袁曉陽(yáng) 周丹 李士軍 秦桂娥 靳巖

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116011)

我國(guó)胃癌患者發(fā)病率和死亡率高,且患者就診時(shí)大多已進(jìn)入中晚期〔1〕。因此，在我國(guó)的胃癌控制工作中，預(yù)防和早期診斷極為重要。目前臨床上常應(yīng)用癌胚抗原(CEA)、糖鏈抗原(CA)72-4等血清腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行胃癌的早期篩查，但是確診病情和疾病分型等方面并不能盡如人意〔2〕。惡性腫瘤細(xì)胞中產(chǎn)生的代謝物含量與非惡性腫瘤細(xì)胞不同〔3〕。5-羥吲哚乙酸(HIAA)是5-羥色胺(HT)經(jīng)單氨氧化酶作用氧化脫氨形成的，是5-HT的主要代謝產(chǎn)物。人體內(nèi)的5-HIAA經(jīng)過自然代謝，幾乎均由尿液排泄。目前，尿液5-HIAA的檢測(cè)已經(jīng)被作為診斷神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤如類癌的腫瘤標(biāo)志物〔4〕。本研究擬探討 5-HIAA是否可以應(yīng)用于早期胃癌的篩查，以提高胃癌早期診斷率。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選取2016年8月至2017年2月在大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院初診疑似胃癌的住院患者70例為研究對(duì)象，男41例，女29例，年齡37～78歲；經(jīng)胃鏡確診為各型胃炎的患者12例，男8例，女4例，年齡53～71歲；選取同時(shí)期50例不同職業(yè)、性別、年齡的健康體檢者為正常對(duì)照組。排除既往有內(nèi)分泌及免疫性疾病、血液病、消化系統(tǒng)等惡性腫瘤的患者，以及體檢前一日使用過激素類、抗炎類等影響代謝的藥物治療者。

1.2材料 5-HIAA檢測(cè)試劑盒(Test-Reagent for 5-hydroxyindole acetic acid，URC)，由武漢市晨康科技有限責(zé)任公司提供，醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)：國(guó)械注準(zhǔn)20143401815號(hào)，批號(hào)：20151116。

1.3方法

1.3.1樣本采集與處理 在大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院嘉禾病例系統(tǒng)上，采集70例初診疑似胃癌患者的病理診斷結(jié)果及CEA、CA72-4的檢驗(yàn)結(jié)果。病理診斷結(jié)果及CEA、CA72-4的檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與5-HIAA檢測(cè)時(shí)間一致。病理診斷結(jié)果確診為胃癌者標(biāo)記為有癌(+)，否則標(biāo)記為無癌(-)；CEA正常參考范圍0～5 ng/ml，CA72-4正常參考范圍0～6.9 U/ml，超出正常參考范圍標(biāo)記為陽(yáng)性(+)，否則標(biāo)記為陰性(-)。5-HIAA 和CEA、CA72-4聯(lián)合診斷有一項(xiàng)陽(yáng)性則標(biāo)記為陽(yáng)性(+)。

1.3.2尿5-HIAA檢測(cè)方法 采用比色法，嚴(yán)格按照操作說明書進(jìn)行檢測(cè)。取三組受檢者的清潔晨尿3 ml加入裝有0.5 ml試劑的安瓿中，搖勻后靜置3～5 min，將沉淀物顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色板對(duì)照以判定結(jié)果。無沉淀物或沉淀物無色或淺黃色判定為陰性，沉淀物為深黃色或紅褐色等判定為陽(yáng)性。若出現(xiàn)綠色等為干擾色，則剔除此病例。受檢者前一日應(yīng)忌酒，忌對(duì)檢測(cè)結(jié)果可能有影響的食物和藥物，低蛋白飲食，留取尿液樣本后立即測(cè)試。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，繪制受試者工作特征(ROC)曲線，獲得曲線下面積(AUC)。

2 結(jié) 果

2.1正常對(duì)照組、胃炎組與胃癌組5-HIAA陽(yáng)性率比較 胃癌組、胃炎組和正常對(duì)照組5-HIAA陽(yáng)性率分別為67.14%(47例)、16.70%(2例)、2.00%(1例)，組間比較有顯著差異(χ2=55.124，P=0.000)。其中胃癌組與正常對(duì)照組(χ2=57.571，P=0.000)、胃癌組與胃炎組之間(χ2=10.835，P=0.003)有顯著差異，而正常對(duì)照組與胃炎組之間無顯著差異(χ2=4.521，P=0.093)。

2.25-HIAA與胃癌診斷金標(biāo)準(zhǔn)的比較 70例初診疑似胃癌的患者中，5-HIAA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性且病理確診為胃癌的病例44例，5-HIAA檢測(cè)結(jié)果陰性且病理檢查結(jié)果確定沒有癌癥的病例7例，5-HIAA陽(yáng)性但病理檢查結(jié)果陰性3例，5-HIAA陰性但病理檢查陽(yáng)性16例。5-HIAA與胃癌病理結(jié)果符合率為72.86%，靈敏度為73.33%，特異性為70%。

2.35-HIAA、CEA、CA72-4單獨(dú)及聯(lián)合診斷胃癌的靈敏度和特異性比較 70例初診疑似胃癌患者中，進(jìn)行CEA檢驗(yàn)的共有56例，陽(yáng)性率為69.64%，靈敏度為80.00%，特異性為42.31%；進(jìn)行CA72-4檢驗(yàn)的共28例，陽(yáng)性率為57.14%，靈敏度為60.00%，特異性為66.67%；5-HIAA與CEA、CA72-4兩項(xiàng)及以上聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為78.57%，靈敏度為96.30%，特異性為76.92%。聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率、靈敏度、特異性均顯著高于單獨(dú)檢測(cè)5-HIAA(均P<0.05)。

2.4繪制單獨(dú)檢測(cè)5-HIAA與聯(lián)合CEA、CA72-4診斷胃癌的ROC曲線 5-HIAA+CEA+CA72-4聯(lián)合檢測(cè)診斷早期胃癌的AUC為0.958，95%CI為0.914～1.000；高于單獨(dú)檢測(cè)5-HIAA診斷早期胃癌的AUC(0.892)及95%CI(0.817～0.966)。見圖1。

圖1 單獨(dú)檢測(cè)5-HIAA與聯(lián)合檢測(cè)CEA、CA72-4診斷胃癌的ROC曲線

3 討 論

胃鏡活檢和X線鋇餐檢查是我國(guó)胃癌診斷的常用方法。胃鏡檢查圖像清晰，對(duì)病變部位和范圍觀察直觀，并且能夠判斷腫瘤的浸潤(rùn)深度、轉(zhuǎn)移情況及臨床術(shù)前分期；X線鋇餐比胃鏡檢查痛苦小，并且能夠?qū)ξ赴┎≡钸M(jìn)行定位、定量〔5〕。但是二者有各自的方法學(xué)局限：胃鏡活檢是一種有創(chuàng)傷性檢查，老年、體弱、危重患者難以承受，且有并發(fā)胃穿孔、出血、心血管意外等疾病的風(fēng)險(xiǎn)；X線鋇餐較胃鏡陽(yáng)性率低，不能進(jìn)行活檢，敏感度較低，且二者發(fā)現(xiàn)病灶時(shí)大多已進(jìn)入中晚期，早期診斷率低。

胃癌腫瘤標(biāo)志物是進(jìn)行胃癌早期篩查的有效手段。血清、腹水、胃液、尿液等〔6〕均可以進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。近年發(fā)展起來的新的檢測(cè)指標(biāo)——癌癥尿液篩查監(jiān)測(cè)試劑(URC)就是通過分析尿液中代謝物質(zhì)對(duì)人群癌癥進(jìn)行篩查。惡性腫瘤常伴隨細(xì)胞代謝活性改變，導(dǎo)致氨基酸等代謝紊亂，因此癌癥患者尿液中色氨酸及其代謝衍生物(5-HIAA)的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常人〔7〕。URC可以與異常代謝的物質(zhì)發(fā)生特異性顏色反應(yīng)，然后與標(biāo)準(zhǔn)比色板比較，即可判定被試者體內(nèi)是否有癌細(xì)胞代謝活動(dòng)，從而達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療的效果。本研究中的5-HIAA試劑盒即為URC的一種。

5-HIAA的檢測(cè)方法主要有4種：高效液相色譜法(HPLC)、質(zhì)譜法(MS)、熒光分析法、比色法。通常用HPLC法同時(shí)測(cè)定5-HT、5-HIAA含量，具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。其中，用HPLC-FLD分離5-HT、5-HIAA效果良好，且在7 min內(nèi)能使二者同時(shí)出峰〔8〕。除此之外，HPLC與其他檢測(cè)方法聯(lián)合檢測(cè)5-HIAA，大大提高了檢測(cè)時(shí)間和靈敏度。馮成亞等〔9〕建立了在線衍生-HPLC法同時(shí)測(cè)定血漿中色氨酸及其衍生物5-HIAA等濃度的方法，利用醋酸鋅在線衍生的HPLC進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量，此法快速簡(jiǎn)便，線性相關(guān)性好，內(nèi)源性物質(zhì)干擾小，適合臨床常規(guī)檢測(cè)。段虹飛等〔10〕采用HPLC串聯(lián)MS測(cè)定人血清中5-HIAA含量，平均回收率可達(dá)92.1%～96.5%，且線性范圍寬、分析時(shí)間短，能更好地滿足臨床需求。

傳統(tǒng)的比色法是用亞硝基萘酚比色法檢測(cè)5-HIAA〔11〕，首先將酸化后的尿液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，然后用1-亞硝基-2-萘酚及亞硝酸進(jìn)行顯色，最后用l，2-二氯乙烷進(jìn)行抽提〔12〕。Goldenberg〔13〕在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，在原有試劑中加入2-巰基乙醇提高了檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確性。雖然傳統(tǒng)的比色法經(jīng)多次改進(jìn)，特異性與準(zhǔn)確性已有所提高，但操作復(fù)雜，不適合臨床快速檢測(cè)。本研究采用5-HIAA試劑盒，簡(jiǎn)便快速，通過汞鹽與5-HIAA發(fā)生特征顯色反應(yīng)，再與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較顏色的不同即可判定被測(cè)試者體內(nèi)是否有相關(guān)的代謝異常。本研究結(jié)果表明，胃癌患者的尿5-HIAA排泄量較胃炎患者和正常人明顯升高，且胃癌患者與胃炎患者、正常人的5-HIAA排泄功能有差異，但正常人與胃炎患者的排泄功能無差異。

因?yàn)榘┌Y患者腫瘤細(xì)胞異常代謝釋放大量的5-HT,導(dǎo)致尿中5-HIAA 排泄量明顯增多，可達(dá)156.9～3 138 mol/24 h〔4〕。臨床研究證實(shí)，24 h尿5-HIAA檢測(cè)類癌的特異性為85%～90%，靈敏度高達(dá)100%,診斷空回腸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的靈敏度為70%～75%，特異性可達(dá)100%〔12，14〕。本研究可以初步得出結(jié)論，5-HIAA 檢測(cè)胃癌的靈敏度較高，特異性較好，可以作為腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行胃癌的早期篩查。

胃癌的腫瘤標(biāo)志物主要包括蛋白類、糖類、基因類三種。蛋白類腫瘤標(biāo)志物主要為CEA、胃蛋白酶原(PG)、組織多肽特異性抗原(TPS)；糖類腫瘤標(biāo)志物主要包括CA72-4、CA19-9、CA24-2；基因類腫瘤標(biāo)志物主要有p53基因、p16基因、nm23基因。其中CEA特異性為50%～92%，在胃黏液腺癌、印戒細(xì)胞癌的陽(yáng)性率高于其他組織，廣泛應(yīng)用于消化系統(tǒng)腫瘤的輔助診斷；CA72-4的胃癌診斷價(jià)值高于CEA等，對(duì)胃癌有較高的敏感性，對(duì)胃癌患者的陽(yáng)性率為36%～94%，故是檢測(cè)胃癌首選的腫瘤標(biāo)志物〔15〕。目前臨床上多采用多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)以提高診斷率，如聯(lián)合檢測(cè)CEA、CA19-9、 CA72-4是早期診斷胃癌的有效手段之一〔16〕。本研究中聯(lián)合檢測(cè)相較于單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)靈敏度更高，特異性更強(qiáng)。

5-HIAA的檢測(cè)會(huì)受到很多食物和藥物的影響，如菠菜、西蘭花、椰菜花、退熱冰、利血平、非那西丁等可使5-HIAA水平升高；而肝素、左旋多巴、異煙肼等可使5-HIAA水平降低。故進(jìn)行5-HIAA檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意飲食，避免食物和藥物對(duì)檢測(cè)造成干擾，出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果〔17〕。本研究因受時(shí)間和條件的影響，未能對(duì)正常對(duì)照組和胃炎組中5-HIAA陽(yáng)性病例進(jìn)行跟蹤隨訪、查明原因，但不排除發(fā)展為胃癌的可能。

綜上所述，尿液5-HIAA的發(fā)展為胃癌的早期無創(chuàng)性診斷提供了新思路，聯(lián)合檢測(cè)傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物CEA、CA72-4可以提高靈敏度和特異性。本研究存在一定的局限性，如比色法不能完全定量，且肉眼判定存在人為誤差；患者采集時(shí)間受限于癥狀的輕重程度，標(biāo)本來源單一；標(biāo)本量少，尤其胃炎組因大多數(shù)患者門診隨診不容易采集校本；回顧性研究存在偏倚，需要增加研究對(duì)象數(shù)量并跟蹤隨訪，以進(jìn)一步明確5-HIAA與早期胃癌的相關(guān)性。