王蘋蘋，武笑穎，劉忠強，康兆廣

(山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，山東濟南250102)

抗氧化劑作為一種重要的飼料添加劑，也受到人們廣泛的關(guān)注。飼料中營養(yǎng)物質(zhì)如油脂、脂溶性維生素、胡蘿卜及類胡蘿卜素等物質(zhì)在運輸存儲過程中易發(fā)生氧化，可導致飼料酸敗變質(zhì)，長期攝入這些酸敗飼料會造成維生素缺乏癥，肉產(chǎn)品貯藏期間發(fā)生肌肉滲出性損失，還會影響動物生產(chǎn)性能，如蛋雞產(chǎn)蛋率急劇下降等。抗氧化劑是一類捕獲并清除自由基的物質(zhì)，可以防止或延緩食品及飼料的氧化。飼料中添加抗氧化劑可以提高產(chǎn)品穩(wěn)定性，延長保質(zhì)期，降低運輸成本。市場上抗氧化劑種類繁多，給使用及研究人員帶來了較大的困擾，本文系統(tǒng)分析了飼料中常用抗氧化劑的種類及作用，對飼料抗氧化劑研究提供相關(guān)支持。

飼料中被廣泛使用的抗氧化劑多為人工合成的抗氧化劑，此類抗氧化劑雖然在飼料保質(zhì)方面有很好的優(yōu)勢，但是飼料中抗氧化劑的亂用、濫用的現(xiàn)象成為人們關(guān)注的熱點問題，這些過量投入的抗氧化劑，隨著食物鏈對人產(chǎn)生一定的危害?，F(xiàn)有研究表明抗氧化劑叔丁基對甲苯酚(BHT)能抑制人體呼吸酶活性，使肝臟微粒體酶活性增加，其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物BHT- 醌甲基化產(chǎn)物疑是BHT 引起組織毒性的主要物質(zhì)；目前，常見的檢測飼料中抗氧化劑的方法有：高效液相色譜法、氣相色譜法、高效毛細管電泳法等，本文總結(jié)了飼料中抗氧化劑常用的檢測手段，并對飼料中抗氧化劑檢測方法存在的問題提出了自己的見解。

1 抗氧化劑分類

1.1 天然抗氧化劑，飼料中常見天然抗氧化劑主要有胡蘿卜素、維生素C、維生素E、茶多酚。維生素E 是較早被發(fā)現(xiàn)的，目前唯一工業(yè)化生產(chǎn)的飼料天然抗氧化劑，其對氧特別敏感，極易被氧化，因此可保護其他易被氧化的物質(zhì)不被破壞，抗氧化效果極強[8]。這些天然抗氧化劑具有較好的抗氧化能力，飼用安全性比化學合成抗氧化劑要好，來源廣泛，綠色環(huán)保。天然抗氧化劑在食品飼料等各領(lǐng)域的使用具有廣闊的發(fā)展空間，順應時代的要求。

1.2 化學合成抗氧化劑，目前市面上常用的化學合成抗氧化劑有二叔丁基羥基甲苯(BHT)、叔丁基羥基茴香醚(BHA)、叔丁基對苯二酚(TBHQ)、乙氧基喹啉(EQ)、沒食子酸丙酯(PG)。不同抗氧化劑有不同的特性，不同的抗氧化效果。

2 抗氧化劑檢測方法

2.1 飼料中抗氧化劑前處理方法

2.1.1 固相萃取法 固相萃取法提取出的溶液較干凈，干擾較小，降低了儀器的污染程度，但是步驟繁瑣，費時。張曼、何佳等利用乙腈提取飼料中抗氧化劑，提取液通過C18 柱凈化后氮吹濃縮上機，得到較好的結(jié)果，回收率在84～106%范圍內(nèi)[11]。

2.1.2 凝膠色譜法 凝膠色譜法操作簡單，選擇性較好，特別適用于油脂含量較高飼料的檢測，但是凝膠色譜儀器較貴，且樣品處理耗時較長，不太適合大批量樣品的檢測。楊曉鳳利用乙腈提取飼料中抗氧化劑，提取液經(jīng)凝膠色譜凈化，去除油脂及大部分色素，BHA、BHT、EQ 三者回收率均大于95%。

2.1.3 有機溶劑直接提取法 有機溶劑直接提取的前處理方法簡單快捷，適用于大批量樣品檢測，但提取出的成分復雜，干擾較多。陳集元用無水乙醇直接提取水產(chǎn)配合飼料中的合成抗氧化劑，回收率為86.5～97.5%，得到較好的檢測結(jié)果[13]。董茂鋒、白冰等利用不同提取液(異丙醇、乙醇、正己烷、乙腈)直接提取飼料中BHT 和EQ 兩種抗氧化劑，發(fā)現(xiàn)異丙醇提取效果較好。

2.2 飼料中抗氧化劑檢測方法 抗氧化劑的檢測方法有很多如分光光度法、電化學分析法、薄層色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜法- 質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法、氣相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法、高效毛細管電泳法等。但是目前用于飼料中抗氧化劑檢測的方法多為高效液相色譜法、高效液相色譜法- 質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法、高效毛細管電泳法。

2.2.1 高效毛細管電泳法 高效毛細管電泳法具有效率高，消耗少、成本低、操作簡單等優(yōu)點，但是對PH 值要求較高。Delgado-Zamarreno 和Boyce 在堿性條件下實現(xiàn)了食品中抗氧化劑的分離檢測。堿性環(huán)境會降低毛細管的使用壽命，龐軍、劉文紅等從緩沖液的種類，緩沖液的濃度以及pH 等多方面研究，找到了合適的分離條件，以25 mmol/L 硼砂- 硼酸（Na2B4O7-H3BO3）和10 mmol/L 十二烷基硫酸鈉（SDS）的混合液（pH=7.00）作為緩沖液，采用高效毛細管膠束電動色譜法測定了飼料中抗氧化劑，得到了較好的線性關(guān)系，平均回收率為81.8～102.0%。

2.2.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法在檢測領(lǐng)域被廣泛使用，具有靈敏度高、分析速度快、重復性好、精密度高等優(yōu)點。謝海燕、姜德銘等利用甲醇超聲一次提取樣品中的BHA、BHT,并使用反相高效液相色譜- 二極管陣列測定含量。校準曲線在1.0～50μg/mL 范圍內(nèi),不同類型的樣品的相對標準偏差＜4.70%,回收率在90%～103%之間,樣品最低檢出限在0.002～0.005 g/kg 之間，實現(xiàn)了及飼料中BHA、BHT 的快速檢測；楊春林、李佳峻等建立了同時測定飼料中4 種酚類抗氧化劑（沒食子酸丙酯、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、特丁基對苯二酚）和3 種尼泊金酯類防腐劑（尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯）的高效液相色譜方法。樣品以甲醇- 乙腈溶液（30∶70，V/V）超聲提取后經(jīng)C18 柱（4.6 mm×250 mm，5μm）分離，用甲醇/ 乙酸銨溶（pH=3.5）作流動相梯度洗脫，分別在波長256 nm 和280 nm 進行檢測，7 種物質(zhì)的線性范圍為0.1～100.0μg/mL，檢出限為0.027 ～0.102 mg/L，平均回收率為79.62%～112.29%，取得較好的結(jié)果。

2.2.3 液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法 液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜的優(yōu)勢互補，具有分析廣、分析能力強、定性分析可靠、靈敏度高、分析時間快、自動化程度高等優(yōu)點。黃彪、劉文靜等了應用超高效液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時檢測飼料中8 種抗氧化劑，優(yōu)化飼料樣品的前處理方法，梯度洗脫使用水和乙腈流動相運行，電噴霧離子源電離、正負離子多反應監(jiān)測模式質(zhì)譜對檢測對象進行分析。方法檢出限為0.005～0.1 mg/kg，定量限0.01～0.2 mg/kg;飼料中的8 種抗氧化劑顯現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，在低、中、高三個不同濃度梯度的添加平均加標回收率為76.2%～102.8%，方法能適合檢測抗氧劑的需要。

2.2.4 氣相色譜法 氣相色譜法是一個分析速度快和分離效率高的分離分析方法，操作簡單，被廣泛應用于飼料中抗氧化劑的檢測。陳集元采用乙醇提取，經(jīng)毛細管相色譜柱（ZB-5，30m×0.32mm×0.25um）分離，建立了同時檢測水產(chǎn)配合飼料中五種合成抗氧化劑的氣相色譜方法，并采用氣質(zhì)確證。方法研究結(jié)果表明，目標待測抗氧在2-40 ug/mL 濃度范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，方法定量限均低于5mg/kg；回收率為86.5～97.5%，相對標準偏差為2.26～4.85%，該方法可行。吳玉鑾，侯向昶等采用乙醚直接提取法建立了氣相色譜法同時測定飼料添加劑中三種抗氧化劑（BHT、BHA、TBHQ）的方法。校正曲線的線性范圍分別為0.2～50.0mg/mL、0.2～40.0mg/mL、0.7～70.0mg/mL，回收率在92.1～98.2%，得到較好的結(jié)果。