王君明 李亞 李金花 崔瑛 李金洋 蔡泓 余洋 盧露 蔣慧 孫云娜

(河南中醫(yī)藥大學(xué) 1藥學(xué)院，河南 鄭州 450046；2呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心)

抑郁癥和焦慮癥均是糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥之一，糖尿病患者并發(fā)抑郁癥和(或)焦慮癥的概率均很大〔1,2〕。抑郁癥和焦慮癥對(duì)人的危害是嚴(yán)重的。就糖尿病而言，沉重的精神壓力、不良情緒不僅會(huì)使血糖升高，降低治療的依從性，還會(huì)加速心、腎等并發(fā)癥的發(fā)生，對(duì)病情的預(yù)后不利。反之，血糖控制不好，病情加重，又或會(huì)導(dǎo)致患者精神痛苦、悲觀等，加重他們的抑郁和(或)焦慮癥狀。中醫(yī)治療各種疾病有獨(dú)特之處，糖尿病并發(fā)抑郁癥和(或)焦慮癥發(fā)病率高，且社會(huì)危害大，但至今缺乏針對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥和(或)焦慮癥進(jìn)行防治的藥物。本研究旨在考察解郁怡神茶飲(JYYSCY)防治糖尿病并發(fā)抑郁癥或焦慮癥的藥理作用。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 昆明(KM)小鼠，SPF級(jí)，雄性，體重18～22 g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔SCXK(豫) 2015-0004〕。

1.2試藥與行為學(xué)裝置 金銀花：產(chǎn)地河南，批號(hào)150501，經(jīng)本校藥學(xué)院生藥學(xué)科陳隨清教授鑒定為忍冬科忍冬屬植物忍冬Lonicera japonica Thunb.干燥花蕾；雞血藤：產(chǎn)地廣西，批號(hào)：150701，經(jīng)本校藥學(xué)院生藥學(xué)科陳隨清教授鑒定為豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤莖；合歡花：產(chǎn)地湖南，批號(hào)150303，經(jīng)本校藥學(xué)院生藥學(xué)科陳隨清教授鑒定為豆科植物合歡Albizia julibrissin Durazz.的干燥花序；首烏藤：批號(hào)150613，經(jīng)本校藥學(xué)院生藥學(xué)科陳隨清教授鑒定為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的干燥藤莖。鏈脲佐菌素(STZ)購(gòu)于Sigma公司。大小鼠高架十字迷宮(EPM)系統(tǒng)：PM-200，成都泰盟軟件有限公司；明暗箱系統(tǒng)：型號(hào)：XR-XB113，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：型號(hào)：XR-XQ202，懸尾系統(tǒng)：型號(hào)：XR-XX203，均上海欣軟信息科技有限公司。

1.3JYYSCY制備 按照解郁怡神方(金銀花、雞血藤、合歡花和首烏藤各等分組成)，每1 g解郁怡神方粗粉加50 ml沸水(W/V=1∶50)浸泡6次，每次5 min，合并每次泡茶液，減壓回收水，使藥液的濃度以生藥計(jì)算，每1 ml的JYYSCY含解郁怡神方1 g。

1.4動(dòng)物分組、造模及處理 將實(shí)驗(yàn)小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d,隨機(jī)選10只為對(duì)照組(非STZ處理)，其余小鼠一次性大劑量腹腔注射(ip)STZ 150 mg/kg造高血糖模型。72 h后尾靜脈取血用血糖儀測(cè)定血糖值，選取血糖值≥11.1 mmol/L的小鼠作為STZ糖尿病模型小鼠納入實(shí)驗(yàn)。STZ組及JYYSCY組從成功造高血糖模型的動(dòng)物中均衡分組獲得，每組10只。實(shí)驗(yàn)共分5組，即對(duì)照組、STZ組、JYYSCY低劑量組:STZ+JYYSCY(1 g/kg)、JYYSCY中劑量組:STZ+JYYSCY(2 g/kg)、JYYSCY高劑量組:STZ+JYYSCY(4 g/kg)。STZ組和對(duì)照組給予同體積生理鹽水。自分組當(dāng)天開(kāi)始1 次/d連續(xù)灌胃(ig)給藥，從給藥第14天開(kāi)始，均在當(dāng)天給藥1 h后進(jìn)行一項(xiàng)行為學(xué)測(cè)試。

1.5行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

1.5.1EPM實(shí)驗(yàn) 在給藥第14天進(jìn)行。將小鼠置于規(guī)格：300 mm×60 mm，開(kāi)臂臂高6 mm，閉臂臂高150 mm的距地面高500 mm的EPM開(kāi)臂與閉臂交匯處，頭朝向任一開(kāi)臂，通過(guò)PMT-100十字迷宮視頻分析系統(tǒng)監(jiān)視記錄小鼠5 min內(nèi)的活動(dòng)軌跡，分別以小鼠在EPM的開(kāi)臂滯留時(shí)間百分比(OT%)和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)百分比(OE%)作為抗焦慮評(píng)價(jià)指標(biāo)〔3〕。

1.5.2明暗穿箱(LDT)實(shí)驗(yàn) 在給藥第15天進(jìn)行。將小鼠背對(duì)暗室置于明箱中央，用STT-100穿梭實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)記錄10 min內(nèi)小鼠穿箱次數(shù)(以四肢均穿過(guò)門(mén)洞為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)為1次)，以穿箱次數(shù)(NT)作為評(píng)價(jià)藥物抗焦慮作用的指標(biāo)〔3〕。

1.5.3懸尾實(shí)驗(yàn)(TST) 在給藥第16天進(jìn)行。將單個(gè)小鼠尾端(在距尾尖部2～3 cm處)用醫(yī)用膠帶粘于懸尾箱上部支架上，成倒掛樣，小鼠為克服非正常體位而掙扎，但活動(dòng)一段時(shí)間出現(xiàn)間斷性行為絕望狀態(tài)，懸掛時(shí)間為6 min，TST-100系統(tǒng)分析并記錄6 min內(nèi)懸尾累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(不動(dòng)狀態(tài)即小鼠停止掙扎或無(wú)任何活動(dòng))，以該不動(dòng)時(shí)間作為評(píng)價(jià)抗抑郁作用的指標(biāo)〔4〕。

1.5.4強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST) 在給藥第17天進(jìn)行。將小鼠放于規(guī)格：180 mm×350 mm透明塑料圓柱直桶內(nèi)，水溫20～25℃的容器內(nèi)，從小鼠入水后計(jì)時(shí)6 min，通過(guò)FST-100強(qiáng)迫游泳軟件系統(tǒng)觀察并記錄后4 min內(nèi)小鼠累計(jì)漂浮不動(dòng)的時(shí)間(即小鼠在水中停止掙扎，或呈現(xiàn)漂浮狀態(tài)，僅有前肢運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮出水面)，以該不動(dòng)時(shí)間作為評(píng)價(jià)抗抑郁作用的指標(biāo)〔4〕。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析及組間兩兩比較用LSD法。

2 結(jié) 果

2.1各組EPM和LDT實(shí)驗(yàn)中焦慮行為比較 與對(duì)照組比較，STZ組OT%、OE%及NT均有降低趨勢(shì)，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)；與STZ組比較，JYYSCY中、高劑量組均使OT%、OE%和NT顯著升高(P<0.05，P<0.01)，而JYYSCY低劑量組OT%和OE%與STZ組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但NT顯著高于STZ組(P<0.01)。JYYSCY中、高劑量比較，各指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組EPM和LDT實(shí)驗(yàn)中焦慮行為比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與STZ組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

2.2各組FST和TST實(shí)驗(yàn)中懸尾不動(dòng)時(shí)間比較 與對(duì)照組比較，STZ組TST中懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著升高(P<0.01)，而FST中游泳不動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著差異(P>0.05)；與STZ組比較，JYYSCY中、高劑量組FST及TST不動(dòng)時(shí)間均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，JYYSCY低劑量組FST和TST不動(dòng)時(shí)間與STZ組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。JYYSCY中、高劑量組比較，各指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組FST和TST實(shí)驗(yàn)中懸尾 不動(dòng)時(shí)間比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.01；與STZ組比較：2)P<0.05，3)P<0.01

3 討 論

本項(xiàng)目組在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，以金銀花、雞血藤、合歡花、首烏藤為主要原料組成解郁怡神方，并且以該方開(kāi)發(fā)JYYSCY。其中，金銀花藥性甘、寒，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱之功，用于癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等病證；雞血藤藥性苦、甘、溫，歸肝、腎經(jīng)，具有活血補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)止痛、舒筋活絡(luò)之功，用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、風(fēng)濕痹痛、麻木癱瘓、血虛萎黃等病證；合歡花藥性甘、平，歸心、肝經(jīng)，具有解郁安神之功，用于心神不安、憂郁失眠等證；首烏藤藥性甘、平，歸心、肝經(jīng)，具有養(yǎng)血安神、祛風(fēng)通絡(luò)之功，用于失眠多夢(mèng)、血虛身痛、風(fēng)濕痹痛、皮膚瘙癢等病證。本研究以金銀花、雞血藤、合歡花、首烏藤為主要原料制成的中藥保健茶，同時(shí)發(fā)揮了合歡花與首烏藤解郁養(yǎng)心安神、金銀花解熱除煩、雞血藤補(bǔ)血活血和通經(jīng)通絡(luò)之功，有望用于多種類型的高血糖、糖尿病并發(fā)焦慮癥和(或)抑郁癥的防治。此外，金銀花藥性偏寒涼而雞血藤性偏溫，合歡花和首烏藤為平性，整個(gè)茶的配方近于平性，避免了長(zhǎng)期飲用偏寒或偏溫傷胃的弊端；同時(shí)所選原料藥物均具有甘味，為本茶飲具有較好口感奠定了基礎(chǔ)。

本研究參考文獻(xiàn)〔5,6〕方法復(fù)制糖尿病模型，并復(fù)合焦慮抑郁裝置致并發(fā)焦慮抑郁模型，在此基礎(chǔ)上考察了JYYSCY防治糖尿病并發(fā)焦慮抑郁癥的藥理作用。研究結(jié)果顯示，JYYSCY顯著改善了STZ小鼠在EPM和LDT實(shí)驗(yàn)中的焦慮行為，抑制了STZ小鼠在FST和TST的抑郁行為，提示JYYSCY對(duì)STZ小鼠具有抗焦慮和抗抑郁作用，說(shuō)明本研究開(kāi)發(fā)的JYYSCY有望用于糖尿病并發(fā)焦慮癥和(或)抑郁癥的防治?，F(xiàn)代研究表明，金銀花〔7〕及其所含的活性成分綠原酸〔8〕和木犀草苷〔9〕、雞血藤中芒柄花素〔10〕和首烏藤中大黃素〔11〕均具有降糖作用，首烏藤中活性成分2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷〔12〕尚具有改善糖尿病腎病并發(fā)癥作用，合歡花中槲皮苷〔13〕和合歡花皂苷C1〔14〕均具有抗焦慮作用，合歡花總黃酮〔15〕具有抗抑郁作用。JYYSCY防治糖尿病并發(fā)焦慮癥或(和)抑郁癥的作用，這可能與其組成藥物金銀花、雞血藤、首烏藤和合歡花中多種活性成分綜合作用有關(guān)。