賀望興，石旭平，胡 佳，黎小萍，張賤根，胡桂萍，尹志亮，魏云輝*

(1.江西省蠶桑茶葉研究所，江西南昌 330203；2.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物研究所，江西南昌 330200)

靈芝(Ganodermalucidum)古稱瑞草，是我國醫(yī)藥學(xué)寶庫中一種寶貴的藥用真菌[1]。傳統(tǒng)的靈芝人工栽培方式主要是椴木栽培[2]，但在食用菌產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的過程中，由于忽略了對林木資源合理采伐的管理，造成我國闊葉樹資源過快過量的消耗，森林生態(tài)平衡問題日益突顯。茶枝屑是指茶園修剪下來的茶枝經(jīng)過粉碎得到的顆粒狀木屑，其主要成分包括纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，也含少量的茶多酚、茶多糖和咖啡堿等。研究發(fā)現(xiàn)，茶枝屑可用于栽培靈芝、茶樹菇、花菇以及黑木耳等食用菌[3]，同時發(fā)現(xiàn)茶枝屑是一種理想的靈芝栽培原料[4]。利用茶產(chǎn)業(yè)鏈廢棄的茶枝栽培靈芝將有效緩

解“菌林沖突”現(xiàn)狀，降低靈芝生產(chǎn)成本，減少環(huán)境污染[5]。雖然目前對茶枝屑栽培靈芝進(jìn)行了初步可行性研究[6-8]，但對配方優(yōu)選研究尚較少，因此，筆者對茶枝屑代料栽培靈芝配方進(jìn)行優(yōu)選試驗，以期為推廣茶枝屑代料栽培靈芝模式提供參考。

1 材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1中華靈芝。中華靈芝由江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院應(yīng)用微生物研究所提供。

1.1.2培養(yǎng)料。培養(yǎng)料及其比例見表1。

表1 培養(yǎng)料配方

1.1.3茶枝屑。茶枝屑均來自江西省蠶桑茶葉研究所內(nèi)，選用新鮮、干燥、無霉變、無蟲蛀的茶枝，粉碎后過3目標(biāo)準(zhǔn)篩備用。

1.2試驗方法

1.2.1菌袋制作。采用17 cm×38 cm×0.05 cm規(guī)格的常壓聚乙烯塑料菌袋，按常規(guī)方法拌料、裝袋(每袋干料約 600 g)、滅菌、接種。每個配方各制150袋，設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)50袋。

1.2.2菌袋培養(yǎng)。菌袋接種完后按合適密度疊放置于室內(nèi)培養(yǎng)室避光培養(yǎng)，室溫控制在22～28 ℃，空氣相對濕度為60%～70%。

1.2.3出菇管理。采用室內(nèi)立體栽培、兩頭出菇的方式出菇，控制出菇室室內(nèi)溫度26～28 ℃，空氣相對濕度保持在85%～95%，保持室內(nèi)通風(fēng)良好，盡量采用散射光照射菌蕾等條件促進(jìn)靈芝子實體的生長，當(dāng)靈芝菌蓋邊緣白色生長圈消失、菌蓋不再增大、靈芝孢子大量噴出時，開始采收靈芝。

1.3測定項目與方法

1.3.1菌絲生長狀況。觀察菌絲的生長情況(長勢)，測定菌絲生長速度。每個配方下的每個重復(fù)隨機(jī)取5袋正常生長的菌袋，每隔3 d測量一次菌絲生長長度，測量時間至菌絲長滿袋為止。

1.3.2靈芝產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率。采收后的靈芝立即置于60 ℃恒溫烘箱內(nèi)烘干至恒重測產(chǎn)，生物轉(zhuǎn)化率以兩潮的靈芝產(chǎn)量計算，每個配方下的每個重復(fù)隨機(jī)選取10袋子實體，對產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率進(jìn)行測定。

生物轉(zhuǎn)化率=(靈芝產(chǎn)量干重/培養(yǎng)料干重)×100%

1.3.3靈芝商品品質(zhì)。靈芝菌蓋直徑以菌柄基部至菌蓋最長距離為指標(biāo)測量，菌蓋厚度以菌蓋厚度最大的區(qū)域縱切面長度為指標(biāo)測量。

靈芝多糖的測定采用國標(biāo)食用菌中粗多糖含量測定方法：NY/T 1676—2008。

采用HPLC法測定靈芝酸含量，其條件：HPLC色譜柱為C18柱，流動相A為水，流動相B為甲醇/乙酸=100∶0.5(V/V)；梯度洗脫時間20 min，甲醇濃度從80%上升至100%，流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長254 nm ；進(jìn)樣量20 μL。

茶多酚的測定采用國標(biāo)茶多酚測定方法：GB/T 8313—2008。

1.3.4質(zhì)量安全性評價。將靈芝樣品寄往蘇州歐陸分析技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行靈芝農(nóng)藥殘留測定。

2 結(jié)果與分析

2.1菌絲生長狀況由表2可知，5個配方下靈芝菌絲生長狀況均正常。與對照組靈芝配方相比，茶枝屑代料栽培靈芝菌絲的萌發(fā)時間以及生長速率均慢，菌絲長滿袋時間平均長2～6 d；但試驗組菌袋染菌率均比對照組少，可能是由于對照組菌袋營養(yǎng)條件太豐富，導(dǎo)致染菌概率增加。在4個試驗組配方中，隨著代料栽培配方中茶枝屑含量的增加，靈芝菌絲初期生長速度隨之下降，但在靈芝菌絲生長中、后期，菌絲生長速度加快，其中3號配方(45%的茶枝屑)靈芝菌絲生長速度最快，平均生長速率為1.04 cm/d，達(dá)到對照組菌絲生長速度的87%，茶枝屑配方量繼續(xù)增加，菌絲生長速度開始下降，推測與茶枝屑中多酚、醛類等抑菌成分有關(guān)，茶枝屑含量越多的配方對菌絲的抑制作用越強(qiáng)，但當(dāng)菌絲在生長中、后期適應(yīng)了茶枝屑代料栽培培養(yǎng)基中的多酚、醛類等抑菌成分后，菌絲開始正常生長[9]。

表 2 菌絲生長狀況

2.2靈芝產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率茶枝屑代料栽培的靈芝均能正常生長,芝形基本為扇形,外觀形態(tài)正常,色澤均勻一致,均能產(chǎn)生孢子,孢子形態(tài)特征正常。由表3可知，第一茬靈芝平均干重均比第二茬高；在4個試驗組配方中，隨著代料栽培配方中茶枝屑含量的增加，靈芝產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率先增加后降低，在3號配方下最高，其中除4號配方比對照低外，其余配方均高于對照組，產(chǎn)量分別提高了10.7%、12.5%、30.3%。由此可知，茶枝屑配方量應(yīng)控制在45%左右為宜。

表3 靈芝產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率

2.3靈芝菌蓋直徑茶枝屑代料栽培的靈芝子實體商品特征與對照組栽培的靈芝一致。由圖1可知，在茶枝屑含量一定范圍內(nèi)，隨著茶枝屑含量的增加靈芝菌蓋直徑隨之增加，3號栽培配方下靈芝菌蓋直徑最長，平均菌蓋直徑達(dá)7.85 cm，但超過45%的茶枝屑栽培配方后，靈芝菌蓋的生長受到抑制。與對照組靈芝菌蓋直徑相比，3號配方靈芝菌蓋平均直徑長7.1%；除4號配方與對照組菌蓋直徑差異顯著外，其他配方均差異不顯著。表明45%茶枝屑配方促進(jìn)靈芝子實體菌蓋的生長。

圖1 不同茶枝屑配方靈芝子實體菌蓋直徑Fig. 1 Cap diameter of Ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.4靈芝菌蓋厚度由圖2可知，在茶枝屑含量一定范圍內(nèi)，隨著栽培配方中茶枝屑含量的增加靈芝菌蓋厚度也隨之增厚，當(dāng)茶枝屑含量超過45%時，靈芝菌蓋厚度開始降低。與對照組靈芝菌蓋厚度相比，2、3號配方靈芝菌蓋略厚，分別比對照組提高了2.7%、5.8%。這說明30%～45%的茶枝屑添加量有利于提高靈芝菌蓋厚度，提高靈芝商品品質(zhì)。

圖2 不同茶枝屑配方靈芝子實體菌蓋厚度Fig.2 Cap thickness of Ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.5靈芝多糖含量由圖3可知，在茶枝屑含量一定的范圍內(nèi)，隨著栽培配方中茶枝屑含量的增加靈芝子實體多糖含量也隨之增加，茶枝屑代料栽培的靈芝子實體多糖含量均比對照組高，其中除1號配方靈芝子實體多糖含量與對照組差異不顯著外，其他配方與對照組差異顯著。檢測結(jié)果表明，茶枝屑代料栽培的靈芝子實體多糖含量比對照組分別提高了6.2%、20.8%、30.5%、32.1%。推測原因可能與茶枝和茶葉中營養(yǎng)成分豐富，含有茶多糖、維生素、微量元素等特殊誘導(dǎo)因子有關(guān)，這些誘導(dǎo)因子具有促進(jìn)靈芝胞外多糖的合成功能[10]。多糖是靈芝的主要藥用活性成分，表明茶枝屑代料栽培模式提高了靈芝的藥用價值。

圖3 不同茶枝屑配方靈芝多糖含量Fig.3 Polysaccharide content of Ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.6靈芝酸含量由圖4可知，在茶枝屑含量一定的范圍內(nèi)，隨著栽培配方中茶枝屑含量的增加靈芝酸含量也隨之增加，當(dāng)茶枝屑含量超過45%時，靈芝酸含量開始降低。檢測結(jié)果表明，茶枝屑代料栽培的靈芝酸含量均比對照組高， 3號配方靈芝酸含量最高，比對照組提高了 19.1%。由此可知，茶枝屑代料栽培靈芝能有效地提高靈芝酸含量，提高靈芝的商品品質(zhì)。

圖4 不同茶枝屑配方靈芝酸含量Fig.4 Triterpenes content of ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.7茶多酚含量由圖5可知，茶枝屑代料栽培的靈芝子實體中均檢測到茶多酚含量，對照組中未檢測到茶多酚含量，茶多酚含量隨著栽培配方中茶枝屑量的增加而增加，最高達(dá)0.61%。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靈芝中含有茶葉所特有的茶多酚含量，這大大提高了靈芝的商品品質(zhì)，具體機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。

圖5 不同茶枝屑配方下茶多酚含量Fig.5 Tea polyphenols content of ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.8質(zhì)量安全性評價靈芝樣品檢測結(jié)果表明，各配方靈芝子實體中300種常見農(nóng)藥殘留濃度均小于定量限。表明利用茶枝屑代料栽培靈芝解決了利用棉籽殼等其他農(nóng)作物廢棄物代料栽培靈芝帶來的農(nóng)藥殘留超標(biāo)的問題，茶枝屑代料栽培靈芝能有效地提高靈芝的食用安全性。

3 結(jié)論與討論

研究表明，靈芝菌絲不僅能在以茶枝屑為主的代料配方上正常生長，而且均能正常出芝，產(chǎn)生孢子，子實體和孢子形態(tài)特征也與雜木屑代料栽培的靈芝基本一致，因此，茶枝可以作為靈芝栽培新的代料。

綜合比較各配方靈芝菌絲生長狀況、子實體產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率以及靈芝商品品質(zhì)等指標(biāo)，篩選出3號配方為茶枝屑代料栽培靈芝的優(yōu)選配方，該配方下靈芝菌絲生長速度快，菌袋染菌低，生物轉(zhuǎn)化率高，子實體菌蓋直徑長，厚度最厚，靈芝多糖、靈芝酸含量高，有效地提高了靈芝的藥用價值以及商品品質(zhì)。

靈芝質(zhì)量安全分析試驗結(jié)果表明，茶枝屑代料栽培的靈芝子實體農(nóng)藥殘留量低于國家農(nóng)藥殘留限定值，靈芝子實體檢測出茶多酚含量，表明茶葉中的營養(yǎng)成分可能隨著靈芝菌絲的生長轉(zhuǎn)移到靈芝中，提高了靈芝的商品價值。因此，茶枝屑代料栽培靈芝是一種很好的原料，它有效地提高了靈芝的產(chǎn)量和質(zhì)量，具有廣闊的發(fā)展前景。