孫恬，郭愛(ài)玲

（天方?。ㄖ袊?guó)）藥業(yè)有限公司 廣東廣州 510623）

靈芝(Ganoderma lucidum)屬擔(dān)子菌綱多孔菌目多孔菌科靈芝屬真菌，在我國(guó)有2000多年藥用歷史[1]。目前，靈芝以人工栽培為主，在很多地方已經(jīng)形成頗具規(guī)模的規(guī)范化種植基地[2]。靈芝種植基地的環(huán)境因素對(duì)靈芝產(chǎn)量和品質(zhì)有較大影響[3]。光照是食用菌發(fā)育過(guò)程中一個(gè)重要因素。光照的作用機(jī)制復(fù)雜，既能刺激食用菌的生長(zhǎng)，也能促進(jìn)其發(fā)育。不同光質(zhì)影響著食用菌子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育階段原基形成的狀況、菌柄的粗細(xì)和菌蓋的大小[4-5]。本實(shí)驗(yàn)以白膜和藍(lán)膜覆蓋大棚，研究靈芝子實(shí)體的光生物學(xué)特性，為靈芝種植基地人工栽培生產(chǎn)科學(xué)補(bǔ)光，提供可靠的理論依據(jù)。

許多研究表明藍(lán)光處理影響各種真菌的生長(zhǎng)：李巧珍等[6]研究表明藍(lán)光處理的刺芹側(cè)耳子實(shí)體商品價(jià)值最高。孫雅潔等[7]以杏鮑菇為試材，藍(lán)光處理子實(shí)體菌蓋普遍偏大，菇體形態(tài)均表現(xiàn)為畸形。有研究表明藍(lán)光能促進(jìn)靈芝子實(shí)體多糖三萜含量的積累[8]。王立華等[4]表明藍(lán)光處理的靈芝菌絲體生長(zhǎng)快速，菌絲濃密，多糖含量顯著高于其他處理組。真菌依靠光受體來(lái)感受光信號(hào)并傳遞信號(hào)調(diào)控相關(guān)光反應(yīng)，藍(lán)光幾乎介導(dǎo)所有真菌的光反應(yīng)，藍(lán)光受體主要有wc-1、wc-2和vivid蛋白[9]，克隆靈芝S3中的藍(lán)光受體基因Glwc-1和Glwc-2，發(fā)現(xiàn)藍(lán)光刺激可能會(huì)使Glwc-1和Glwc-2的相對(duì)表達(dá)量上升，從而啟動(dòng)藍(lán)光誘導(dǎo)的一系列反應(yīng)[10]。

靈芝多糖合成主要有2條支路[11]，一條是從葡萄糖-6-磷酸到葡萄糖-1-磷酸，關(guān)鍵酶其中包括α-PGM；另一條從葡萄糖-6-磷酸到果糖-1-磷酸，起關(guān)鍵作用的酶是PGI。有研究表明[12]藍(lán)光處理對(duì)于靈芝子實(shí)體產(chǎn)量有明顯的促進(jìn)作用，促進(jìn)多糖的積累，提高PGI、α-PGM酶活，說(shuō)明PGI、α-PGM是靈芝多糖合成的關(guān)鍵酶。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

靈芝子實(shí)體種植試驗(yàn)設(shè)計(jì)兩組，分別為白膜覆蓋大棚種植靈芝的對(duì)照組，以及藍(lán)膜覆蓋大棚種植靈芝的實(shí)驗(yàn)組，每組設(shè)置3個(gè)大棚。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 靈芝子實(shí)體生物量測(cè)定

不同試驗(yàn)栽培架分別覆蓋白膜和藍(lán)膜，將在自然光條件下形成原基的菌袋分別放入各培養(yǎng)架，每組設(shè)置50袋，連續(xù)培養(yǎng)24 d，每組隨機(jī)采收4層、5層、6層的靈芝子實(shí)體各5個(gè)，測(cè)定子實(shí)體鮮重。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組重復(fù)測(cè)量3次。

1.2.2 靈芝子實(shí)體多糖含量的測(cè)定

苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量。（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。稱取105 ℃干燥至質(zhì)量恒定的葡萄糖配成0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL和1.2 mL，分別置于比色管中，各加蒸餾水使體積為2.0 mL。再各加入6%的苯酚1.0 mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0 mL。靜置10 min后，搖勻，待反應(yīng)液完全冷卻后，于波長(zhǎng)490 nm條件下測(cè)定其吸光度值，以水作空白試驗(yàn)。以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）供試品溶液的制備。樣品粉碎過(guò)60目篩，取0.5 g于50 mL具塞離心管，用5 mL水浸潤(rùn)樣品，緩慢加入20 mL無(wú)水乙醇，同時(shí)渦旋；將樣品置于超聲提取器中150 W提取30 min，結(jié)束后，于4 000 r/min離心10 min，棄去上清，不溶物用10 mL 80%的乙醇洗滌離心；用50 mL蒸餾水將上述不溶物轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，沸水浴回流提取2 h；冷卻至室溫，過(guò)濾，將上清移至100 mL容量瓶中，洗滌殘?jiān)?～3次，用水定容；取10 mL按1:3過(guò)夜醇沉，沉淀用水復(fù)溶，定容至10 mL后按苯酚硫酸法測(cè)定含量。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組重復(fù)測(cè)量3次。

1.2.3 靈芝子實(shí)體三萜含量的測(cè)定[6,13]

（1）對(duì)照品溶液的配制：齊墩果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4 mL和0.5 mL，分別置15 mL具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密稱取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻，在70 ℃水浴中加熱15 min，立即置冰浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、齊墩果酸濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（3）供試品溶液的制備與測(cè)定：取本品粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50 mL，超聲處理（功率140W，頻率42 kHz）45 min，過(guò)濾，濾液置100 mL量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。精密量取供試品溶液0.2 mL，置15 mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“揮干”起，同法操作，測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計(jì)算，即得。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組重復(fù)測(cè)量3次。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=9.2285x+0.0129，R2=0.9991，說(shuō)明線性關(guān)系良好。

2.2.2 三萜含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=4.5306x-0.0056，R2=0.9994，說(shuō)明線性關(guān)系良好。

2.2 不同光質(zhì)對(duì)靈芝生物量的影響

采用白膜和藍(lán)膜栽培的靈芝子實(shí)體重量分析顯示，其生長(zhǎng)過(guò)程沒(méi)有顯著差異（圖3）。4層、5層、6層子實(shí)體的質(zhì)量在150 g左右，6層子實(shí)體的重量在210 g左右。藍(lán)膜的靈芝子實(shí)體4層，5層以及6層的生物量較對(duì)照組稍高，但差異不顯著。

圖3 不同光膜處理靈芝子實(shí)體生物量變化

2.3 不同光質(zhì)對(duì)靈芝子實(shí)體多糖含量的影響

藍(lán)膜種植的靈芝子實(shí)體多糖含量高于對(duì)照組（圖4）。在兩種種植方式中，5層子實(shí)體的多糖含量高于4層和6層，且藍(lán)膜都高于白膜。白膜中5層子實(shí)體的多糖含量為3.5%，而藍(lán)膜中達(dá)到了4.8%。顯示藍(lán)膜栽培有助于子實(shí)體中多糖含量的提高。

2.4 不同光質(zhì)對(duì)靈芝子實(shí)體三萜含量的影響

由圖5可知，藍(lán)膜栽培提高了子實(shí)體中的三萜含量。藍(lán)膜組4層子實(shí)體三萜含量為0.69%，白膜組為0.53%；藍(lán)膜栽培5層子實(shí)體中三萜含量達(dá)到0.89%，白膜對(duì)照組三萜含量為0.81%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，藍(lán)膜栽培有助于提高子實(shí)體中的三萜含量。

圖4 不同光膜處理靈芝子實(shí)體多糖含量變化

圖5 不同光膜處理靈芝子實(shí)體三萜含量的變化

3 結(jié)論

食用菌發(fā)育過(guò)程中，光質(zhì)條件是一個(gè)不可忽略的因素。靈芝多糖、三萜是靈芝的主要活性成分，研究含量變化規(guī)律對(duì)靈芝的生產(chǎn)具有重要意義。本文研究藍(lán)白光膜對(duì)于靈芝4,5,6層子實(shí)體生物量積累，多糖含量以及三萜含量的影響。研究結(jié)果表明藍(lán)膜栽培靈芝子實(shí)體生物量與白膜組差異不顯著，而藍(lán)膜組的多糖含量均高于白膜組，三萜含量也較白光組總體增加，總體來(lái)說(shuō)，藍(lán)光利于靈芝子實(shí)體活性成分的提高。實(shí)際生產(chǎn)中，可以在生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期對(duì)靈芝子實(shí)體進(jìn)行一定時(shí)間的藍(lán)光照射或者藍(lán)膜栽培，增加子實(shí)體中多糖和三萜的含量，提高靈芝子實(shí)體的品質(zhì)。