周岐鳴 徐姣雅 季 光 宋海燕

上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院脾胃病研究所 (上海， 200032)

濱蒿內(nèi)酯提取于菊科陳蒿，也來源于青蒿及石斛等，具有多種生物活性，在肝臟中主要作用為保肝利膽。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是我國目前第一大肝臟疾病，以肝細胞脂肪變性、肝臟脂質(zhì)積累為主要病理特征，發(fā)病機制尚不明確。近年來關于濱蒿內(nèi)酯在NAFLD自然發(fā)展過程中的作用研究頗多，研究發(fā)現(xiàn)濱蒿內(nèi)酯具有抑制肝細胞、脂肪組織炎癥、抵抗類癥因子介導的細胞毒性，及改善胰島素抵抗、減輕氧化應激等作用。

1 濱蒿內(nèi)酯的來源

濱蒿內(nèi)酯是6，7-二甲氧基香豆素的天然單體，被認為是茵陳的主要利膽成分，主要來源于傳統(tǒng)中藥茵陳及青蒿，以秋季花蕾期時采收的茵陳中含量最高[1]。文獻[2]報道濱蒿內(nèi)酯也可提取于蘭科植物中，球花石斛、密花石斛的假鱗莖及花和葉中均含濱蒿內(nèi)酯，其中花葉中含量較高。也有文獻報道五加科無梗五加果、刺五加根莖及蕓香科佛手的果實也含有濱蒿內(nèi)酯，祁白芷根脂溶性提取物、花椒屬野花椒莖木和異葉花椒乙醇提取物中亦有濱蒿內(nèi)酯。目前也可通過現(xiàn)代技術化學合成濱蒿內(nèi)酯，即以苯胺為原料,通過重鉻酸鈉氧化合成對苯醌，再與乙酸酐反應生成1,2,4-苯三酚三乙酯，進而與蘋果酸發(fā)生環(huán)化反應得到秦皮乙素(6,7-二羥基香豆素)，最后經(jīng)硫酸二甲酯甲基化合成濱蒿內(nèi)酯(6,7-二甲氧基香豆素)[3]。

2 濱蒿內(nèi)酯的保肝利膽作用

濱蒿內(nèi)酯是茵陳的主要活性成分之一，而茵陳具有保肝退黃的作用，被歷代中醫(yī)視為治療黃疸之要藥?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，茵陳蒿湯降黃的機制主要是通過核受體CAR來誘導促進轉(zhuǎn)運膽汁酸的轉(zhuǎn)運體MRP2、UGT、GST等對膽汁酸轉(zhuǎn)運，而濱蒿內(nèi)酯可以活化CAR，發(fā)揮保肝利肝作用[4]。此外，肝細胞基底面上鈉離子依賴型的膽汁成分攝入系統(tǒng)鈉離子-?；悄懰釁f(xié)同轉(zhuǎn)運多肽對血液中膽汁成分的攝取起到重要的作用，而茵陳蒿湯可以上調(diào)肝內(nèi)膽汁淤積濕熱證大鼠肝組織鈉離子-?；悄懰釁f(xié)同轉(zhuǎn)運多肽的表達，加速膽鹽轉(zhuǎn)運，促進肝內(nèi)膽汁排泄[5]。茵梔黃注射液可改善由腫瘤壞死因子-α對大鼠原代肝細胞膜轉(zhuǎn)運體Mrp2活性的抑制，提高了Mrp2表達，有力的促進膽汁酸代謝[6]。濱蒿內(nèi)酯是茵陳湯及茵梔黃注射液中茵陳有效成分之一，可能參與了上述相關過程，單獨使用濱蒿內(nèi)酯治療黃疸時，濱蒿內(nèi)酯可加強鵝脫氧膽酸對人類BSEP啟動子的刺激作用，加速膽紅素的清除，給予PKC抑制劑GF109203X，可抵消這種增強作用[7]。有研究者利用代謝組學方法進行中醫(yī)陽黃證的方證研究，發(fā)現(xiàn)濱蒿內(nèi)酯可能參與戊糖和葡萄糖醛酸相互轉(zhuǎn)化，?；撬岷蛠喤；撬岽x，及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成途徑,上述過程中的代謝產(chǎn)物與酪氨酸血癥、高膽紅素血癥及肝臟的解毒能力相關，濱蒿內(nèi)酯可改善陽黃證患者這些代謝物的水平[8]。

3 NAFLD的發(fā)病情況及機制

從1986年Schaffner首次提出NAFLD的概念至今僅32年,這種慢性疾病已經(jīng)取代慢性病毒性肝病成為我國第一大肝臟疾病。NAFLD在全世界的患病率為25.24%，其中中東及南美地區(qū)患病率最高(30.45%～31.79%)，非洲最低(13.48%)，亞洲27.37%[9]；我國的流行病學調(diào)查顯示NAFLD患病率為26%～45%。估計NAFLD將成為未來10年內(nèi)肝臟移植的主要原因。然而，目前尚缺乏美國食品及藥物監(jiān)督管理局審核通過的治療NAFLD的藥物[10]。NAFLD是排除酒精攝入、病毒感染或其他特定因素下，以肝細胞脂肪變性、肝臟脂質(zhì)積累(主要為三酰甘油)為主要病理特征的進行性肝病，可進展為單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化甚至肝癌，因其是以胰島素抵抗為關鍵，被視為代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)[11]。NAFLD發(fā)病機制尚不明確，目前學界大多認可多次打擊學說，第1次打擊是以胰島素抵抗為中心，引起脂質(zhì)在肝細胞過度沉積，致肝細胞脂肪變性，脂毒性及脂肪變性下線粒體異常，加劇了肝細胞對炎癥損傷的敏感；第2次打擊是以第1次打擊為基礎，大量活性氧產(chǎn)生并參與脂質(zhì)過氧化、共同刺激肝臟炎癥，在此過程始終伴隨胰島素抵抗，并進入炎癥與壞死的惡性循環(huán)；第3次打擊是細胞因子失控進一步促進肝細胞外基質(zhì)成分改變加速向肝纖維化轉(zhuǎn)化[12]。

4 濱蒿內(nèi)酯對NAFLD的作用及機制

濱蒿內(nèi)酯具有香豆素類化合物的抗氧化活性，能夠調(diào)節(jié)肝臟的糖脂代謝，能減輕非酒精性脂肪性肝炎中肝細胞的脂質(zhì)沉積、對抗氧化應激[13]。有課題組通過蛋氨酸-膽堿缺乏飲食構建小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型后，給予包含濱蒿內(nèi)酯為其主要有效成分之一的復方藥物降脂顆粒來干預治療，并觀察濱蒿內(nèi)酯藥物單體對棕櫚酸誘導的人肝細胞脂毒性損傷模型的作用，發(fā)現(xiàn)藥物可下調(diào)NLRP3炎癥小體及腫瘤壞死因子-α表達、改善線粒體膜電位、改善氧化應激并通過JNK/c-Jun信號通路調(diào)節(jié)細胞凋亡[14]。

胰島素抵抗作為引起代謝性肝病的重要原因之一，在NAFLD早期病理過程中探究濱蒿內(nèi)酯對胰島素抵抗機制作用是必要的。研究發(fā)現(xiàn)在胰島素依賴性糖尿病中，胰島素自身免疫細胞所產(chǎn)生的細胞因子是破壞胰島β細胞的主要因素之一。濱蒿內(nèi)酯可保護大鼠胰島中胰島素瘤細胞系RINm5F，抵抗白細胞介素-1β(IL-1β)和干擾素-γ(IFN-γ)介導的細胞毒性，并保留葡萄糖刺激的胰島素分泌功能。濱蒿內(nèi)酯還可顯著減少IL-1β和IFN-γ誘導的一氧化氮產(chǎn)生，改善因一氧化氮影響胰島素組分轉(zhuǎn)換導致的胰島素合成減少[15]。可見濱蒿內(nèi)酯能通過保護胰腺來改善因胰島素分泌減少及胰島素抵抗所引起肝細胞貯脂的增加。

促炎癥巨噬細胞入侵內(nèi)臟脂肪組織被認為是驅(qū)動脂肪組織炎癥和胰島素抵抗的一個關鍵事件，過氧化物酶體增生物激活受體γ(PPAR-γ)作為脂肪細胞分化的主要調(diào)節(jié)子，被確定為協(xié)調(diào)內(nèi)臟脂肪組織調(diào)節(jié)T細胞的累積類型和功能的關鍵分子，通過內(nèi)臟脂肪組織來調(diào)節(jié)性T細胞可以改善脂肪組織炎癥及胰島素抵抗[16]。研究發(fā)現(xiàn)濱蒿內(nèi)酯可抑制3T3-L1前脂肪細胞分化，減少三酯甘油積聚，抑制因游離脂肪酸增多所致的炎癥脂肪細胞分泌、釋放腫瘤壞死因子-α，從而抑制前脂肪細胞和內(nèi)皮細胞分泌IL-1，抑制巨噬細胞聚集到脂肪組織周圍，減輕炎性反應及胰島素抵抗。而濱蒿內(nèi)酯的抑制作用與其負調(diào)節(jié)PPAR-γ的轉(zhuǎn)錄活性，強烈抑制PPAR-γ與PPRE區(qū)的結合，減少與脂肪形成后期相關的SREBP1c和FAS的mRNA表達，并降低脂肪細胞特異性基因的aP2和CD36/FAT在成熟脂肪細胞中表達相關[17]。予濱蒿內(nèi)酯單獨干預巨噬細胞，發(fā)現(xiàn)其對巨噬細胞無明顯細胞毒性，并減少因IFN-γ/脂多糖刺激下巨噬細胞對一氧化氮和前列腺素E2(PGE2)的釋放。進一步研究發(fā)現(xiàn)，濱蒿內(nèi)酯可能通過抑制iNOS和環(huán)氧合酶-2表達，降低巨噬細胞中炎癥介質(zhì)如一氧化氮和前列腺素的產(chǎn)生[18]。用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)干預激活U937人單核細胞，發(fā)現(xiàn)濱蒿內(nèi)酯可下調(diào)IL-8和單核細胞趨化蛋白-1表達和抑制核因子κB(NF-κB)活化，減輕PMA細胞對細胞毒性作用，其潛在機制可能是通過抑制IκBα磷酸化的轉(zhuǎn)運來抑制NF-κB有關亞基NF-κB1p50，RelA p65和c-Rel p75的核易位，從而達到抑制NF-κB活化[19]。

非酒精性脂肪性肝炎進展為肝纖維化，也是NAFLD病理發(fā)展過程的一個階段，因肝內(nèi)細胞外基質(zhì)沉積所致，主要與炎癥反應和肝星狀細胞的激活相關[20]。研究發(fā)現(xiàn)濱蒿內(nèi)酯通過使TGF-β/Smad信號通路失活，來抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導的肝星狀細胞增殖，并進一步減弱NADPH氧化酶NOX家族蛋白活性，減少活性氧大量產(chǎn)生，保護肝細胞，抑制肝纖維化[21]。

綜上所述，濱蒿內(nèi)酯具有保肝利膽作用，對NAFLD也發(fā)揮作用，這與其抑制肥胖相關脂肪組織炎癥、抵抗炎癥因子介導的細胞毒性、改善胰島素抵抗、減輕氧化應激等密切相關。而且因濱蒿內(nèi)酯代謝主要與CAR及其下游分子如CYP2C9等相關，與其他肝臟藥物代謝途徑?jīng)_突較少，有望成為新的NAFLD治療藥物[22]。