吳雷明，王守紅，張家宏，寇祥明，韓光明 ，畢建花，王桂良，唐鶴軍，徐 榮，朱凌宇

( 1.江蘇里下河地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇 揚(yáng)州 225007； 2.江蘇省生態(tài)農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究中心，江蘇 揚(yáng)州 225009 )

寬體金線蛭(Whitmaniapigra)，屬于環(huán)節(jié)動(dòng)物門(mén)、蛭綱、無(wú)吻蛭目、黃蛭科、金線蛭屬[1]，俗稱螞蟥，是中國(guó)水蛭主要養(yǎng)殖品種之一[2]。其干制品是中國(guó)傳統(tǒng)的特種中藥材，在史書(shū)《神農(nóng)本草經(jīng)》、《名醫(yī)別錄》及《本草綱目》中均有記載，具有通經(jīng)、破瘀、消腫等功效[3]。療效隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展以及對(duì)水蛭藥用機(jī)理的深入研究[4-5]，其藥用范圍已延伸至人的心腦血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)的多種疾病[6]，藥材市場(chǎng)水蛭的需求量與日俱增。

目前，中國(guó)多個(gè)地區(qū)均已開(kāi)展了寬體金線蛭的人工繁育工作，整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程大致可分為種蛭引進(jìn)、卵繭收集與孵化、苗種培育及日常管理。卵繭孵化又分為室內(nèi)孵化和室外孵化兩種方式[7]，卵繭孵化平臺(tái)采用的基質(zhì)主要是農(nóng)田土壤[8]。采用農(nóng)田土壤搭建的產(chǎn)繭、孵化平臺(tái)，其保濕性、透氣性、松軟程度以及蟲(chóng)害等問(wèn)題難以控制；農(nóng)田土壤還存在農(nóng)藥殘留[9]，這些問(wèn)題的存在直接影響種蛭產(chǎn)繭的數(shù)量和卵繭的孵化率，進(jìn)而影響苗種數(shù)量。苗種培育階段，幼蛭在營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)換過(guò)程中的敏感期或危險(xiǎn)期[10]，會(huì)大量“掉苗”，即成活率降低。因此，篩選大小適口、易于攝取、滿足幼蛭營(yíng)養(yǎng)需求的開(kāi)口餌料，有助于幼蛭安全度過(guò)營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)換期，是苗種培育的關(guān)鍵因素之一。

近年來(lái)，有關(guān)寬體金線蛭人工繁殖及苗種培育技術(shù)已見(jiàn)報(bào)道。史紅專等[11-12]應(yīng)用呼吸室法測(cè)定了不同溫度下寬體金線蛭的耗氧率和窒息點(diǎn)，探討了溫度及種蛭體質(zhì)量對(duì)寬體金線蛭繁殖的影響；Wang等[13]分析比較了不同光譜和光照度對(duì)寬體金線蛭生長(zhǎng)、存活率以及生理的影響；林小清[14]對(duì)寬體金線蛭的餌料和投喂策略及苗種生長(zhǎng)發(fā)育最適養(yǎng)殖密度進(jìn)行了優(yōu)化和調(diào)控；張曉君等[15-16]通過(guò)病原菌分離與鑒定，確定了嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)、大腸桿菌(Escherichiacoli)及變形桿菌(Proteus)等是寬體金線蛭的致病菌。這些研究為寬體金線蛭規(guī)模化人工養(yǎng)殖提供了基礎(chǔ)理論。但寬體金線蛭孵化基質(zhì)優(yōu)化、適宜開(kāi)口餌料篩選等方面的研究較少。筆者針對(duì)寬體金線蛭人工繁育過(guò)程中優(yōu)良孵化基質(zhì)缺乏及幼苗營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)化期存活率低的問(wèn)題，嘗試使用牛糞有機(jī)肥、蘑菇菌渣等農(nóng)業(yè)廢棄物作為卵繭孵化基質(zhì)，比較不同孵化基質(zhì)中卵繭的孵化效果，以及不同生物餌料對(duì)幼蛭生長(zhǎng)發(fā)育的影響，以期篩選一種適宜的孵化基質(zhì)和開(kāi)口餌料，提高苗種培育成活率，進(jìn)一步完善寬體金線蛭人工繁育技術(shù)，促進(jìn)寬體金線蛭養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用寬體金線蛭卵繭源自灝源科技股份有限公司。公司收取野生種蛭后，運(yùn)用溫室大棚繁殖技術(shù)，約經(jīng)20 d，種蛭產(chǎn)繭活動(dòng)結(jié)束。選取規(guī)格一致、顏色相近的卵繭在室內(nèi)58 cm×48 cm×20 cm泡沫箱中孵化。以梨形環(huán)棱螺(Bellamyapurificata)(螺螄)和耳蘿卜螺(Radixauricularia)(漂螺)為開(kāi)口餌料。

1.2 卵繭孵化

泡沫箱底部鋪3 cm孵化基質(zhì)，卵繭整齊擺放在基質(zhì)上，在卵繭上方覆蓋2 cm孵化基質(zhì)，室內(nèi)孵化。孵化基質(zhì)分別為土壤(對(duì)照組)、蘑菇菌渣、牛糞有機(jī)肥、蘑菇菌渣+土壤、牛糞有機(jī)肥+土壤，其中混合基質(zhì)按照體積1∶1比例混合。表層覆蓋一層水草用于保濕。每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每組放置30個(gè)活卵繭。用游標(biāo)卡尺測(cè)量卵繭的長(zhǎng)徑(圖1a)和短徑(圖1b)(精確度0.02 mm)；用電子天平稱量質(zhì)量(精確度0.01 g)。視孵化基質(zhì)干濕情況，不定期灑水，濕度維持在60%～70%。待達(dá)到預(yù)定孵化時(shí)間后，加水使幼蛭全部爬出卵繭。收集卵繭，記錄每個(gè)卵繭孵化情況，每組隨機(jī)測(cè)量20尾幼蛭，采用游標(biāo)卡尺測(cè)量幼蛭體長(zhǎng)(100 ℃開(kāi)水致死長(zhǎng)度)，使用電子天平測(cè)量體質(zhì)量。

孵化率/%=卵繭孵化數(shù)/卵繭總數(shù)×100%

1.3 開(kāi)口餌料對(duì)幼蛭生長(zhǎng)的影響

將幼蛭放入58 cm×48 cm×20 cm的泡沫箱中，分別投喂螺螄(對(duì)照組)、漂螺、螺螄+漂螺，每個(gè)投喂組3個(gè)重復(fù)，3 d投喂1次，次日清理殘餌，換水1次/3 d。30 d后，每組隨機(jī)選取20尾幼蛭，用游標(biāo)卡尺測(cè)量體長(zhǎng)(100 ℃開(kāi)水致死長(zhǎng)度)，用電子天平測(cè)量體質(zhì)量，按下式計(jì)算質(zhì)量增加率、特定生長(zhǎng)率及成活率：

質(zhì)量增加率/%=(m2-m1)/m1×100%

特定生長(zhǎng)率/%·d-1=(lnm2-lnm1)/t×100%

成活率/%=n2/n1×100%

式中，m2，試驗(yàn)終末體質(zhì)量(g)；m1，試驗(yàn)初始體質(zhì)量(g)；t，試驗(yàn)時(shí)間(d)；n2，試驗(yàn)終末水蛭數(shù)量(個(gè))；n1，試驗(yàn)初始水蛭數(shù)量(個(gè))。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)及Duncan多重比較等分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 卵繭形態(tài)特征

寬體金線蛭卵繭呈卵圓形，長(zhǎng)徑為(2.61±0.25) cm，短徑為(1.80±0.26) cm，卵繭質(zhì)量為(1.22±0.29) g。繭膜由橙黃色或粉紅色的海綿狀保護(hù)層(圖2a～b)和橄欖綠色膠狀內(nèi)膜組成。人工繁育過(guò)程中，采集的卵繭以橙黃色為主。

圖2 卵繭形態(tài)a.橙黃色，b.粉紅色.

2.2 不同孵化基質(zhì)卵繭孵化效率比較

不同孵化基質(zhì)的培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，寬體金線蛭的卵繭在蘑菇菌渣+土壤孵化基質(zhì)中的孵化率最高，顯著高于土壤組和蘑菇菌渣組(P<0.05)，但與有機(jī)肥組及有機(jī)肥+土壤組間差異不顯著(P>0.05)。卵繭在蘑菇菌渣孵化基質(zhì)中的孵化率最低，顯著低于蘑菇菌渣+土壤組(P<0.05)，但與土壤組、有機(jī)肥組及有機(jī)肥+土壤組之間差異不顯著(P>0.05)。蘑菇菌渣+土壤組幼蛭各生長(zhǎng)指標(biāo)顯著高于其他4組(P<0.05)?；旌嫌袡C(jī)孵化基質(zhì)組幼蛭各生長(zhǎng)指標(biāo)均顯著高于未添加土壤組(P<0.05)。5種不同孵化基質(zhì)孵化效果依次為蘑菇菌渣+土壤組>土壤組>有機(jī)肥+土壤組>有機(jī)肥組>蘑菇菌渣組。

表1 不同孵化基質(zhì)卵繭孵化效率

注:同一行中標(biāo)有不同小寫(xiě)字母的平均值間差異顯著(P<0.05)，下同.

2.3 幼蛭形態(tài)特征差異比較

蘑菇菌渣組和有機(jī)肥組發(fā)現(xiàn)部分卵繭內(nèi)存在少量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，未被幼蛭吸收(圖3)，向孵化基質(zhì)中加水后，缺乏營(yíng)養(yǎng)的幼蛭也自卵繭孵出。與正常孵化幼蛭相比，營(yíng)養(yǎng)缺乏的幼蛭顏色較淺(圖4、圖5)，體長(zhǎng)略短，運(yùn)動(dòng)能力以及抗應(yīng)激能力較弱。

圖3 卵繭內(nèi)殘余營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

圖4 營(yíng)養(yǎng)缺乏的幼蛭

圖5 正常孵化的幼蛭

2.4 不同餌料對(duì)幼蛭生長(zhǎng)發(fā)育的影響

幼蛭攝食不同餌料時(shí)的狀態(tài)見(jiàn)圖6和圖7。與螺螄相比，無(wú)厴結(jié)構(gòu)的漂螺更易于被攝食，不會(huì)出現(xiàn)幼蛭被螺螄厴結(jié)構(gòu)夾住的現(xiàn)象。螺螄組、漂螺組、螺螄+漂螺組幼蛭成活率分別為55.00%、72.50%、60.00%，3組之間成活率差異顯著(P<0.05)。螺螄組幼蛭發(fā)病死亡率較高，發(fā)病幼蛭體表暗淡，前端腫大無(wú)彈性(圖8a)，或體內(nèi)存在大量液體和氣泡(圖8b)，攝食能力和運(yùn)動(dòng)能力下降，最終死亡。

圖6 幼蛭攝食螺螄

圖7 幼蛭攝食漂螺

各組幼蛭生長(zhǎng)指標(biāo)見(jiàn)表2。漂螺組和螺螄+漂螺組幼蛭各生長(zhǎng)指標(biāo)顯著高于螺螄組(P<0.05)，幼蛭體長(zhǎng)分別比螺螄組高64.70%和46.20%，體質(zhì)量分別比螺螄組高54.50%和37.7%。漂螺組幼蛭體長(zhǎng)顯著高于螺螄+漂螺組(P<0.05)，體質(zhì)量無(wú)顯著差異(P>0.05)。3組幼蛭質(zhì)量增加率均超過(guò)100%，終末體質(zhì)量為初始體質(zhì)量2倍以上。漂螺組幼蛭特定生長(zhǎng)率分別比螺螄組和螺螄+漂螺組高58.14%和10.78%。螺螄組、漂螺組以及螺螄+漂螺組內(nèi)幼蛭體質(zhì)量最大值和最小值之間差異極顯著(P<0.01)，前者分別為后者的20.24、16.36、24.06倍。

圖8 發(fā)病水蛭

分組體長(zhǎng)/cm 體質(zhì)量/g 質(zhì)量增加率/% 特定生長(zhǎng)率/%·d-1極大值/g極小值/g螺螄組1.570±0.224a0.085±0.025a111.242.490.250.01漂螺組1.950±0.426c0.132±0.066b226.283.940.510.03螺螄+漂螺組1.731±0.425b0.117±0.052b190.833.560.740.03

3 討 論

3.1 農(nóng)業(yè)廢棄物在水產(chǎn)中的循環(huán)利用

水蛭自然產(chǎn)卵孵化的基質(zhì)要求溫度適中、腐殖質(zhì)豐富、質(zhì)地松軟[17]，因此土壤孵化基質(zhì)中添加部分有機(jī)肥和蘑菇菌渣，可以提高土壤腐殖質(zhì)含量和松軟度。本研究結(jié)果表明，蘑菇菌渣+土壤組卵繭孵化率和幼蛭生長(zhǎng)性能顯著高于土壤組。未混合土壤的有機(jī)孵化基質(zhì)(有機(jī)肥組、蘑菇菌渣組)卵繭的孵化率無(wú)顯著性差異，但均發(fā)現(xiàn)未達(dá)到正常孵化時(shí)間而孵出的幼蛭，與蘑菇菌渣+土壤組相比，其生長(zhǎng)性能稍差。推測(cè)原因，首先室溫條件下，有機(jī)孵化基質(zhì)質(zhì)地疏松，孔隙度較大，保溫效果差，卵繭內(nèi)仍剩余部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)未被幼蛭吸收，導(dǎo)致其發(fā)育緩慢。研究證實(shí)，溫度低于15 ℃時(shí)，寬體金線蛭卵繭孵出量極低，超過(guò)35 ℃時(shí)不能孵化，25 ℃幼苗孵出量最高，孵出較室溫下約提前1周[11]。其次，寬體金線蛭體表繁殖性狀易受環(huán)境影響，不易辨別個(gè)體是否處于同一發(fā)育時(shí)期[18-19]。試驗(yàn)用卵繭可能不是同一時(shí)間繁殖的卵繭[20]，不能在相同時(shí)間內(nèi)完成胚胎發(fā)育，造成幼蛭生長(zhǎng)性能差異。

3.2 不同餌料對(duì)幼蛭生長(zhǎng)發(fā)育的影響

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，野生寬體金線蛭主要吸食無(wú)脊椎動(dòng)物的體液或腐肉，尤其喜食螺蚌腸道內(nèi)消化物，有時(shí)也吸食水面或者岸邊的腐殖質(zhì)[21-22]。人工養(yǎng)殖過(guò)程中，不同生長(zhǎng)階段，寬體金線蛭主要投喂不同規(guī)格的螺螄，餌料比較單一。Electricwala等[23]比較發(fā)現(xiàn)，投喂中華圓田螺(Cipangopaludinacahayensis)、中國(guó)圓田螺(C.chinensis)、河蚌(Anodontawoodiana)以及混合投喂輪蟲(chóng)和原生動(dòng)物等餌料時(shí)，田螺配合輪蟲(chóng)或者原生動(dòng)物對(duì)幼蛭的生長(zhǎng)發(fā)育有顯著的促進(jìn)作用，長(zhǎng)期投喂單一餌料，幼蛭生長(zhǎng)發(fā)育顯著低于混合投喂組[24]。童水明等[25]通過(guò)比較福壽螺(Pomaceacanaliculata)和田螺幼螺對(duì)寬體金線蛭幼蛭養(yǎng)殖效果發(fā)現(xiàn)，福壽螺組幼蛭生長(zhǎng)率和成活率均顯著高于田螺組，認(rèn)為福壽螺的厴和螺殼閉合不是很緊密，適合作為寬體金線蛭幼蛭的餌料。本試驗(yàn)過(guò)程中，漂螺組幼蛭生長(zhǎng)發(fā)育各指標(biāo)和成活率顯著高于螺螄組和混合組。推測(cè)原因可能是漂螺無(wú)厴，降低了幼蛭攝食難度，減少在攝食過(guò)程中能量消耗，而螺螄的厴與外殼結(jié)合緊密，幼蛭在攝食螺螄過(guò)程中，易被厴夾住，嚴(yán)重者可以導(dǎo)致死亡[14]，因此，幼蛭攝食過(guò)程中需要消耗更多的能量，導(dǎo)致用于支配生長(zhǎng)的能量減少。另外，與螺螄相比，漂螺營(yíng)養(yǎng)組成成分或許更適宜寬體金線蛭生長(zhǎng)發(fā)育需要，對(duì)于其營(yíng)養(yǎng)需求及兩者營(yíng)養(yǎng)組成成分差異還需進(jìn)一步研究。

本研究嘗試?yán)门＜S有機(jī)肥、蘑菇菌渣農(nóng)業(yè)廢棄物作為寬體金線蛭孵化基質(zhì)，增加農(nóng)業(yè)廢棄物在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用的方式，使其從單一化向多元化轉(zhuǎn)變，可實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)廢棄物再利用和提高其附加值。本研究結(jié)果表明，蘑菇菌渣經(jīng)處理后可以作為寬體金線蛭卵繭孵化基質(zhì)，可提高卵繭孵化率和幼蛭品質(zhì)。對(duì)不同生物餌料的比較發(fā)現(xiàn)，漂螺相比螺螄更適宜作為寬體金線蛭的開(kāi)口餌料，可為水蛭幼苗培養(yǎng)提供科學(xué)依據(jù)。