，，

(1.呼倫貝爾市蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 海拉爾 021000； 2.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014040)

多葉棘豆為豆科類多年生植物狐尾藻棘豆[OxytropisMyriophy(Pall.) DC.]，蒙古名為“娜布其爾哈格·敖日道扎”，異名為“查干·達(dá)格沙”，具有“本草之王”的美名，是常用蒙藥材。味苦、甘，性涼；具有殺“粘”，清熱、燥黃水、愈傷、生肌、鎖脈止血、消腫等功效；主治瘟疫、炎癥、丹毒、腮腺炎、腸刺痛、腦刺痛、麻疹、痛風(fēng)、游痛癥、創(chuàng)傷、月經(jīng)過多、吐血等癥狀。是蒙醫(yī)臨床常用藥“青鳳丸”,“七雄丸”方劑中之君。近年來以多葉棘豆為主要配方，研發(fā)了擦劑、糊劑、洗劑等多種劑型，臨床應(yīng)用極其廣泛。多葉棘豆化學(xué)成分、藥理作用等方面報(bào)道較多，野生馴化與栽培方面報(bào)道較少。本研究通過人工氣候箱模擬自然環(huán)境，采用物理、化學(xué)、機(jī)械法處理種子破除硬實(shí)，使發(fā)芽率提高，為多葉棘豆野生馴化種植提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材 料

材料多葉棘豆野生種子于2016年7月中旬采自內(nèi)蒙古呼倫貝爾市新巴爾虎左旗。經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院布和巴特教授鑒定為多葉棘豆種子。

烘箱(永光明醫(yī)療儀器廠101型號) ，人工氣候箱子450 N(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司)，電子天平(梅特勒-托利多儀器ME 204)；電子顯微鏡(奧林巴斯CX 23)，培養(yǎng)皿，濾紙，蒸餾水，赤霉素。

2 方 法

2.1 種子形態(tài)特征

在電子顯微鏡下觀察種子形態(tài)，并測量種子大小。對種子進(jìn)行拍照。

2.2 凈度檢驗(yàn)和千粒重

采用四分法，將已抽取的樣品倒在光潔的桌面上，把凈種子、廢種子和雜質(zhì)(其他植物種子和夾雜物)分開，分別稱重，重復(fù)3次，計(jì)算種子凈度。千粒重的測定采用四分法，從每份中隨機(jī)取250粒，共1 000粒為1組，3次重復(fù)。

種子凈度(%)=[1-(廢種子含量+雜質(zhì)含量)/種子總量]×100%。

2.3 含水量測定

稱重后磨碎105 ℃烘干，直至連續(xù)稱量3次重量不發(fā)生變化，共設(shè)3次重復(fù)。

種子水分(%)=[(烘前試樣重-烘后試樣重)/烘前試樣重]×100%。

2.4 種子發(fā)芽率測定

2.4.1 砂擦方法

采用6種(100～500目)砂紙對種子進(jìn)行摩擦處理2～4 min，在電子顯微鏡觀察劃種皮程度，通過反復(fù)試驗(yàn)后確定220目的砂紙?zhí)幚? min后的種子有均勻條形劃痕的同時星狀露白為標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.2 砂擦后熱水浸泡

將2.4.1中砂擦處理的種子分別用50，60，70，80 ℃蒸餾水浸種子1 h，自然降至室溫后倒掉水，放置培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)，對照組用砂擦后蒸餾水常溫浸泡相同時間。

2.4.3 熱水浸種

分別用50，60，70，80 ℃蒸餾水浸種子1 h，自然降至室溫后倒掉水，用濾紙吸干種子表面的水，對照組用蒸餾水常溫浸泡相同時間。

2.4.4 赤霉素處理

用250，300，350 gm/L濃度的赤霉素分別處理6 h、12 h，傾去赤霉素，迅速用自來水沖洗3次后做發(fā)芽試驗(yàn)。對照用蒸餾水浸種至相同時間。

各組實(shí)驗(yàn)挑選25粒飽滿成熟種子，處理后播于放有濾紙的培養(yǎng)皿里，常溫作為對照組，放置10，15，20 ℃人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，光照8 h，16 h黑暗，每組重復(fù)3次。每天18：00時觀察記錄1次發(fā)芽數(shù)，種子發(fā)芽以種子露出胚根1 mm以上為標(biāo)準(zhǔn)，種子發(fā)芽結(jié)束以連續(xù)5 d沒有新發(fā)芽的種子為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)全程及時給培養(yǎng)皿補(bǔ)水。

初始萌發(fā)時間：培養(yǎng)皿第1粒種子萌發(fā)的天數(shù)；

初次計(jì)數(shù)時間：達(dá)到50%發(fā)芽率的天數(shù)；

末次計(jì)數(shù)時間：種子萌發(fā)達(dá)到最高時，以后再無萌發(fā)種子出現(xiàn)時的天數(shù)；

發(fā)芽勢：發(fā)芽勢測定為5 d。

2.4.5 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

發(fā)芽率(%)=(n/N)×100%，式中：n為正常發(fā)芽的種子數(shù)，N為供試種子數(shù)；

發(fā)芽勢(%) =(5 d內(nèi)發(fā)芽種子數(shù)/供試種子總數(shù))×100%。

3 結(jié)果與分析

3.1 多葉棘豆生物學(xué)特征

多葉棘豆在顯微鏡下可以看到，腎臟形，顏色以褐色和黑色較多，表面光滑發(fā)亮，具有紋理，并有一層蠟狀物質(zhì)，其種子長為1.22 mm，寬為0.94 mm。其千粒重為1.168 g，凈度為76%，含水量為5%。

3.2 不同方法對種子萌發(fā)的影響

3.2.1多葉棘豆種子粒小，種皮特別硬，吸水率差。通過4種方法17個試驗(yàn)組都能不同程度的破除種皮，提高發(fā)芽率。由表1可看出，砂擦可顯著提高多葉棘豆萌發(fā)率，砂擦后常溫蒸餾水里浸泡的種子萌發(fā)率達(dá)到84%，發(fā)芽勢66.7%；通過用4個溫度熱水和3個濃度赤霉素浸泡對多葉棘豆種子很難破除種子硬實(shí)現(xiàn)象，與對照組比較萌發(fā)率無明顯提高，而且實(shí)驗(yàn)過程中熱水浸泡的種子出現(xiàn)糜爛現(xiàn)象。

3.2.2從圖2可看出，砂擦組與砂擦+常溫浸泡實(shí)驗(yàn)組，15 ℃萌發(fā)條件時的發(fā)芽率最高，同種實(shí)驗(yàn)方式下，20 ℃效果次之，10 ℃發(fā)芽率較低。綜合來看，砂擦+常溫方式15 ℃時為最佳發(fā)芽環(huán)境。

圖1 多葉棘豆種子

表1 不同方法對種子萌發(fā)的影響

圖2 17個實(shí)驗(yàn)組與不同萌發(fā)溫度下發(fā)芽率的變化曲線

4 結(jié)論與討論

多葉棘豆為豆科棘豆屬植物，具有硬實(shí)的種皮，使得其種子萌發(fā)困難，而種子萌發(fā)技術(shù)是開展多葉棘豆野生馴化、種子育苗與規(guī)范化種植的關(guān)鍵技術(shù)，目前關(guān)于多葉棘豆種子萌發(fā)的研究比較少。本實(shí)驗(yàn)通過顯微鏡對多葉棘豆種子的生物學(xué)特征進(jìn)行研究，并采用機(jī)械破皮法、物理法和化學(xué)法3種方法對多葉棘豆種子萌發(fā)率低的特點(diǎn)進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3種方法中，機(jī)械破皮對種子萌發(fā)影響最大，僅經(jīng)過砂擦處理的種子，萌發(fā)率在70%以上，物理法的研究發(fā)現(xiàn)，15～20 ℃對于多葉棘豆種子的萌發(fā)相對較好，10 ℃的萌發(fā)率相對較低?；瘜W(xué)法發(fā)現(xiàn)赤霉素浸泡過的種子發(fā)芽率基本無明顯提高。從17種試驗(yàn)方法中發(fā)現(xiàn)，砂擦與砂+常溫2種實(shí)驗(yàn)方式下，15 ℃發(fā)芽溫度是最佳促發(fā)芽方法，發(fā)芽率達(dá)到84%。因此可以看出，物理法和機(jī)械破皮法對多葉棘豆的種子萌發(fā)影響較大，而化學(xué)法的影響則相對較低。本研究對于蒙藥材多葉棘豆野生馴化種植提供可靠地實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的同時對于蒙藥材規(guī)?；a(chǎn)中機(jī)械破皮等技術(shù)提供理論依據(jù)。