；第5次訓練，G=63.6；所有df=1，P＜0.01）。對稱組與非對稱組間的學習表現(xiàn)力也存在顯著差異（Mann-Whitney試驗，U=2 245，P＜0.001）。

2.1.2 氣味或食物單獨刺激對嗅覺學習的影響

在氣味刺激試驗組（n=57）中，橘小實蠅在第1次訓練中的伸喙反射率即自發(fā)伸喙反射率為6.3%。經(jīng)隨后4次刺激后，伸喙反射率無明顯增加（Q=1，df=4，P=0.91），僅有1頭伸喙4次，4頭伸喙1次，伸喙率保持為1.5%～3.0%。

在食物刺激試驗組（n=60）中，取食過蔗糖溶液5次后的橘小實蠅伸喙反射率為11.6%，并與自發(fā)伸喙反射率（4.3%）進行比較表明，兩者間無顯著差異（χ2=2.47，df=1，P=0.12）。

2.1.3 橘小實蠅記憶時長測定結果

分別于訓練后的10 min、3 h和6 h測定橘小實蠅對甜橙精油的伸喙反射率。經(jīng)不同時間后，橘小實蠅的伸喙反射率仍顯著高于訓練前（10min，G=89.9；3 h，G=61.55；6 h，G=47.69；df=1，P＜0.01；圖5）。對比不同時間段的伸喙反射率發(fā)現(xiàn)，隨訓練后時間的推移，伸喙反射率逐漸降低（G=9.63，df=2，P＜0.01）。6 h后的伸喙反射率顯著低于10 min后的伸喙反射率（10 min與6 h：χ2=9.54，df=1，α′=0.012 5，P＜0.05），而10 min和3 h及3 h和6 h的伸喙反射率間無差異（10 min與3 h，χ2=1.73；3 h與6 h，χ2=2.94；df=1，α′=0.012 5，P＞0.05）。

圖4 橘小實蠅對甜橙精油的伸喙反射率Fig.4 Proboscis extension reflex of B.dorsalis to sweet orange essential oil

2.2 橘小實蠅嗅覺學習對甜橙精油選擇性的影響

未經(jīng)訓練的試蟲經(jīng)Y型管測試，其對甜橙精油的選擇率為35.3%，經(jīng)5次對稱訓練后其對甜橙精油的選擇率為63.7%，極顯著高于訓練前的選擇率（χ2=6.9，P＜0.01；圖6）。橘小實蠅經(jīng)5次非對稱訓練后其對甜橙精油的選擇率為13.7%，顯著低于經(jīng)5次對稱訓練后其對甜橙精油的選擇率（χ2=25.1，P＜0.01；圖6）。

橘小實蠅經(jīng)5次甜橙精油氣味單獨刺激后，其對甜橙精油的選擇率為16.4%，經(jīng)5次蔗糖溶液單獨喂食后，其對甜橙精油的選擇率為24.5%，2組對甜橙精油的選擇率均顯著低于對稱組訓練后對甜橙精油的選擇率（氣味刺激組與對稱組，χ2=17.3，df=1，α′=0.012 5，P＜0.05；食物刺激組與對稱組，χ2=11.8，df=1，α′=0.012 5，P＜0.05）。

2.3 橘小實蠅嗅覺學習對甜橙精油趨性的影響

將未經(jīng)訓練的橘小實蠅放入微型風洞，僅有8.3%的試蟲表現(xiàn)為正相趨風性（positive anemotaxis），即趨向于氣味源甜橙精油。經(jīng)5次對稱訓練后的橘小實蠅放入微型風洞后，有52.5%的橘小實蠅趨向于氣味源，趨向率顯著高于訓練前的橘小實蠅（χ2=14.47，P＜0.01）。經(jīng)5次非對稱訓練后，僅有10%的橘小實蠅趨向于氣味源，趨向率顯著低于對稱訓練后的橘小實蠅（χ2=16.8，P＜0.01）。橘小實蠅經(jīng)甜橙精油單獨刺激5次后，其對甜橙精油的趨向率為24.3%，顯著低于對稱訓練后的橘小實蠅（χ2=6.4，P＜0.05）；而喂食蔗糖溶液5次后，其對甜橙精油的趨向率為12.8%，也顯著低于對稱訓練后的橘小實蠅（χ2=14.1，P＜0.01）（圖7）。

圖5 橘小實蠅對甜橙精油的記憶時長Fig.5 Retention of olfactory memory of B.dorsalis to sweet orange essential oil

圖6 橘小實蠅Y型管選擇率測定Fig.6 Y-tube selection rate test in B.dorsalis

圖7 橘小實蠅訓練前后的化學趨風性Fig.7 Chemo-anemotaxis of B.dorsalis before and after training

3 討論

3.1 橘小實蠅的獎賞性嗅覺學習

通過經(jīng)典性嗅覺條件訓練法可成功訓練被固定于試管中的橘小實蠅聯(lián)合甜橙精油與蔗糖溶液，學習后的橘小實蠅對甜橙氣味的伸喙反射率顯著提高，這一結果表明甜橙氣味經(jīng)學習后已成為一種信號，這一信號預示了食物的存在。通過對比對稱訓練組和非對稱訓練組可知，條件刺激的氣味和非條件刺激的食物的短暫聯(lián)合是學習形成的必要條件，即兩者同時刺激時，時間上的交錯是引起伸喙反射率增加的原因，而若時間上無交叉則不能引起伸喙反射率的增加。這種因條件刺激和非條件刺激的對稱性聯(lián)合而產(chǎn)生的學習行為在很多昆蟲中均有證明，如西方蜜蜂[5]、煙芽夜蛾（Heliothis virescens）[16]、沙漠蝗[8]等。

在對稱訓練時，訓練的結果極有可能受條件刺激或非條件刺激產(chǎn)生的習慣性反應或敏感性反應的影響，因此，本文也測定了氣味單獨刺激及食物單獨喂食后是否對橘小實蠅的伸喙反射率產(chǎn)生影響。結果表明，氣味或食物的單獨多次刺激并不使橘小實蠅對訓練氣味的伸喙反射率產(chǎn)生任何影響。但在我們的前期研究中曾發(fā)現(xiàn)橘小實蠅取食過蔗糖溶液后，其對薄荷精油的伸喙反射率有輕微升高，這種升高有可能由敏感性反應所引起[12]。因取食蔗糖而引起的敏感性反應在西方蜜蜂中亦有發(fā)現(xiàn)：西方蜜蜂在取食一次蔗糖溶液后，其對氣味的伸喙反射率可迅速增加2倍，并在2 min內(nèi)降回至最初的水平[1]。

3.2 獎賞性嗅覺學習對橘小實蠅氣味偏好性的影響

在經(jīng)典性條件訓練法中獲得對條件刺激的條件反射并不能明確反應嗅覺學習對昆蟲選擇行為的影響，因此，嗅覺學習訓練后選擇合適的行為測試可研究嗅覺學習對昆蟲行為的影響。在對黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）[17]、昆士蘭果實蠅（Bactrocera tryoni）[18]、西 方 蜜 蜂[19]、美 國 大 蠊（Periplaneta Americana）[20]、德國小蠊[6]（Blattella germanica）、雙斑蟋（Gryllus bimaculatus）[7]及沙漠蝗[8]的研究中均發(fā)現(xiàn)嗅覺學習可引起昆蟲隨后對氣味偏好性的改變。在本試驗中也發(fā)現(xiàn)嗅覺學習可引起橘小實蠅氣味偏好性改變，經(jīng)獎賞性訓練后，橘小實蠅對學習過的甜橙精油的選擇率相較于訓練前明顯增加，且通過與非對稱組及氣味刺激和食物刺激組比較可知，此選擇率的增加是聯(lián)系性的獎賞性嗅覺訓練所引起的，這一結果表明橘小實蠅可能更傾向于選擇曾經(jīng)有過取食經(jīng)歷的寄主，同時，研究結果也表明橘小實蠅可將學習后對甜橙精油的條件反應轉化為選擇行為。

3.3 橘小實蠅對學習氣味的定位機制

在大多爬行或飛行昆蟲中，橘小實蠅對氣味源的定位機制已被證實為由氣味改變的趨風性，即化學趨風性[21-24]。VET等[25]和PAPAJ等[9]曾通過使用昆蟲運動軌跡記錄儀研究了一種寄生蜂Leptopilina heteroma的產(chǎn)卵經(jīng)歷對其搜尋定位行為的影響，發(fā)現(xiàn)在某一寄主產(chǎn)卵后的寄生蜂對該寄主的趨性增強，這一趨性表現(xiàn)為化學趨風性的增強，即風上移動時間縮短，移動軌跡更趨于一致。嗅覺學習對趨性強度的影響還表現(xiàn)在趨化性上，在研究秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）[26]的學習中發(fā)現(xiàn)，厭惡性學習可降低線蟲的趨化性，從而影響其對食物的選擇。本研究的微型風洞結果顯示，經(jīng)聯(lián)合對稱訓練后向風上方向移動趨向于氣味源的橘小實蠅顯著增多，表現(xiàn)為正向趨風性的增強。而這一趨性的增強僅由對稱性訓練引起，而非單一刺激和非對稱訓練，表明了聯(lián)合性學習是引起橘小實蠅定位氣味源的必要條件。在復雜的生境中，為了快速高效搜尋到取食寄主，橘小實蠅可能通過學習以記憶食物資源的氣味，在今后的搜尋中可對記憶的氣味快速反應并趨向定位到氣味源。而學習后橘小實蠅是否因嗅覺反應變化從而導致行為發(fā)生變化尚不明確，這也將是未來研究的一部分。

4 結論

由本文的實驗結果可知，橘小實蠅具有較強的聯(lián)系性嗅覺學習能力，經(jīng)與蔗糖溶液聯(lián)合訓練可學習甜橙精油的氣味，學習后其對甜橙精油的伸喙反射率明顯升高，且這種升高的必要條件為對稱性訓練而非非對稱訓練引起的敏感性反應和習慣性反應。經(jīng)對稱訓練后，其對甜橙精油的伸喙反應可轉移為行為上的選擇偏好性和趨向性，表現(xiàn)為在選擇性試驗中，與訓練前相比，試蟲更傾向于選擇學習過的甜橙精油；在趨性試驗中，與訓練前相比，試蟲對學習過的甜橙精油的趨性增加。