魏富梅 朝陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心理化檢測(cè)所 （遼寧 朝陽(yáng) 122000）

內(nèi)容提要： 目的：分析探討采用高效液相色譜儀用于測(cè)定烘培食品中脫氫乙酸的方法和效果。方法：對(duì)面包、蛋糕、桃酥、酥餅、蛋卷、餅干6種烘焙食品中的脫氫乙酸含量采用高效液相色譜儀測(cè)定，色譜柱：Diamonsil 5μm，C18(2)4.6mm×250mm，流動(dòng)相：乙腈：磷酸二氫鉀溶液（0.02mol/L）=(40+60)，流速：1mL/min，柱溫：40?C，檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程Y=2.295×104C-0.643×104，測(cè)定濃度范圍為10～100μg/mL，相關(guān)系數(shù)0.999，檢出限1.80μg/mL。脫氫乙酸平均回收率95.32%～98.49%，標(biāo)準(zhǔn)偏差1.73%～1.22%。同種樣品下，本方法下檢出的結(jié)果明顯高于國(guó)標(biāo)法，平均回收率也顯著更高（P＜0.05）。結(jié)論：采用該方法檢測(cè)烘焙食品中的脫氫乙酸不僅方便快速，同時(shí)檢測(cè)效果好，線性范圍寬，可滿足檢測(cè)要求。

烘焙食品中，脫氫乙酸為常用的一種防腐劑，我國(guó)GB2760-2011標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)其使用量和范圍都做出了嚴(yán)格的規(guī)定，因此，檢測(cè)烘焙食品中的脫氫乙酸含量對(duì)于保障食品安全具有重要的意義。當(dāng)前主要采用高效液相色譜法、氣相色譜法進(jìn)行脫氫乙酸含量的檢測(cè)，首先提取食品樣品的脫氫乙酸水溶液，然后采用色譜儀對(duì)提取液的分離、定性與定量分析[1]。大量的試驗(yàn)結(jié)果顯示，由于烘焙食品的基質(zhì)比較復(fù)雜，樣品前處理也比較復(fù)雜，導(dǎo)致液相色譜法檢測(cè)時(shí)間需要17min左右，靈敏度較低。為了探討烘焙食品中更好的提取脫氫乙酸的方法，在簡(jiǎn)化樣品前處理的同時(shí)保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度，提高檢測(cè)靈敏度，本次實(shí)驗(yàn)對(duì)6種烘焙食品中的脫氫乙酸含量采用高效液相色譜儀測(cè)定，并進(jìn)行相應(yīng)的優(yōu)化，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

①高效液相色譜（儀），采用日立L-2000型，配有紫外檢測(cè)器；分析天平，精密度0.1mg；料理機(jī)；②乙腈（色譜純），磷酸二氫鉀溶液（分析純），脫氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）。磷酸二氫鉀溶液：濃度0.02mol/L，配制：稱取磷酸二氫鉀2.4g，加超純水至1000mL，溶解完全后采用0.45μm濾膜過(guò)濾。

1.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil 5μm，C18(2)4.6mm×250mm；流動(dòng)相：乙腈：磷酸二氫鉀溶液（0.02mol/L）=（40+60）；流速：1mL/min；柱溫：40?C；進(jìn)樣體積：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器L-2400。

1.3 溶液配制

①配制標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取100mg脫氫乙酸，并將其置入到容量瓶中（100mL容量瓶），然后加入5mL超純水+5mL乙腈溶液溶解并稀釋，定容至100mL，搖勻，制備獲得標(biāo)準(zhǔn)貯備液，濃度為1000μg/mL；②配制標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mL、2mL、4mL、8mL和10mL），并置入容量瓶中（100mL容量瓶），然后加入5%乙腈稀釋貯備液至100mL定容，獲得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度依次為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL）[2]。吸取10μL各濃度標(biāo)準(zhǔn)液，并采用高效液相色譜儀檢測(cè)脫氫乙酸含量。

1.4 試驗(yàn)樣品的前處理

使用料理機(jī)先將面包、蛋糕、桃酥、酥餅、蛋卷、餅干6種烘焙樣品粉碎，然后分別稱取10g樣品，加水溶解并定容至100mL，充分振蕩搖勻后靜置30min，然后過(guò)濾收集到三角瓶中，采用0.45μm濾膜對(duì)水溶液再次過(guò)濾，檢測(cè)時(shí)，吸取樣品溶液10μL加入高效液相色譜儀自動(dòng)檢測(cè)分析[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本方法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)下的結(jié)果采用SPSS19.0軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 本方法與國(guó)標(biāo)方法的檢測(cè)比較

國(guó)標(biāo)法中的樣品溶液制備操作步驟較繁瑣，必須要經(jīng)過(guò)一系列的凈化操作，因此需要較多的時(shí)間，并且固相、液液的萃取還將可能對(duì)回收率和穩(wěn)定性造成影響，因此本次研究中，樣品貯備液直接采取水充分浸泡后提取，這種方式下可讓脫氫乙酸較好的溶解。國(guó)標(biāo)法中流動(dòng)相為甲醇-0.02mol/L乙酸銨（10:90），本方法采用的是乙腈：磷酸二氫鉀溶液（0.02mol/L）=（40+60），流速：1mL/min；柱溫：40?C，適用于面包、蛋糕、桃酥、酥餅、蛋卷、餅干6種烘焙食品中脫氧乙酸的分離。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低檢出限

實(shí)驗(yàn)條件下，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性方程Y=2.295×104C-0.643×104，測(cè)定濃度范圍為10～100μg/mL，相關(guān)系數(shù)0.999，檢出限1.80μg/mL。

2.3 本試驗(yàn)方法與國(guó)標(biāo)法的精密度、加標(biāo)回收率比較

將空白樣進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，即分別稱取樣品10g 6種烘焙食品，然后加入1.2mL 100mg/L脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液L（即加標(biāo)量為12mg/kg），提取樣品液并重復(fù)4次，按照色譜條件測(cè)定，計(jì)算精密度與回收率，結(jié)果見表1。同時(shí)按照國(guó)標(biāo)法對(duì)6種樣品進(jìn)行回收，計(jì)算國(guó)標(biāo)法的精密度與回收率，結(jié)果具體見表2。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示，本方法中，6種烘焙食品的脫氫乙酸平均回收率最低為95.32%，最高為98.49%，標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.73%～1.22%，結(jié)果滿足要求。同種樣品下，本方法下檢出的結(jié)果明顯高于國(guó)標(biāo)法，平均回收率也顯著更高（P＜0.05）。

表1.本方法下6種樣品加標(biāo)回收率

表2.國(guó)標(biāo)方法下加標(biāo)回收率

3.討論

烘焙食品中的脫氫乙酸含量檢測(cè)對(duì)于食品安全具有重要的意義，由于烘焙食品中含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)、油脂和糖類，前處理比較復(fù)雜，對(duì)脫氫乙酸含量的測(cè)定造成影響，國(guó)標(biāo)法中對(duì)此做出了規(guī)定，但實(shí)際檢測(cè)結(jié)果顯示檢測(cè)結(jié)果仍然存在一定的偏差[4]。本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法，流動(dòng)相采用乙腈：磷酸二氫鉀溶液（0.02mol/L）=（40+60），流速：1mL/min；柱溫：40?C，替代了國(guó)標(biāo)法中的甲醇-0.02mol/L乙酸銨（10:90），提高了分離速度，提高了效率，用于烘焙食品脫氫乙酸檢測(cè)較為適合，脫氫乙酸平均回收率達(dá)到95.32%～98.49%，標(biāo)準(zhǔn)偏差1.73%～1.22%，顯著優(yōu)于國(guó)標(biāo)法的平均回收率。在實(shí)際檢測(cè)工作中具有較高的參考價(jià)值。