施 磊，葉 雋，宋 磊

(1.上海市靜安區(qū)食品藥品檢驗所，上海 200435； 2.上海市交通大學醫(yī)學院附屬同仁醫(yī)院，上海 200050)

高脂血癥是指由于脂肪代謝或運轉異常使血漿中總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LGL-C)中一種或幾種脂質高于正常，表現(xiàn)為高膽固醇血癥、高三酰甘油血癥、混合型高脂血癥[1]。臨床上可為原發(fā)性或繼發(fā)于其他疾病，是導致動脈粥樣硬化、動脈血管內(nèi)斑塊形成、冠心病和腦卒中的高危因素。因此，控制血脂、改善血管內(nèi)皮功能、穩(wěn)定斑塊成為一級預防的手段之一。脂必泰膠囊消痰化瘀、健脾和胃。主治痰瘀互結、氣血不利所致的高脂血癥。癥見頭昏、胸悶、腹脹、食欲減退、神疲乏力等。脂必泰膠囊質量標準收載于新藥轉正標準中藥第64冊。查閱文獻發(fā)現(xiàn)，有多篇文章對脂必泰膠囊中紅曲的有效成分洛伐他汀的含量測定進行了研究[2-4]，沒有對其溶出度進行方法學驗證。本研究建立了HPLC 法測定脂必泰膠囊的溶出度，并進行了方法學驗證。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1260系列高效液相色譜儀(包括G1311B型二元泵、G1329B型自動進樣器、G4212B DAD檢測器、Agilent openLAB色譜工作站，美國安捷倫)，STAT智能溶出度儀(SOTAX AT7)，CPA225D型電子天平(精度0.01 mg，德國賽多利斯公司)。

1.2 試劑和藥品

洛伐他汀對照品(批號：100600-201504,含量為 99.4%，中國食品藥品檢定研究院)，脂必泰膠囊(0.24 g/粒，批號：170206、160706、160511、160307，成都地奧九泓制藥廠)，甲醇(色譜純，德國Merck公司)，磷酸、十二烷基硫酸鈉、氫氧化鈉(均為分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，高純?nèi)ルx子水(上海市靜安區(qū)食品藥品檢驗所自制)。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

ZABAX-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為甲醇-0.05%磷酸(80∶20)；流速1.0 ml/min;柱溫 30 ℃；檢測波長238 nm；進樣量 10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1對照品溶液

精密稱取洛伐他汀對照品溶液10.24 mg，置50 ml容量瓶中，加少量乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備對照溶液。

2.2.2供試品溶液

取樣品(批號:170206)6粒，分別置200 ml容量瓶中，分別加1%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH 7.0)超聲溶解，冷卻，加溶劑至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液

根據(jù)脂必泰膠囊處方配制，除去紅曲，按生產(chǎn)工藝制備陰性樣品，同供試品溶液制備方法，即得陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應性試驗

取洛伐他汀對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，用流動相制成濃度為40 μg/ml的溶液作為系統(tǒng)適應性試驗溶液。按“2.1”項下色譜條件測定，得液相色譜圖(圖1)，洛伐他汀的保留時間為10.22 min，理論塔板數(shù)為10 500。結果表明，本次分析使用的色譜系統(tǒng)是有效、適用的。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取按“2.2.1”項下配制的對照儲備液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0 ml，置25 ml的容量瓶中，分別加1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液(濃度分別為1.63、4.073、8.143、16.29、24.43、40.72、81.44、122.2 μg/ml)。按“2.1”項色譜條件依次進樣測定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標，溶液濃度為橫坐標繪制標準曲線。求得洛伐他汀的線性回歸方程為：Y=30.801 1X+5.332 1，r=1.000 0，線性范圍1.628 8～122.160 0 μg/ml。

圖1 脂必泰膠囊的HPLC圖 A.溶劑；B.對照品溶液；C.供試品溶液；D.陰性對照溶液；1.洛伐他汀

2.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液(含洛伐他汀40.72 μg/ml)，按“2.1”項下色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，記錄各色譜峰的峰面積。洛伐他汀平均峰面積為1 269.41，RSD為0.11%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取溶出度項下供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，分別于0、2、4、8、12 h進樣，記錄峰面積，其峰面積的RSD為0.87%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取脂必泰膠囊9粒，每3粒為一組，置溶出杯中，分別加洛伐他汀標準儲備液(精密稱取洛伐他汀對照品31.5 mg，置50 ml容量瓶中，加溶出介質溶解并稀釋至刻度搖勻，備用)1.0、2.0、3.0 ml，參照溶出度第三法，以1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)200 ml為溶出介質，轉速100 r/min，依法操作。經(jīng) 45 min時，取溶液適量，冷卻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，進行測定，計算，結果回收率分別為101.94%、100.94%、98.53%，平均回收率為100.5%，RSD為1.7%。

2.8 溶出度試驗條件的選擇

2.8.1測定波長的選擇

取洛伐他汀對照品適量，先用適量甲醇溶解，再用1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)稀釋成適宜的濃度，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結果在238 nm波長處有最大吸收，因此，選擇238 nm作為檢測波長。

2.8.2溶出度方法的確定

取樣品(批號：170206)，以1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH 7.0)200 ml為溶出介質，參考2015年版《中華人民共和國藥典》四部要求，采用小杯法，轉速為100 r/min進行試驗，分別于5、10、20、30、45、60 min取樣測定，結果見圖2。

圖2 不同溶出介質下脂必泰膠囊的溶出度曲線

2.8.3轉速的確定

取樣品(批號:170206)，采用小杯法，1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)200 ml為溶出介質，轉速為50、75、100、120 r/min進行實驗，于45 min時取樣測定，轉速100、120 r/min時溶出度最大。根據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》四部要求和洛伐他汀的溶出情況，確定轉速為100 r/min。

2.8.4溶出介質的選擇

取樣品(批號：170206)，分別以水、0.1 mol/L鹽酸、1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)和2.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)為溶出介質。其中水和0.1 mol/L鹽酸是常見的首選溶出介質，2.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)為2015年版《中華人民共和國藥典》二部中“洛伐他汀膠囊”溶出度測定采用的溶出介質，而1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)是根據(jù)“若介質中加表面活性劑如十二烷基硫酸鈉等，應盡量選用低濃度。”的原則。由于脂必泰膠囊中洛伐他汀含量較少，為保證高效液相色譜出現(xiàn)相對較大的色譜峰，故按照2015年版《中華人民共和國藥典》四部的溶出度測定第三法，溶出介質為200 ml，轉速為100 r/min，分別于5、10、20、30、45、60 min取樣，測定溶出含量，結果詳見圖2，確定1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)為溶出介質。

2.8.5取樣時間的選擇

取4個批號樣品，采用小杯法，以1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH 7.0)200 ml為溶出介質，轉速為100 r/min進行實驗，分別于5、10、20、30、45、60 min取樣，測定溶出含量。由圖3可見，20 min時已經(jīng)達到85%以上，在30 min時溶出度都在90%以上，根據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》四部要求和洛伐他汀的溶出情況，確定取樣時間為45 min。

圖3 不同取樣時間下脂必泰膠囊的溶出度曲線

2.8.6樣品溶出度的測定

取4批供試品，參照2015年版《中華人民共和國藥典》四部附錄0931的溶出度測定第三法小杯法，按“2.8.2”項下的方法進行測定，結果見表1。根據(jù)樣品溶出度檢查結果，限度均不得低于標示量的80%。

表1 樣品溶出度測定結果

3 討論

固體制劑要在人體內(nèi)發(fā)揮其藥效，首先要在人體內(nèi)崩解、溶出后釋放出藥物，然后才能進一步產(chǎn)生作用。而預測在人體的釋放吸收情況，作為體外評價樣品質量、判斷藥物療效的有效藥學研究手段，

目前只有溶出度法最為適用。該法在當前藥物的體外釋放評定中應用最為廣泛、便捷和準確。因此，在固體制劑的檢驗中溶出度檢查應該成為一個必檢項目。

脂必泰膠囊為復方中藥制劑，國家藥品標準規(guī)定其含量測定項僅為熊果酸。然而，脂必泰膠囊作為一種治療高脂血癥的藥物，其主要成分是紅曲，而紅曲中降血脂的活性成分主要是洛伐他汀[5]。那么測定脂必泰膠囊中洛伐他汀這一成分的含量，及其在人體的釋放程度就成了對其質量的一個必然考核。與脂必泰膠囊中紅曲的有效成分洛伐他汀的含量測定的多篇文獻相比較，本研究是采用HPLC法，測定脂必泰膠囊中紅曲的有效成分洛伐他汀的溶出度，并對該溶出度的測定方法進行了方法學驗證。該方法操作簡便、重復性和穩(wěn)定性好，結果準確，適用于測定脂必泰膠囊的溶出度。