方 蕾，費(fèi)巧玲，侯 睿，高 源，韓宜芯，齊睿娟，蔡潤(rùn)蘭，周 鴻，齊 云

（1.揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，江蘇揚(yáng)州 225009；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)研究院西苑醫(yī)院老年病中心，北京 100091）

Ⅰ型超敏反應(yīng)是機(jī)體受到致敏原刺激后產(chǎn)生的一種由IgE介導(dǎo)的異?；虿±硇悦庖叻磻?yīng)，主要由致敏原結(jié)合于IgE致敏的肥大細(xì)胞形成抗原-IgEIgE Fc段受體I（FcεRI）交聯(lián)而引發(fā)，造成細(xì)胞脫顆粒并釋放組胺等過敏介質(zhì)，引起血管通透性增加和平滑肌收縮等速發(fā)型反應(yīng)。目前抗過敏藥物的機(jī)制大多針對(duì)此環(huán)節(jié)，包括穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜并阻止顆粒介質(zhì)釋放的藥物色甘酸鈉和酮替芬（ketotifen），以及組胺H1受體拮抗劑氯雷他定（loratadine）等。事實(shí)上，Ⅰ型超敏反應(yīng)除組胺釋放等引起的早期速發(fā)相炎癥反應(yīng)外，還發(fā)生遲發(fā)性炎癥反應(yīng)，它通常是超敏反應(yīng)反復(fù)發(fā)作和遷延不愈的主要病理基礎(chǔ)［1］。通常這一過程在致敏原刺激8～12 h后發(fā)生，激活的肥大細(xì)胞持續(xù)合成、分泌炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）和前列腺素E2（prosta?glandin E2，PGE2）等，這些因子促進(jìn)了白細(xì)胞向炎癥區(qū)域募集和持續(xù)性組織水腫。因此，抑制Ⅰ型超敏反應(yīng)，不僅需要針對(duì)早期速發(fā)相炎癥反應(yīng)，對(duì)后期的遲發(fā)相炎癥反應(yīng)的控制也應(yīng)給予相當(dāng)?shù)闹匾暋?/p>

雙黃連（Shuanghuanglian，SHL）制劑是《中華人民共和國(guó)藥典》收錄的中藥復(fù)方，由黃芩、金銀花和連翹的提取物組成，臨床上作為抗微生物藥物，以多種給藥途徑用于治療細(xì)菌和病毒引起的上呼吸道感染和肺炎等。本課題組前期研究顯示，SHL注射液（SHL injection，SHLI）抑制脂多糖（lipopoly?saccharides，LPS）誘導(dǎo)的急性肺損傷與其抗炎和抗氧化作用密切相關(guān)［2-3］。

除常規(guī)適應(yīng)證外，SHLI也用于治療Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病，如支氣管哮喘［4］和濕疹［5］。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜的作用，這一作用源于直接活化肥大細(xì)胞線粒體鈣單向轉(zhuǎn)運(yùn)體，從而迅速降低胞質(zhì)鈣離子濃度［6］。結(jié)合本課題組前期發(fā)現(xiàn)的SHLI的抗炎作用，提示其機(jī)制可能是通過抑制P38和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶的磷酸化，從而減少LPS刺激的巨噬細(xì)胞TNF-α和IL-6等炎癥介質(zhì)的釋放［2-3］。由此推測(cè)，SHLI在Ⅰ型超敏反應(yīng)中，不僅可針對(duì)速發(fā)相的脫顆粒反應(yīng)，可能對(duì)遲發(fā)相時(shí)炎癥介質(zhì)的釋放也有作用。因此，本研究測(cè)定其體外對(duì)抗蝦原肌球蛋白（shrimp tropomyo?sin，ST）多抗血清誘導(dǎo)的大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞RBL-2H3脫顆粒和佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）/A23187刺激的人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞KU812分泌炎癥介質(zhì)的作用，并觀察其體內(nèi)對(duì)ST和抗ST多抗血清誘導(dǎo)的小鼠Ⅰ型超敏反應(yīng)足腫脹的影響，以探討SHLI對(duì)Ⅰ型超敏反應(yīng)性炎癥的作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、細(xì)胞、藥品、試劑和主要儀器

C57/BL6J小鼠，18～20 g，購(gòu)自揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證編號(hào)：SYXK（蘇）2017-0044。RBL-2H3細(xì)胞和KU812細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。SHLI（黑龍江多多藥業(yè)有限公司，13093013），酮替芬（上海梯希愛化成工業(yè)發(fā)展有限公司），MEM和IMDM培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司），胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS，中國(guó)Excell Bio公司），4-甲基傘型酮-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷、PMA和 A23187（美國(guó)Sigma公司），人TNF-α和IL-6 ELISA試劑盒（美國(guó)Biolegend公司），PGE2ELISA試劑盒（瑞士Enzo Life Science公司）。

熒光化學(xué)發(fā)光分析儀（美國(guó)Thermo Electron公司），Napco 5410型二氧化碳孵箱（美國(guó)NAPCO），XDS-1B倒置顯微鏡（重慶光電儀器公司），BCN-1360型超凈工作臺(tái)（北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司），Multiskan Ascent酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Electron公司），小鼠足容積測(cè)定儀（自制，精確度0.01 mL）。

1.2 小鼠抗ST多抗血清的制備

參照文獻(xiàn)［7］，提取刀額新對(duì)蝦ST，每只小鼠ip給予20 μg含鋁佐劑的ST，每周1次，連續(xù)6周。于6周末摘眼球取血，分離小鼠血清。

1.3 SHLI細(xì)胞毒性的測(cè)定

參照前期研究中SHLI的體外實(shí)驗(yàn)濃度［2］，采用MTS法［8］檢測(cè)0.5%～2%SHLI對(duì)RBL-2H3細(xì)胞和KU812細(xì)胞24 h細(xì)胞毒性。2種細(xì)胞分別按每孔5×104和2.5×104細(xì)胞接種于96孔板，分別加入終濃度為 0.5%～2%的 SHLI，孵育 21 h。加入 20 μL MTS/PMS混合液后繼續(xù)孵育3 h。用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)492 nm處測(cè)定吸光度值（A492nm），計(jì)算細(xì)胞存活率，以選擇SHLI用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的安全濃度。細(xì)胞存活率（%）=藥物組A492nm/細(xì)胞對(duì)照組A492nm×100%。

1.4 抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞 β-氨基己糖苷酶（ β-hexosaminidase， β-HEX）釋放的測(cè)定

參照文獻(xiàn)［9］常規(guī)培養(yǎng)RBL-2H3細(xì)胞，待至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，胰酶消化后按每孔1×105細(xì)胞接種于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板。貼壁后，除正常對(duì)照孔外，其余孔則分別加入抗ST多抗血清（終濃度2%），孵育過夜。次日棄上清，用Hank液洗細(xì)胞，加入陽性藥物酮替芬48 μmol·L-1（終濃度）或SHLI 0.5%～2%（終濃度），與細(xì)胞共孵育30 min。加入ST 20 μg·L-1（終濃度），37℃孵育1.5 h。取上清20 μL，加入反應(yīng)底物4-甲基傘型酮-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷溶液（1 mmol·L-1）50 μL，25℃孵育 2 h，加甘氨酸終止液，在熒光化學(xué)發(fā)光分析儀λEX355 nm和λEM460 nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度，以反映β-HEX相對(duì)釋放量。

1.5 PMA/A23187誘導(dǎo)的KU812細(xì)胞分泌TNF- α，IL-6和PGE2水平的測(cè)定［10］

KU812細(xì)胞以IMDM完全培養(yǎng)基（含10%FBS，青霉素100 kU·L-1，鏈霉素100 mg·L-1和L-谷氨酰胺 2 mmol·L-1）常規(guī)培養(yǎng)，待至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，按每孔1×106細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。先用不同濃度的SHLI（終濃度0.5%，1.0%或2.0%）分別預(yù)處理細(xì)胞30 min，然后加入終濃度1 μmol·L-1的A23187和40 nmol·L-1的PMA；正常對(duì)照孔以完全培養(yǎng)基代替SHLI和PMA/A23187；模型孔只加PMA/A23187，不加SHLI。于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育6 h取上清，采用ELISA法測(cè)定TNF-α和IL-6含量，24 h后測(cè)上清PGE2含量。

1.6 抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的小鼠Ⅰ型超敏反應(yīng)足腫脹時(shí)效關(guān)系測(cè)定

參照文獻(xiàn)［11］，采用毛細(xì)管放大測(cè)量法制備足容積測(cè)定儀，精確度0.01 mL。C57/BL6J小鼠10只，將抗ST多抗血清以生理鹽水1∶10稀釋，于小鼠右側(cè)足跖皮下注射血清30 μL進(jìn)行致敏。24 h后，于激發(fā)前測(cè)定小鼠右側(cè)足跖容積（V），然后經(jīng)小鼠尾靜脈注射含ST 50 μg的生理鹽水，再分別于1，12，24和72 h測(cè)定足容積，觀察小鼠足容積隨時(shí)間的變化。以對(duì)側(cè)足為對(duì)照拍照。

1.7 動(dòng)物分組、給藥和Ⅰ型超敏反應(yīng)足腫脹模型的制備

C57/BL6J小鼠40只，隨機(jī)分為模型組、陽性藥物組（酮替芬 20 mg·kg-1）和 SHLI組（2.5和5.0 mL·kg-1），每組10只。小鼠給藥、模型誘導(dǎo)和測(cè)定時(shí)間點(diǎn)如圖1所示。第1天（D1）～D3，SHLI組小鼠ip給予SHLI，酮替芬組ip給予酮替芬，模型組則ip等體積生理鹽水，于抗原攻擊前連續(xù)給藥3 d。D2：在給藥1 h后，右側(cè)足跖皮下注射稀釋的抗ST多抗血清。D3：各組小鼠給藥處理同D1，并測(cè)定小鼠右側(cè)足跖容積V。給藥1 h后，每只小鼠尾靜脈注射含ST的生理鹽水，再分別于1和24 h后測(cè)右側(cè)足容積（V1h和V24h），并計(jì)算與V比較后的足容積差。

Fig.1 Schedule of treatment with Shuanghuanglian injection（SHLI）and passive cutaneous anaphylaxis in mice induced by shrimp tropomyosin（ST）.D1：the 1stday.

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用±s表示，多組之間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用Studentt檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SHLI對(duì)RBL-2H3和KU812細(xì)胞存活率的影響

如圖2所示，0.5%～2.0%SHLI組細(xì)胞存活率與RBL-2H3細(xì)胞和KU812細(xì)胞對(duì)照組比較無明顯差異，表明SHLI無明顯細(xì)胞毒性。

Fig.2 Effect of SHLI on cell viability of RBL-2H3 and KU812 cells.The cells were incubated with SHLI for 24 h and the cell viability was evaluated by MTS assay.Cell viability（%）=A492 nmof SHLI group/A492 nmof cell control group×100%.，n=3.

2.2 SHLI對(duì)抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞 β-HEX釋放的影響

圖3所示，與細(xì)胞對(duì)照組比較，ST攻擊抗ST多抗血清誘導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞發(fā)生脫顆粒，胞外β-HEX含量增加（P＜0.01）；與模型組比較，0.5%，1.0%和2.0%SHLI均明顯抑制ST攻擊致敏的RBL-2H3細(xì)胞β-HEX的釋放，熒光強(qiáng)度分別下降16%，31%和51%（P＜0.01）。

Fig.3 Effect of SHLI on β-hexosaminidase（ β-HEX）release in RBL-2H3 cells induced by anti-ST-serum and ST.After being sensitized overnight with 2%anti-ST-serum，RBL-2H3 cells were pretreated with SHLI（0.5%，1.0%or 2.0%）for 30 min and then stimulated with ST（20 μg·L-1）.The β-HEX release was determined at 2 h.±s，n=3.＊＊P＜0.01，compared with cell control group；##P＜0.01，compared with model group.

Fig.4 Effect of SHLI on production of tumor necrosis factor- α（TNF- α）（A），interleukin-6（IL-6）（B）and prostaglandin E2（PGE2）（C） in phorbol 12-myristate 13-acetate（PMA）/A23187-induced KU812 cells.KU812 cells were pretreated with SHLI for 30 min and then stimulated with A23187（1 μmol·L-1）plus PMA（40 nmol·L-1）for 6 h（TNF-α and IL-6）or 24 h（PGE2）.Cytokines in the cell supernatant were assayed by ELISA.±s，n=3.＊＊P＜0.01，compared with cell control group；##P＜0.01，compared with model group.

2.3 SHLI對(duì)PMA/A23187誘導(dǎo)的KU812細(xì)胞分泌TNF- α，IL-6和PGE2的影響

如圖4所示，在PMA/A23187刺激的KU812模型中，細(xì)胞上清中TNF-α，IL-6和PGE2含量明顯升高（P＜0.01），而0.5%，1.0%和2.0%SHLI可抑制上述3種細(xì)胞因子的分泌，其中TNF-α分別降低35%，55%和69%（P＜0.01），IL-6分別降低29%，51%和74%（P＜0.01），PGE2分別降低31%，40%和54%（P＜0.01）。

2.4 抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的小鼠Ⅰ型超敏反應(yīng)足腫脹時(shí)效關(guān)系

如圖5所示，ST攻擊抗ST多抗血清致敏的小鼠足跖后1 h足容積和容積差顯著增加，12 h回落，24 h再繼續(xù)升高，呈現(xiàn)速發(fā)相1 h和遲發(fā)相24 h兩高峰。因此，本研究在后續(xù)藥物實(shí)驗(yàn)中，選擇1 h作為速發(fā)相時(shí)間點(diǎn)，24 h作為遲發(fā)相時(shí)間點(diǎn)。

Fig.5 Paw swelling of mice induced by anti-ST-serum and ST.The 10%anti-ST-serum was subcutaneously injected into the mouse right paw and 50 μg ST was iv given to the mice 24 h later.The paw volume（A）and volume change（B）were measured at each time after ST challenge.x ± s，n=10. ＊＊P＜0.01，compared with corresponding group at 0 h.

2.5 SHLI對(duì)抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的小鼠Ⅰ型超敏反應(yīng)足腫脹的影響

如圖6A和B所示，尾靜脈注射ST激發(fā)1 h和24 h后，與左足比較，模型組右足可觀察到明顯的足部腫脹，SHLI給藥組足腫脹呈現(xiàn)不同程度的減輕。測(cè)定足容積發(fā)現(xiàn)（圖6C和D），SHLI組小鼠足容積和足容積差均顯著減小，速發(fā)相（抗原攻擊1 h）時(shí)2.5和5.0 mL·kg-1SHLI組足容積差分別降低69%和83%（P＜0.01），遲發(fā)相（抗原攻擊24 h）時(shí)則分別降低70%和100%（P＜0.05，P＜0.01），表明SHLI對(duì)抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的小鼠Ⅰ型超敏反應(yīng)速發(fā)相和遲發(fā)相足腫脹均具有明顯的抑制作用。

Fig.6 Effect of SHLI on paw swelling of mice induced by anti-ST-serum and ST 1 h and 24 h after ST chal?lenge.See Fig.1 and Fig.5 for the mouse treatment.SHLI and ketotifen was ip given for 3 d，respectively.A：paw swelling 1 h after ST challenge；B：paw sewelling 24 h after ST challenge；C：paw volume；D：paw volume change.±s，n=10.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01 ，compared with model group at the same time.

3 討論

臨床常見的Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病如哮喘和食物過敏均涉及肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。這些細(xì)胞在被抗原觸發(fā)產(chǎn)生由IgE介導(dǎo)的即時(shí)效應(yīng)外，持續(xù)活化時(shí)分泌白三烯、TNF-α、PG和IL-6等炎癥介質(zhì)，具有促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞遷移浸潤(rùn)、上調(diào)內(nèi)皮和上皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)、增加氣道反應(yīng)性及促進(jìn)單核細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶9釋放和成纖維細(xì)胞增生而參與組織重塑等作用［12］，對(duì)Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病的發(fā)生和發(fā)展發(fā)揮重要作用。Ⅰ型超敏反應(yīng)的速發(fā)相和遲發(fā)相，均因IgE介導(dǎo)肥大細(xì)胞活化所致。速發(fā)相歸咎于肥大細(xì)胞脫顆粒，而遲發(fā)相需要啟動(dòng)相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄和翻譯。從理論上講，采用IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞模型既可測(cè)定早期的β-HEX，也可測(cè)定后期遲發(fā)相反應(yīng)所分泌的TNF-α，IL-6及PGE2等因子。但實(shí)際上，抗原刺激IgE致敏的RBL-2H3細(xì)胞誘導(dǎo)的遲發(fā)相反應(yīng)并不明顯。以鈣離子載體A23187和蛋白激酶C活化劑PMA協(xié)同活化KU812細(xì)胞，模擬的是遲發(fā)相的炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，SHLI除可以降低IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒外，還抑制PMA/A23187誘導(dǎo)的KU812細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)PGE2，TNF-α和IL-6，提示SHLI不僅抑制Ⅰ型超敏反應(yīng)速發(fā)相反應(yīng)，對(duì)遲發(fā)相炎癥可能也有對(duì)抗作用。為此，本研究采用體內(nèi)模型對(duì)此作用予以確認(rèn)。

目前，抗Ⅰ型超敏反應(yīng)藥物評(píng)價(jià)通常采用的致敏動(dòng)物血清誘導(dǎo)的被動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)（passive cuta?neous anaphylaxis，PCA）僅適用于速發(fā)相反應(yīng)的測(cè)定。該法多采用抗卵清蛋白（ovalbumin，OVA）動(dòng)物血清誘導(dǎo)PCA，將多抗血清皮內(nèi)注射于同種或異種動(dòng)物的局部皮膚進(jìn)行致敏，以伊文思藍(lán)為指示劑測(cè)定OVA激發(fā)1 h后局部皮膚藍(lán)斑直徑或萃取染料測(cè)定其吸光度［13］，然而該法并不能測(cè)定遲發(fā)相炎癥反應(yīng)。另有研究者在皮膚超敏反應(yīng)模型中對(duì)遲發(fā)相進(jìn)行了測(cè)定，將2，4-二硝基苯酚IgE單克隆抗體經(jīng)尾靜脈注射于小鼠，24 h后在兩耳涂以2，4-二硝基氟苯，采用測(cè)厚儀測(cè)定小鼠雙耳的腫脹度，以1和24 h耳厚度分別作為衡量速發(fā)相和遲發(fā)相反應(yīng)程度的指標(biāo)［14］。但是由于小鼠耳部皮膚薄，對(duì)儀器的精密度要求高，而常規(guī)的測(cè)厚儀主觀性較強(qiáng)，誤差大（測(cè)定厚度的差值以μm為單位），并非一種適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室開展的準(zhǔn)確性和重復(fù)性好的測(cè)定方法。因此，本研究進(jìn)行了方法學(xué)改進(jìn)并建立了更適用于評(píng)價(jià)Ⅰ型超敏反應(yīng)遲發(fā)相炎癥的體內(nèi)模型。

由于不同品系小鼠對(duì)抗原的敏感性有差異，常用的有C57/BL6J小鼠、BALB/c小鼠、129Sv小鼠和A/J小鼠等，其中C57/BL6J小鼠對(duì)牛奶、蝦和花生等抗原的敏感性較好［15］。因此，本研究選擇了該品系小鼠以誘導(dǎo)模型。根據(jù)PCA原理，采用致敏動(dòng)物血清皮下注射于小鼠足跖部，24 h經(jīng)尾靜脈給予ST激發(fā)誘導(dǎo)足腫脹；然后采用經(jīng)典的急性炎癥模型（角叉菜膠致小鼠足腫脹）中毛細(xì)管放大測(cè)量法［11］測(cè)定小鼠足容積，以足容積變化的時(shí)效曲線來反映Ⅰ型超敏反應(yīng)速發(fā)相和遲發(fā)相的炎癥。由于前期研究發(fā)現(xiàn)，ST 致敏性［9］和代表性［16］高于傳統(tǒng)抗原OVA，所以本研究用ST作為致敏原免疫小鼠［7］，獲得了富含IgE的小鼠血清，而且體內(nèi)實(shí)驗(yàn)仍采用ST為抗原進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，ST攻擊ST多抗血清致敏的小鼠足跖后1 h足容積增加，12 h時(shí)回落，24 h再繼續(xù)升高，呈現(xiàn)速發(fā)相1 h和遲發(fā)相24 h兩高峰，與劉繼勇等［14］測(cè)定皮膚超敏反應(yīng)耳厚度的變化趨勢(shì)較一致。

本研究利用以上體內(nèi)模型觀察了SHLI對(duì)Ⅰ型超敏反應(yīng)兩相反應(yīng)的作用。結(jié)果顯示，在速發(fā)相（ST激發(fā)后1 h），SHLI可抑制抗ST多抗血清和ST誘導(dǎo)的小鼠足腫脹。陽性藥物酮替芬具有拮抗組胺H1受體和穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜的作用，能夠明顯抑制Ⅰ型超敏反應(yīng)速發(fā)相，本結(jié)果與此符合。對(duì)于遲發(fā)相（ST激發(fā)后24 h），SHLI亦可抑制小鼠Ⅰ型超敏反應(yīng)遲發(fā)相足腫脹。據(jù)報(bào)道，酮替芬通過抑制趨化而減少超敏反應(yīng)炎癥部位嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)及其炎癥介質(zhì)釋放［17］，還可以降低OVA誘導(dǎo)的過敏性鼻炎小鼠血清中細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β含量［18］，表明其還具有抑制超敏反應(yīng)性炎癥的作用。本研究觀察到酮替芬對(duì)ST多抗血清誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)相足腫脹的抑制作用與此作用一致。綜上所述，SHLI具有抗Ⅰ型超敏反應(yīng)全程的作用，不僅可抑制速發(fā)相脫顆粒，還可通過減少炎癥介質(zhì)的分泌來抑制遲發(fā)相炎癥反應(yīng)。

值得關(guān)注的是，據(jù)臨床報(bào)道，SHLI有致速發(fā)型過敏反應(yīng)的不良反應(yīng)［19-20］，似乎與本研究SHLI抗過敏作用相矛盾。事實(shí)上，本課題組正是在研究SHLI致過敏的不良反應(yīng)過程中發(fā)現(xiàn)其對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒具有良好的抑制作用［6，21］。藥物被機(jī)體作為異物識(shí)別而發(fā)生過敏反應(yīng)與其可治療過敏性疾病二者之間并不矛盾。正如作為抗過敏的一線藥物酮替芬，其使用注意事項(xiàng)中也明確提出“對(duì)本品過敏癥禁用”。需要說明的是，SHLI通過線粒體鈣單向轉(zhuǎn)運(yùn)體活化發(fā)揮其強(qiáng)大的肥大細(xì)胞穩(wěn)定作用［6］給其致過敏的研究帶來了困難。在研究設(shè)計(jì)SHLI致敏性實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要排除前者的干擾，這是研究過程中必須注意的。