宋旭梅，王貴杰，隨瑞芝，王莉，詹福壽

(寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心，銀川 750001)

染色體多態(tài)性是指染色體在形態(tài)上發(fā)生微小變異，而人群中存在的染色體的這種微小變異多被認為是正常的，主要表現(xiàn)為13號、14號、15號、21號、22號染色體隨體增加，1號、9號、16號染色體次縊痕增加，9號間臂倒位，Y染色體異染色質(zhì)區(qū)增加或減少等。研究發(fā)現(xiàn)：染色體的多態(tài)會影響人類的生殖功能，主要表現(xiàn)為無精子癥、少弱精子癥等男性不育以及女性的習(xí)慣流產(chǎn)、胚胎停止發(fā)育等生育異常[1-2]。因此，本研究通過對來我院就診生育異常的3 102 例男性患者的染色體核型結(jié)果進行分析，探討寧夏地區(qū)男性生育異常與染色體多態(tài)的相關(guān)性，為臨床上患者的遺傳咨詢及優(yōu)生優(yōu)育提供可靠的證據(jù)。

資料與方法

一、研究對象

選取2016年1月至2018年5月前來我院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的明確診斷為男性生育異常3 102 例患者，年齡分布在18～42歲；臨床表型主要為少弱精子癥、無精子癥或精液正常而男性不育等。納入標準：(1)明確診斷為男性不育患者；(2)精液檢測至少兩次，且結(jié)果一致。排除標準：女性不孕致不育者。所有患者均簽署知情同意書。

二、研究方法

1.細胞培養(yǎng)：無菌條件下選用肝素抗凝管采集外周血2 ml，將0.5 ml接種于外周血淋巴細胞培養(yǎng)基中，上下顛倒混勻后放置于無CO2的37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.細胞收獲及顯帶：將上述細胞培養(yǎng)3 d后，加入濃度為20 μg/ml的秋水仙素60 μl，轉(zhuǎn)置37℃恒溫培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)1 h，然后進行常規(guī)的細胞收獲、低滲-預(yù)固定-固定、56℃滴片、65℃烤片、吉姆薩顯帶。

3.染色體核型分析：每例患者采用德國ZEISS MetaSystems染色體自動掃描分析系統(tǒng)掃描60個分裂相，人工分析計數(shù)20個，至少分析5個核型，必要時行N/C帶加以幫助判斷。

4.精液分析：采用人工計數(shù)方法，參照《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊(第5版)》對患者進行常規(guī)精液檢測，根據(jù)精液結(jié)果分為正常組、無精子癥及少弱精子癥三組，比較三組間染色體多態(tài)性檢測情況。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS18.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料用率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、患者染色體多態(tài)性的類型分布特征

在3 102 例男性生育異常患者中檢出染色體多態(tài)性核型588 例，總檢出率為18.95%(588/3 102)。染色體多態(tài)性分類及檢出占比具體見表 1。

二、染色體多態(tài)患者臨床表型分布及檢出情況

男性生育異常在臨床上主要表現(xiàn)為少弱精子癥、無精子癥及精液正常而不育等。本研究在2 741例明確診斷為男性不育但精液正常的患者中共計檢出染色體多態(tài)性核型502 例；在259例無精癥男性患者中共計檢出染色體多態(tài)性核型57例；在102例男性少弱精患者中共計檢出染色體多態(tài)性核型29例。染色體多態(tài)性臨床表型分布及檢出占比具體見表2。

表1 染色體多態(tài)性分類及檢出占比[n(%)]

表2 染色體多態(tài)性臨床表型分布及檢出占比[n(%)]

三、染色體多態(tài)與精液質(zhì)量關(guān)系

無精子癥組、少弱精子癥組、精液正常組患者染色體多態(tài)檢出率分別為22.01%、28.43%、18.31%，少弱精子癥組顯著高于精液正常組、無精子癥組(P<0.05)，而無精子癥組與精液正常組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表3)。

表3 染色體多態(tài)與男性精液質(zhì)量的關(guān)系[n(%)]

注：與少弱精子癥組比較，*P<0.05

討 論

近年來，隨著經(jīng)濟、環(huán)境及人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，男性不育的比例呈逐年上升的趨勢。而導(dǎo)致男性生育異常的因素很多，其中遺傳因素在男性生育異常中占30%～40%[3]。研究表明：男性生育異常主要與精子生成障礙有關(guān)，Y染色體微缺失和染色體結(jié)構(gòu)或數(shù)目異常對男性生育的影響已得到廣泛的認可，但染色體多態(tài)性對男性生育異常尤其是少弱精或無精的影響尚存在爭議。

染色體結(jié)構(gòu)中異染色質(zhì)區(qū)的微小變異被稱為染色體多態(tài)，以往觀點認為，存在于染色體異染色質(zhì)區(qū)高度重復(fù)DNA序列，它不具有轉(zhuǎn)錄活性，因而由這些序列組成的染色體多態(tài)屬正常變異，在人群中沒有表型。目前許多研究的觀點認為，染色體異染色質(zhì)區(qū)的變異可導(dǎo)致基因在位置上發(fā)生改變，甚至干擾減數(shù)分裂等過程造成同源染色體在配對上發(fā)生困難，產(chǎn)生不平衡配子等，這些改變使精子生成障礙，從而導(dǎo)致男性生育異常[4]。

本研究在3 102例明確診斷為男性生育異?；颊咧?，染色體多態(tài)變異共檢出了588例，檢出率為18.95%(588/3 102)，這與國內(nèi)相關(guān)文獻報道染色體變異參數(shù)(2.2%～33.3%)[5]一致。588例染色體多態(tài)男性生育異常患者中，Y染色體長臂異染色質(zhì)區(qū)變異(Yqh+/qh-)最多，共270例，檢出率占多態(tài)性的45.92%(270/588)。研究表明：Y染色體長臂異染色質(zhì)區(qū)上分布著與男性睪丸發(fā)育、精子形成及性別決定等有關(guān)的基因，Y染色體異染色質(zhì)中DNA的高度重復(fù)和Y染色體部分遺傳物質(zhì)的丟失可能會導(dǎo)致生精障礙及男性不育[6-8]。本文檢出大Y 60例，占多態(tài)性核型的10.20%(60/588)，檢出小Y 210例，占多態(tài)性核型的35.71%(210/588)。這與尚秋杰等[9]的相關(guān)文報道內(nèi)容相一致，可見Y染色體長臂異染色質(zhì)區(qū)變異與男性精子生成障礙之間有一定的關(guān)聯(lián)性，不能把該區(qū)域變異認為正常變異。

本研究中D/G組(包括13、14、15、21、22號染色體)共222例，檢出率占多態(tài)性的 37.76%，其中13染色體隨體區(qū)變異共43例，占7.31%(43/588)，14染色體隨體區(qū)變異共46例，占7.82%(46/588)，15染色體隨體區(qū)變異共34例，占5.78%(34/588)，21染色體隨體區(qū)變異共66例，占11.22%(66/588)，22染色體隨體區(qū)變異共33例，占5.61%(33/588)；D組與G組的多態(tài)性比例為1.24：1，這與陳競茜等[10]報道的D、G組變異比例一致。引起染色體D/G組(13、14、15、21、22號)隨體區(qū)的變異的主要原因是核糖體RNA(rRNA)的增多，核糖體RNA的增多會使染色體在隨體區(qū)，發(fā)生染色體不分離以及聯(lián)合、重排等變化。這些改變可能會引起精子生成基因缺失或斷裂，從而使精子生成減少或無精。本研究中222 例D、G組染色體隨體變異，臨床上表現(xiàn)為無精子癥患者259例檢出多態(tài)22例，檢出率為8.49%(22/259)，少弱精子癥患者83例檢出多態(tài)10例，檢出率為12.05%(10/83)?？梢?，D/G組染色體隨體區(qū)多態(tài)性變異與男性少精或無精等生育異常密切相關(guān)。

王桂玲等[11]研究表明，精子在質(zhì)量方面的問題與染色體次縊痕增加之間有一定的關(guān)聯(lián)性。本研究發(fā)現(xiàn)1/9/16染色體次縊痕增加共67例，占總多態(tài)性的11.39%。染色體異染色質(zhì)區(qū)重復(fù)DNA序列的增加是引起染色體次縊痕變異的主要原因，該區(qū)域的這種變化可能會對減數(shù)分裂的某個過程造成一定的影響，如同源染色體的配對困難，產(chǎn)生非平衡配子等[12]，從而導(dǎo)致不育。因此，男性染色體次縊痕增加可能導(dǎo)致男性少精或無精。9號染色體的臂間倒位不會導(dǎo)致遺傳物質(zhì)的增加或缺失，但如果染色體倒位的位置處恰好有精子生成基因的分布，那么這種基因的位置改變極有可能會影響精子的生成。本研究共計檢出9號染色體臂間倒位(inv9)29例，檢出率占多態(tài)性的4.93%，這與郭東花等[13]研究結(jié)果一致。已有研究報道，9號染色體次縊痕的DNA序列毗鄰松弛素(RLX)基因，若9號染色體內(nèi)部在位置上發(fā)生倒置，會下調(diào)毗鄰的RLX基因的表達，使RLX發(fā)揮的作用減弱，影響了男性精子與女性卵子結(jié)合的能力，從而使生殖發(fā)生障礙[14-15]。因此，9號染色體臂間倒位可能會引起男性生精障礙，進而引起不育。

此外，本研究根據(jù)男性生育異常的臨床表型，對明確診斷為少弱精子癥和無精子癥及精液正常的男性生育異?；颊?，進行染色體核型分析統(tǒng)計。結(jié)果顯示：無精子癥組、少弱精癥組染色體多態(tài)的檢出率分別為22.01%和28.43%，高于精液正常組(18.31%)，與路興軍等[16]研究結(jié)果相悖，考慮可能與地區(qū)、樣本選擇和樣本量有關(guān)。本研究無精子癥組、少弱精癥組染色體多態(tài)的發(fā)生率顯著高于張佳仕等[17]報道的多態(tài)發(fā)生率，可能與納入標準有關(guān)。本研究并未對女性生殖異常進行研究。因此在不同地區(qū)對生育異常男性患者進行染色體核型檢查具有重要的臨床意義。

綜上所述，染色體多態(tài)性與男性生育異常密切相關(guān)，臨床上對于男性生育異常，尤其是少弱精子癥和無精子癥患者要例行染色體檢查，重視染色體多態(tài)性的臨床效應(yīng)，對生育異常的男性患者病因診斷及治療具有重要臨床意義。