趙高峰

（周口市動物疫病控制中心，河南 周口 466000）

1 精液的收集和處理

可使用假陰道或電刺激射精法（即電刺激精囊和壺腹部）來采集公牛的精液。只要樣本的質(zhì)量較高，精子耐凍性和受胎率都應(yīng)當正常。但對由于基因問題不能通過自然交配使母牛受孕的公牛，不應(yīng)采用這種技術(shù)。

目前牛的人工授精大多數(shù)采用冷凍精液。冷凍精液可保質(zhì)數(shù)年。單次采集精液后使用精液稀釋液可以增加輸精劑量、延長精液受胎率的保持時間、保護精子細胞使之免受溫度或pH突然改變造成的影響，并延長精子的存活時間。精液的稀釋一般都采用在檸檬酸鹽緩沖卵黃稀釋液或經(jīng)熱處理的脫脂乳中，加入甘油、糖、酶和抗生素。在冷凍時，最終將精液稀釋、分裝為每管0.5 mL，內(nèi)含有2 000～3 000萬個精子。精液稀釋液一般都包含有A液和B液。

精液稀釋的第一步是在相同溫度下，如30℃，使用A液進行稀釋。然后將稀釋后的精液在40～50 min或更長時間內(nèi)冷卻至5℃。將稀釋后的精液在該溫度下保持3～4 h，以保證A液中的抗生素在被冷凍保護劑甘油抑制之前能夠完全發(fā)揮作用。B液中含有甘油（如14%），在5℃下按同等體積加入至稀釋后的精液中。每個人工授精中心有其標準稀釋液和操作程序。在以牛乳為基礎(chǔ)的稀釋液中可加入甘油（11%～13%）。在冷凍之前應(yīng)當將精液置于5℃下保持4～18 h。

為進行冷凍，通常將公牛精液分裝在有適當標識的塑料管中（0.25或0.5 mL）。許多類型的細胞都已知有最佳凍存速率，而精子細胞可耐受的凍存速率比較寬泛。在生產(chǎn)實踐中，首先將稀釋后的精液置于液氮蒸汽進行冷凍，然后再放入液氮中（-196℃）。精液可以在液氮罐中安全貯存＞20年，在運輸時也要將精液置于液氮罐中。必須對液氮罐中液氮量加以注意，以免在液氮罐損壞或液氮逐漸蒸發(fā)時出現(xiàn)精子死亡。由于精子細胞在解凍后存活時間較短，因此最好精液解凍后應(yīng)立即使用。精液解凍應(yīng)盡快進行以避免因過熱而造成精液損失。在生產(chǎn)實際中，可以將凍精管放在溫水中（35～36.5℃）≥30 s，進行解凍，然后立刻將精液輸入母牛生殖道內(nèi)。應(yīng)遵循處理精液的人工授精中心提供的操作規(guī)范。

2 人工輸精技術(shù)

用一次性毛巾徹底清洗外生殖器，然后一只手戴上手套后插入直腸內(nèi)，握住子宮頸。將裝有精液的輸精管通過外陰和陰道直接插入子宮頸外口。通過子宮頸上的操作，隨著輕輕按壓輸精管尖端，即可將輸精管穿過子宮頸皺襞進入宮頸口與子宮的交界處。應(yīng)當緩慢輸注精液（5 s），以避免造成精子死亡。最佳授精時間是發(fā)情期的后半期到隨后的6 h之內(nèi)。

雖然高受孕率與除精液之外的許多因素相關(guān)，但如果在人工授精時出現(xiàn)受孕問題，就應(yīng)當對精液進行檢查。解凍后精子的運動力是一個重要指標。在人工授精時注入足夠數(shù)量的活精子細胞是至關(guān)重要的。檢查精子細胞的形態(tài)也有助于評估不孕癥中精子的作用。在牛群內(nèi)，對使用可疑精液和使用其他公牛精液的妊娠鑒定情況進行比較是十分有用的。發(fā)情鑒定仍然是影響人工授精效率的最重要因素。最先檢查的應(yīng)當是發(fā)情鑒定，其他的檢查包括解凍溫度、實際輸精時的解凍時間、從解凍到輸精的溫度變化、輸精的部位和速度，以及衛(wèi)生消毒程序。如果采購的精液來源于信譽良好的供應(yīng)商，不孕通常不會是由于精液質(zhì)量問題造成的。

3 妊娠鑒定

要實現(xiàn)繁殖效率的最大化，建議進行妊娠鑒定。以肉牛為例，肉牛群的理想繁殖期（無論采用自然交配，還是人工授精）應(yīng)固定在60～70 d。在此期間，一般母牛都會有2～3次配種妊娠的機會。應(yīng)當鑒別出未妊娠或仍然需要配種的母牛；如果將這些牛仍然飼養(yǎng)在牛群中，以后還可能會產(chǎn)犢。這些母牛的維持成本很高但很重要，且不同牛場和不同年份差異很大。

肉牛的妊娠鑒定應(yīng)當在配種期結(jié)束后立即（如45～60 d）進行。如果配種期是在6月1初開始、8月初結(jié)束，那么就應(yīng)在9月下旬開始進行妊娠鑒定，此時牛群還在繼續(xù)享用豐盛的夏季牧草。然后，可能會在昂貴的冬季飼養(yǎng)開始前出售未妊娠的母牛。先對奶牛進行檢查以確定其妊娠狀態(tài)，以及是否要使用前列腺素F2α對未妊娠母牛進行同期發(fā)情，或定時進行人工授精。對未妊娠母?；蛏形催M行發(fā)情檢查的母牛，則通過評估卵巢中的黃體、卵泡和卵巢囊腫來決定使用哪種激素來誘導(dǎo)發(fā)情。妊娠鑒定和卵巢檢查最常用的方法是直腸觸診。而最近應(yīng)用更為普遍的一種替代方法是超聲檢查法。超聲檢查法具有以下優(yōu)點：可以較早檢查出非妊娠母牛（配種后28～32 d），也可以獲得卵巢和子宮狀態(tài)的診斷信息?？梢栽u估胚胎或胎兒的活力?？梢愿菀讬z查到雙胞胎?？梢源_定胎兒的性別?？梢愿鼫蚀_地確定胎兒月齡。可以顯示妊娠牛的孕體。

在對母牛進行妊娠鑒定時，可考慮同時進行牛群的其他健康檢查。這些檢查項目包括評估體況、生殖道、乳頭和乳房、腿部和蹄部、口腔的早期病變。此時還可以進行疫苗免疫接種、體內(nèi)和體外寄生蟲的控制以及肉用牛犢的處理。