(濮陽市紅十字中心血站，河南 濮陽 457000)

核酸檢測技術(shù)(Nucleic acid technology，NAT)可縮短丙型肝炎抗體(抗-HCV)、抗人類免疫缺陷病毒(抗-HIV-1/2)病毒檢測窗口期，提高血液制品的使用安全[1]。國外大多數(shù)國家早已將NAT檢測列入獻血者篩查，我國自2011年全國范圍展開核酸檢驗技術(shù)檢驗，NAT檢測已逐漸應(yīng)用于血液中心的血液安全篩查中[2]。衛(wèi)生部于2012年頒布實施的《血站技術(shù)操作規(guī)程》指出可使用一種核酸試劑和一種ELISA試劑共同完成篩查血液，進一步規(guī)范了NAT檢測[3]。本研究在不同試劑不同儀器上進行兩遍ELISA檢測，隨后對無反應(yīng)性和一種試劑有反應(yīng)性標本進行NAT測定，觀察NAT在血液篩查中的應(yīng)用效果。

1 材料與方法

1.1 樣本來源與血液處理

2017年2月～2018年2月采集的無償獻血者血液標本共32 756份，使用負壓真空采血管EDTA-K2抗凝管留取標本兩管，一管為不含分離膠管留5mL標本用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測，一管為含分離膠管留8mL標本用于核酸檢測。核酸管需在血液采集后4h內(nèi)，以1 006 g離心力離心20 min，置于2～6℃冰箱內(nèi)待檢。

1.2 血清學(xué)檢測

瑞士TECAN公司生產(chǎn)的Freedom evoclinical全自動加樣儀；瑞士 Hamil-ton公司生產(chǎn)的Hamilton Microlab FAME；上?？迫A和北京萬泰提供的抗-HCV ELISA檢測試劑；珠海麗珠提供的抗HIV-1/2 ELISA 檢測試劑。

1.3 核酸檢測

使用美國諾華公司提供的Procleix Tigris核酸檢測系統(tǒng)；丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)鑒別試劑(Procleix HCV Discriminatory Probe Reagents)；人類免疫缺陷病毒核酸(HIV-1 RNA)鑒別試劑(Procleix HIV-1 Discriminatory Probe Reagents)。

1.4 核酸反應(yīng)確證系統(tǒng)

美國羅氏公司提供的Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan 核酸檢測系統(tǒng)，鑒別試劑(Cobas AmpliPrep/CobasTaqMan HCV test; Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HIV test)。

1.5 血清學(xué)檢測

采血后次日由不同檢驗人員利用兩種試劑在不同儀器上檢驗兩遍抗-HCV，抗-HIV等項目，儀器使用及試劑操作均嚴格按照說明書進行，由計算機軟件分析結(jié)果。

1.6 核酸檢測

由檢驗人員篩選核酸管，將ELISA反應(yīng)性陰性標本篩出，ELISA反應(yīng)陰性采用諾華核酸診斷系統(tǒng)運用三聯(lián)檢試劑(Procleix Ultrio Assay)進行單人次NAT檢測，結(jié)果反應(yīng)性標本則使用鑒別試劑進行進一步測定，明確病毒類型。

1.7 核酸反應(yīng)性標本確證

將NAT檢出反應(yīng)性標本送至衛(wèi)生部臨檢中心行Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan 核酸檢測系統(tǒng)，進行、 HCV RNA 和 HIV RNA的分項確證和病毒載量測定。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

選用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0 處理研究數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采取%表示，組間對比進行χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

32 756例無償獻血標本中，通過ELISA篩查抗-HCV、抗HIV-1/2均無反應(yīng)和存在一種試劑有反應(yīng)性的標本共30 735份。NAT檢測結(jié)果 30 735份NAT檢測標本中，共檢出39例陽性標本，陽性率為0.13%。39例NAT檢測陽性的標本進行HCV RNA和HIV RNA兩項定量確證，衛(wèi)生部臨檢中心檢出32例乙型肝炎病毒核酸(HBV RNA)陽性標本，陽性率為82.05%(32/39)，未檢出HCV RNA和HIV RNA陽性。見表1。HBV RNA檢出患者性別，年齡分布，差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

表2 三種病毒NAT確證結(jié)果

3 討論

在臨床實踐中，大型綜合性醫(yī)院已將輸血前常規(guī)檢查方法有ELISA法逐漸改為化學(xué)發(fā)光法，但化學(xué)發(fā)光法檢測原仍為抗原或抗體，針對窗口期、病毒變異和病毒數(shù)量等導(dǎo)致HCV、HIV等漏檢因素仍然存在，盡管檢驗技術(shù)在不斷進步，但仍然無法避免漏檢的發(fā)生，對獻血者血液的篩查和受血者輸血前檢查，均不能僅檢測抗原或抗體[8]。本研究將所采集的無償獻血者血液標本進行ELISA篩查無反應(yīng)性和一種試劑有反應(yīng)性標本，后經(jīng)NAT檢測出陽性率為1.27%，隨后進行NAT確證檢測，未檢出HCV RNA和HIV RNA陽性標本。經(jīng)NAT確證檢出HBV RNA陽性標本性別、年齡分布，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。證實核酸檢測可降低ELISA檢測漏檢造成的輸血后感染病毒傳播疾病風(fēng)險，NAT檢測聯(lián)合ELISA檢測可有效地提高病毒感染者的檢出率。

綜上所述，ELISA檢測血液中的抗原或抗體，NAT檢測病毒核酸，兩種檢測方法優(yōu)勢結(jié)合可明顯降低ELISA漏檢幾率，減少輸血后病毒感染疾病的發(fā)生，提高臨床輸血安全，保障血液制品的用血安全。