王潔清

（成都天邦生物制品有限公司，成都 610100）

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）可引起的豬的接觸性腸道傳染病。豬流行性腹瀉于1971 年英國獸醫(yī)科技人員首先報道，其特征為初生仔豬嘔吐、腹瀉、脫水，疫病爆發(fā)中初生仔豬死亡率達90%。

豬傳染性胃腸炎由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的易發(fā)、多發(fā)高度接觸性的急性腸道傳染病，臨床變化和癥狀與豬流行性腹瀉極為相似。豬傳染性胃腸炎主要發(fā)生在氣溫低的冬季和春季，成年豬和仔豬都會傳染、發(fā)病，尤以仔豬傳染、發(fā)病嚴重，＜5日齡的仔豬染病，死亡率95%～100%。本文介紹了國內豬流行性腹瀉相關疫苗上市情況及國內生產工藝研究進展。

1 豬流行性腹瀉免疫機制的推廣

1995 年，國內外開始用豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒二聯(lián)疫苗，通過免疫產前母豬，使其乳汁中含有豐富的豬流行性腹瀉IgA 和IgG 抗體，仔豬攝入后能引起腸道黏膜保護機制，以達到保護出生仔豬的目的。2009 年10月～2010年2月，我國各地發(fā)生腹瀉的比例最為嚴重，引起的傳播性、傳染性、死亡性強，有的規(guī)?；B(yǎng)殖場一旦發(fā)生流行性腹瀉則在6 周內仔豬高達100%死亡，后續(xù)死亡率逐漸降低。行業(yè)專家初步估計，近6 年由豬流行性腹瀉和傳染性胃腸炎病毒造成全國仔豬死亡估計有上千萬頭，直接損失已高達上億元。隨著病毒變異及豬場養(yǎng)殖規(guī)模增大，該病的危害日益突顯。因此，提高免疫效果必須了解抗體產生保護作用的機制。

2 同類疫苗的種類

2.1 滅活苗

早期研究主要集中在豬流行性腹瀉病毒滅活疫苗的研制。目前上市的豬流行性腹瀉滅活疫苗有：豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒（G5 型）三聯(lián)活疫苗（弱毒華毒株+弱毒CV777 株+NX 株），豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎滅活疫苗經典毒株，豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎滅活疫苗（WH-1 株+AJ1102 株）。處于新獸藥臨床階段的同類產品有豬流行性腹瀉滅活疫苗（XJ-DB2 株）、豬流行性腹瀉滅活疫苗（KB-4clone13 株）、豬流行性腹瀉滅活疫苗（CHYJ株）。

2.2 弱毒苗

由于PED 在亞洲造成的經濟損失嚴重，經研究發(fā)現(xiàn)商品化弱毒疫苗取得了優(yōu)于傳統(tǒng)滅活疫苗的保護效果，因此，國內外各廠家陸續(xù)推出豬流行性腹瀉減毒活疫苗產品。目前上市的豬流行性腹瀉活疫苗有豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SCJY 株+SCSZ 株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1R 株+SAJ1102-R 株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SCJY-1 株+SCSZ-1 株）、豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08 株+ZH08 株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1株+AJ1102株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SD/L 株+LW/L 株）。處于新獸藥臨床階段的相關產品：豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（CT130株+HX115株）

3 豬流行性腹瀉病毒疫苗生產工藝

豬流行性腹瀉病毒滅活疫苗上市之初，全部是轉瓶工藝生產的產品，其廣泛的應用為我國減少豬流行性腹瀉發(fā)病做出了巨大的貢獻。但是隨著科技的發(fā)展，越來越多的病毒培養(yǎng)技術被廣泛應用，轉瓶生產工藝的占地面積大、污染風險高、半成品抗原效價低的缺點日益突現(xiàn)。

在細胞懸浮培養(yǎng)技術中最先開發(fā)的是微載體培養(yǎng)技術，經過60 余年的發(fā)展，該技術日趨完善和成熟，廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點，且容易放大。從2010 年以來國內部分廠家開始采用此方法生產豬流行性腹瀉病毒。近3 年來，豬流行性腹瀉的細胞全懸浮培養(yǎng)技術日趨成熟，相比微載體懸浮培養(yǎng)技術，其優(yōu)點是下游處理更加簡便、生產成本降低、單位體積內可達到的細胞密度是微載體懸浮培養(yǎng)方法的10 倍。無論是微載懸浮培養(yǎng)還是全懸浮培養(yǎng)，均需在生長液中添加約7%的血清。我國新生牛血清價格的不斷上漲、生產成本的增加、行業(yè)競爭的日益激烈，迫使再次對其生產工藝進行升級。目前，較為流行的是低血清全懸浮培養(yǎng)工藝。據(jù)報道，有的生產企業(yè)在生物反應器血清培養(yǎng)條件下，已成功獲得108.5TCID50·mL-1的病毒液。未來，低血清懸浮培養(yǎng)工藝、下游工藝的純化技術、豬流行性腹瀉基因工程疫苗勢必成為各大腹瀉疫苗生產廠家的研究方向，其適應性低血清培養(yǎng)的細胞技術、豬流行性腹瀉基因工程蛋白的免疫效果是亟待突破的重點技術瓶頸。