趙雪麗，班付國，馬震原，王東方，王淑娟，閆若潛

(河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州，450008)

豬偽狂犬病(Porcine Pseudorabies, PR)是由偽狂犬病毒(Porcine Pseudorabies Virus, PRV)引起的豬急性傳染病，在豬群呈爆發(fā)性流行。該病可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬腹瀉、神經(jīng)癥狀并發(fā)的大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一[1]。近年來，全國各地均有豬偽狂犬病的發(fā)生，尤其是2010年以來，由PRV基因變異強(qiáng)毒株為主要病原的仔豬流行性腹瀉病，嚴(yán)重危害了我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，引起新生仔豬極高的發(fā)病率和病死率，發(fā)病率達(dá)50%以上，病死率達(dá)50%～80%；造成種豬嚴(yán)重繁殖障礙，育肥豬也有發(fā)病和死亡[2-3]。給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，成為當(dāng)前嚴(yán)重危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要?jiǎng)游镆卟≈弧?/p>

國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃將該病納入了凈化要求，并取得了一定成效[4]。但該病在我國仍廣泛存在，我國規(guī)?；i場(chǎng)控制該病的主要手段仍然是疫苗免疫[5-6]，目前市售的大多數(shù)偽狂犬病疫苗為gE基因缺失疫苗，該疫苗可以有效地防止或減少豬偽狂犬病造成的經(jīng)濟(jì)損失[7-9]。實(shí)驗(yàn)室PRV gB和gE ELISA抗體檢測(cè)是評(píng)價(jià)豬場(chǎng)PRV疫苗免疫抗體水平和野毒感染抗體水平的重要手段[10]，也是規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病凈化的必需手段。

本研究通過對(duì)抽查的不同養(yǎng)殖豬群PRV gB和gE抗體水平進(jìn)行研究，結(jié)合病原學(xué)檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，系統(tǒng)掌握豬群PRV免疫抗體消長規(guī)律和免疫保護(hù)效果，建立科學(xué)的PRV抗體監(jiān)測(cè)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，能為豬偽狂犬病的預(yù)防和凈化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑

阻斷法檢測(cè)PRV gB抗體ELISA試劑盒(以下簡稱gB ELISA)和阻斷法檢測(cè)PRV gE抗體ELISA試劑盒(以下簡稱gE ELISA)均購自美國IDEXX公司。

1.2 血清

省內(nèi)10家背景清晰、飼養(yǎng)環(huán)境良好的規(guī)模化豬場(chǎng)，豬群經(jīng)gE基因缺失的PRV疫苗免疫，每家抽檢100份血清。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1鑒別豬偽狂犬病毒(PRV) gD/gE基因復(fù)合TaqMan MGB探針FQ-PCR檢測(cè)方法由本實(shí)驗(yàn)室建立。用gB ELISA檢測(cè)豬場(chǎng)血清的免疫抗體，S/N<0.6，樣品確定為合格；用gE ELISA檢測(cè)豬場(chǎng)血清的感染抗體，S/N<0.6，樣品判定為陽性，S/N>0.7，樣品判定為陰性，0.6

2 結(jié)果

從10家PRVgE基因缺失疫苗免疫豬場(chǎng)抽檢血清的檢測(cè)情況來看(見表1)，被檢豬場(chǎng)的豬群群體gB免疫抗體水平差異較大，其中豬場(chǎng)3與豬場(chǎng)7的合格率相差40%；其中部分豬場(chǎng)樣本的平均S/N大于0.7，合格率偏低；gB ELISA檢測(cè)結(jié)果平均S/N值小于0.1的群體，其群體免疫抗體合格率均超過90%；不同豬場(chǎng)的被檢樣品間變異值高低不一，其中有5家豬場(chǎng)的CV值(%)超過15.0%，樣品間變異較大，說明這些群體中陰性個(gè)體的免疫抗體水平參差不齊；gE ELISA檢測(cè)結(jié)果的場(chǎng)病原學(xué)FQ-PCR檢測(cè)結(jié)果也為陽性，但存在gE ELISA檢測(cè)結(jié)果陽性而病原學(xué)檢測(cè)陰性的樣品，并未呈現(xiàn)出一定規(guī)律，具體原因需要結(jié)合豬場(chǎng)具體情況和流行病學(xué)調(diào)查深入進(jìn)行分析。

表1 10家PRVgE基因缺失疫苗免疫豬場(chǎng)抽檢血清樣本的檢測(cè)結(jié)果

10家PRVgE基因缺失疫苗免疫豬場(chǎng)抽檢血清檢測(cè)結(jié)果表明：在gB ELISA群體平均S/N大于0.1、免疫合格率小于90%、樣本間變異值大于15%、gE ELISA結(jié)果陽性的豬群中，病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果有PRV感染的陽性個(gè)體。為了更好地評(píng)估PR免疫效果，以達(dá)到規(guī)模化豬場(chǎng)PRV凈化的要求，結(jié)合長期的PRV抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果、抗體消長規(guī)律研究及流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，本中心初步建立了PRV抗體監(jiān)測(cè)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)于采用基因工程gE缺失疫苗免疫豬群，采用美國IDEXX公司生產(chǎn)的gE和gB抗體檢測(cè)阻斷ELISA試劑盒分別檢測(cè)PRV 野毒感染抗體及免疫抗體，凈化豬群gE抗體陽性率應(yīng)為零，gB免疫抗體S/N值應(yīng)≤0.1，樣品間CV值應(yīng)≤15%，豬群平均免疫抗體陽性率需長期維持在90%以上；如gE抗體呈陽性時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步采集相應(yīng)豬鼻拭子或扁桃體樣品進(jìn)行PCR病原學(xué)檢測(cè)。對(duì)非免疫豬群，gE或gB抗體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)長期為陰性。符合以上條件，才能滿足PRV凈化要求。

3 討論

偽狂犬病具有高度傳染性，易在豬群間傳播，對(duì)其控制主要依賴于疫苗的免疫接種[11]。在歐美等發(fā)達(dá)國家，使用基因缺失疫苗和相應(yīng)的血清學(xué)鑒別診斷方法，該病已得到控制或根除[12-13]。本研究所檢測(cè)的豬血清樣品采自河南省部分規(guī)模化豬場(chǎng)，各場(chǎng)均進(jìn)行過PRV gE基因缺失疫苗的免疫。gB抗體的檢測(cè)是評(píng)價(jià)疫苗免疫保護(hù)效果的依據(jù)。當(dāng)豬接種了PRV gE基因缺失疫苗后，將產(chǎn)生缺少gE糖蛋白的抗體，而豬一旦感染野毒后，會(huì)產(chǎn)生針對(duì)所有蛋白抗原的抗體，與野毒抗體產(chǎn)生區(qū)別，所以應(yīng)用PRV gE抗體ELISA試劑盒能準(zhǔn)確地檢測(cè)出PRV野毒感染抗體。PRV gB蛋白產(chǎn)生的抗體與中和保護(hù)率相關(guān)，gB蛋白的抗體高低直接反應(yīng)中和抗體保護(hù)的效果。通過gB和gE抗體的檢測(cè)，可以掌握偽狂犬病在種豬群中的感染和免疫情況，從而為防制狂犬病作出合理的評(píng)估[14-15]。本次檢測(cè)的10個(gè)豬場(chǎng)中僅有豬場(chǎng)7和豬場(chǎng)8未檢測(cè)到豬偽狂犬病原，gE ELISA和FQ-PCR均為陰性。對(duì)比豬偽狂犬陽性豬場(chǎng)，發(fā)現(xiàn)陽性場(chǎng)的平均免疫抗體合格率普遍較低，并與病原學(xué)檢測(cè)陽性個(gè)數(shù)呈正相關(guān)性；而豬場(chǎng)4的抗體合格率高于90%，亦檢測(cè)出1份核酸陽性，分析原因發(fā)現(xiàn)：該豬場(chǎng)被檢樣本的抗體水平之間存在較大的變異值，說明豬群的免疫抗體水平參差不齊，可能存在某些豬只的免疫水平過低，不能抵抗野毒侵襲。

從長期監(jiān)測(cè)結(jié)果可以看出，要保證豬群不被野毒感染，豬群的免疫抗體需要達(dá)到一定水平，平均免疫抗體合格率需高于90%，豬群之間抗體水平變異值不得高于15%，并且需長期維持該水平。在外界環(huán)境剌激下，豬群免疫力可能有所減弱，潛伏狀態(tài)的病毒便可轉(zhuǎn)化為具有感染性的病毒。因此，持續(xù)監(jiān)測(cè)豬偽狂犬病免疫效果對(duì)該病的預(yù)防和凈化至關(guān)重要。