陳慧娟，唐芳瑞，陳燕，舒青龍，曾樂(lè)

（1.亳州市人民醫(yī)院藥學(xué)部，安徽亳州 236800；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌 330004）

中藥復(fù)方是由兩味或兩味以上藥物組成的方劑，有相對(duì)規(guī)定性的加工方法和使用方法，針對(duì)相對(duì)確定的病證而設(shè)、講究七情和合及君臣佐使的方劑，是中醫(yī)方劑的主體組成部分，體現(xiàn)了中醫(yī)藥理論的精華，是臨床醫(yī)用最主要的手段，也是中醫(yī)藥研究的重點(diǎn)方向［1-2］。中藥復(fù)方多糖是從中藥復(fù)方中提取而得到的一種高分子碳水化合物總稱，由糖苷鍵連接構(gòu)成的超過(guò)10個(gè)單糖分子的大分子長(zhǎng)鏈［3］。多糖及其復(fù)合物在生物體中不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料，更重要的是它存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中，參與生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)。現(xiàn)代研究表明［4-5］，中藥復(fù)方多糖具有廣泛的生物活性，主要有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗輻射、抗疲勞、降血糖、抑菌等藥理作用。中藥復(fù)方成份復(fù)雜，雜質(zhì)多、干擾大，使得多糖分離純化比較困難，加之近年來(lái)中藥復(fù)方多糖的藥理活性研究越來(lái)越熱，對(duì)樣品制備、成分提取技術(shù)要求也越來(lái)越高，本文對(duì)近年來(lái)中藥復(fù)方多糖的提取工藝進(jìn)行綜述，以期為中藥復(fù)方多糖相關(guān)研究與應(yīng)用提供參考。

1 多糖類化合物常用定量分析方法［6-7］

多糖類化合物測(cè)定時(shí)常先將多糖還原為單糖或寡糖，常用的方法是用硫酸或鹽酸酸化水解，主要的測(cè)定方法有以下幾種，其中比色法操作簡(jiǎn)單，成本低，應(yīng)用最廣泛。

1.1 比色法 常用有硫酸-蒽酮、硫酸-苯酚法，其原理是根據(jù)多糖在硫酸的作用下水解成單糖，并脫水生成糖醛衍生物，再與苯酚或蒽酮縮合成有色化合物，在一定濃度范圍內(nèi)和適當(dāng)波長(zhǎng)下，糖濃度與吸收值呈線性關(guān)系，從而測(cè)定其含量。

1.2 滴定法 多糖通過(guò)加酸、加熱水解成單糖或寡糖后，以次甲基蘭做指示劑，用經(jīng)過(guò)標(biāo)定的堿性酒石酸銅滴定，根據(jù)樣液消耗的體積計(jì)算其含量。此外，滴定法還有間接碘量滴定法、氧化還原滴定法。

1.3 色譜法 主要有高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜法（GC），多糖水解后作為供試品，與對(duì)照品溶液注入高效液相儀或氣相色譜儀，在相應(yīng)檢測(cè)器下測(cè)定峰面積，從而計(jì)算出多糖含量。

2 中藥復(fù)方多糖的提取工藝

中藥復(fù)方含有多種不同極性的化合物，提取時(shí)常利用多糖類化合物與其他化合物的極性不同，選用不同的溶劑處理達(dá)到去除雜質(zhì)的目的。多糖類化合物極性較大，可先用石油醚、高濃度乙醇等對(duì)復(fù)方進(jìn)行脫脂，然后用水或稀醇提取糖類成分，再除去蛋白質(zhì)等非糖雜質(zhì)［8］。目前報(bào)道的關(guān)于中藥復(fù)方多糖的提取方法主要有以下幾種。

2.1 水煎煮法 水煎煮法操作簡(jiǎn)單，設(shè)備條件要求低，是傳統(tǒng)的中藥提取方法。多糖因極性較大，易溶于水，常選用水煎煮法提取。蔣潔等［9］通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)考察煎煮時(shí)間、料液比、煎煮次數(shù)對(duì)桂圓益氣補(bǔ)血湯（由龍眼肉、黃芪、當(dāng)歸、山藥、甘草組成）煎煮工藝的影響，得最佳煎煮工藝條件為：加12倍量水煎煮3次，每次36 min，煎煮前浸泡30 min，浸膏得率39.3%，多糖得率6.80%。優(yōu)選的煎煮工藝條件穩(wěn)定，提出了可適用于桂圓益氣補(bǔ)血湯工業(yè)生產(chǎn)的工藝依據(jù)。南帆等［10］對(duì)黃芪桂枝五物湯（由黃芪、桂枝、芍藥、生姜、大棗組成）多糖提取工藝進(jìn)行研究，以提取溫度、pH、料液比3個(gè)因素作為多糖提取的影響因素，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：提取溫度對(duì)黃芪桂枝五物湯總多糖的提取有顯著影響，提取溶液pH值和料液比無(wú)顯著影響，確定最佳提取工藝為：提取溫度90℃，pH值為10的碳酸鈉水溶液按1∶10的料液比提取。Li等［11］對(duì)半夏厚樸湯（由半夏、厚樸、茯苓、干姜、紫蘇葉組成）中的多糖進(jìn)行提取，先用石油醚回流脫脂，80%乙醇回流2次洗脫單糖和寡糖，90℃下水提2次，無(wú)水乙醇沉淀多糖，最后采用Sevage法除蛋白，半夏厚樸湯多糖得率6.25%，該提取方法對(duì)極性較小的脂類、單糖、寡糖及蛋白進(jìn)行了有效去除，提高了多糖的提取率。

2.2 回流提取法 回流法是比較常用的提取方法，此方法簡(jiǎn)單易操作，可不斷更新溶劑，浸提較完全，能提高有效成分的提取率［12］。宋棋芬等［13］采用回流提取法對(duì)復(fù)方桑黃顆粒（由桑葉、葛根、黃精、百合組成）中的總多糖進(jìn)行提取，得最佳提取工藝為：料液比1∶8，浸提溫度90℃，浸提1.5 h，提取3次，總多糖提取率2.85%。該提取工藝穩(wěn)定，方法簡(jiǎn)單，提取率較高。許義紅等［14］采用中心組合設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法對(duì)當(dāng)歸補(bǔ)血湯（由當(dāng)歸、黃芪組成）中的多糖進(jìn)行回流提取，以多糖提取率為響應(yīng)值，選取液固比、提取溫度、提取時(shí)間為考察因素，得最佳提取工藝為：液固比13∶1，93℃下提取2次，每次2.4 h，多糖平均得率為4.16%。另外，該研究還對(duì)同批次藥材采用正交設(shè)計(jì)法進(jìn)行提取工藝的優(yōu)選，多糖得率3.92%，低于中心組合設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)選的提取工藝。

潘瓊等［15］應(yīng)用回流提取和超聲提取對(duì)二精方中枸杞和黃精進(jìn)行了合提和分提。結(jié)果：二精方回流提取多糖含量45.4%；二精方超聲提取多糖含量57.4%；枸杞回流黃精超聲提取二精方多糖含量70.0%；枸杞超聲黃精回流提取二精方多糖含量48.5%，最終確定二精方多糖最佳提取工藝為枸杞回流提取和黃精超聲提取，合并提取多糖。該研究對(duì)二精方中多糖的提取方法進(jìn)行了比較，并提出了兩味藥材采用不同的提取方法提取后再合并多糖，該方法雖提取多糖含量較高，但是中藥復(fù)方的配伍不是各個(gè)組分簡(jiǎn)單的加和，各成分之間相互作用，相互協(xié)調(diào)，在提取的過(guò)程中各藥材之間的相互作用也是影響藥材功效的因素之一，不能僅以多糖含量作為提取工藝的考察指標(biāo)，還需考慮中藥復(fù)方的整體性及藥效。

2.3 超聲提取法 超聲提取的原理主要包括機(jī)械作用、熱學(xué)作用及空化作用，能夠增加物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)的頻率和速度、溶劑的穿透力，從而加速目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑。超聲提取可極大地提高提取效率，節(jié)約溶劑，避免高溫對(duì)提取成分的影響［16］。

徐飛等［17］采用超聲法提取六味地黃丸（由熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組成）總多糖，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定最佳提取工藝：10倍量初始溫度60℃的60%乙醇對(duì)復(fù)方藥材粗粉浸泡6 h后，超聲提取2次，每次30 min，超聲頻率25 kHz，總多糖得率為17.19 mg·g－1，并與傳統(tǒng)回流提取法比較（回流提取法總多糖得率為8.53 mg·g－1），效果明顯優(yōu)于回流提取法。張英等［18］考察了復(fù)方十子代平方（由菟絲子、枸杞子、五味子、車前子、去覆盆子、萊菔子、蘇子、去白芥子、茺蔚子、梔子、女貞子、決明子組成）超聲提取工藝條件，確定最佳提取工藝條件為：溫度70℃，超聲提取60 min，超聲功率40%，提取 3次，料液比 1∶20，總多糖提取率11.44%。該研究者還對(duì)提取的復(fù)方多糖進(jìn)行了分離純化，去蛋白后多糖含量為43.93%，醇沉提高到52.97%，透析后達(dá)到63.19%，通過(guò)純化總多糖的純度逐步提高。周帥飛等［19］采用超聲輔助法提取四君子湯（由紅參、白術(shù)、茯苓、炙甘草組成）多糖研究中，通過(guò)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)3個(gè)因素進(jìn)行考察，結(jié)果：影響多糖提取的主次因素為：提取次數(shù)＞提取溫度＞提取時(shí)間，最佳提取工藝為80℃提取3次，30分鐘／次，復(fù)方多糖的提取率可達(dá)17.1%。該研究還比較了Sevage法和Sevage-酶法純化多糖的效果，并進(jìn)行了單因素考察，得脫蛋白的最佳工藝條件為：胰蛋白酶添加量為1%，37℃水浴，酶解3 h，Sevage試劑處理3次，多糖脫蛋白處理后純度達(dá)到80.00%，多糖的保留率為92.69%。

2.4 微波輔助提取法 微波提取法是利用微波的高頻電磁波穿透提取介質(zhì)，加速被提取成分向溶劑的擴(kuò)散速率，及縮短擴(kuò)散時(shí)間，提高提取速率，該法具有操作簡(jiǎn)單、提取快速、提取率高的優(yōu)點(diǎn)［20］。李桂銀等［21］采用微波輻射萃取補(bǔ)陽(yáng)還五湯（由黃芪、川芎、赤芍、桃仁、地龍、當(dāng)歸、紅花組成）中多糖成分，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)法，探討了不同微波輻射時(shí)間、微波功率及料液比等條件對(duì)多糖得率的影響。結(jié)果：微波輻射20 min，微波功率325 W，料液比為1∶7，補(bǔ)陽(yáng)還五湯多糖得率為7.75%；另外，直接加熱萃取法在萃取時(shí)間240 min，料液比1∶20條件下，多糖得率僅為5.56%，且提取時(shí)間是微波輔助提取法的12倍。微波輔助提取法顯著縮短了提取時(shí)間，節(jié)省了溶劑，提高了多糖收率。

2.5 超微粉碎技術(shù)輔助提取法 超微粉碎技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)應(yīng)用現(xiàn)代物理或化學(xué)方法對(duì)材料進(jìn)行微粉化的新技術(shù)，中藥經(jīng)超微粉碎后，粉末粒徑小且分布均勻，球性度及均質(zhì)度明顯改善，松密度及比表面顯著提高，而且細(xì)胞壁大部分被破壞，有效成分不需要通過(guò)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜就能釋放出來(lái)，從而提高了有效成分的溶出速度及溶出率［22］。劉洪娜等［23］采用超微粉碎技術(shù)把芪苓制劑（由黃芪、茯苓、金銀花組成）加工成普通粉（60～100目）、超微粉（300目），以水提醇沉法提取總多糖，結(jié)果普通粉、超微粉樣品中多糖提取率分別為0.56%、4.5%，且多糖純度分別為 44.71%、75.03%。結(jié)果表明超微粉碎技術(shù)能顯著提高芪苓總多糖的溶出度。

3 結(jié)語(yǔ)

目前針對(duì)中藥復(fù)方多糖藥理活性研究較多，但因復(fù)方成分復(fù)雜，成分之間不易分離，純化難度較大，復(fù)方多糖提取工藝的研究比較薄弱。目前報(bào)道的中藥復(fù)方多糖提取方法多為水煎煮法、回流提取法及超聲波輔助提取法，而對(duì)于一些新的提取技術(shù)，如在單味中藥多糖提取中使用的酶法、超臨界流體萃取技術(shù)、半仿生提取法、雙水相萃取等，中藥復(fù)方多糖提取工藝中未見(jiàn)有報(bào)道，復(fù)方多糖的提取也可以嘗試采用新技術(shù)、新方法來(lái)提高多糖的提取率及純度。另外，為了達(dá)到更好的提取效果，針對(duì)中藥復(fù)方的復(fù)雜的成分，可采用不同提取方法協(xié)同應(yīng)用，如超聲-微波、超聲-酶法、超聲-微波-酶法、超聲波／微波-臨界流體等協(xié)同提?。?4-25］，通過(guò)兩種或多種提取方式的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，彌補(bǔ)單個(gè)提取法的不足，最大限度的提高復(fù)方多糖的得率。相信隨著中藥復(fù)方多糖的提取處理、純化工藝及新的提取技術(shù)研究的不斷深入，復(fù)方多糖的提取工藝將不斷得到優(yōu)化，藥材的利用率也將得到提高，進(jìn)一步促進(jìn)中藥復(fù)方多糖的藥理活性研究并將更多研究成果應(yīng)用到臨床中。

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