文/劉 影 郝 巖

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)）

牛初乳通常是指母牛分娩后7 d內(nèi)所分泌的乳汁[1]。牛初乳富含多種免疫因子，但主要是含量很高、具有抗原結(jié)合特性的IgG[2]，因此，牛初乳具有豐富的營養(yǎng)價(jià)值，富含具有調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能的活性成分。初乳中常規(guī)營養(yǎng)成分（蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)）以及生物活性物質(zhì)（免疫因子、激素、生長因子等）含量比常乳高數(shù)倍，具有很高的開發(fā)利用價(jià)值[3]。目前，牛初乳類產(chǎn)品的安全性評(píng)價(jià)方面鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。本文依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》的要求，對(duì)以牛初乳為原料生產(chǎn)的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品開展安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，包括急性毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)）和30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)，驗(yàn)證完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品的安全性。

1 材料與方法

1.1 樣品

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品，由黑龍江省完達(dá)山乳業(yè)股份有限公司提供，其免疫球蛋白IgG含量為2.26%，樣品為乳黃色粉末，感官檢查未見異常。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小白鼠和Wistar品系大白鼠，均由黑龍江省腫瘤研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 大、小鼠急性毒性試驗(yàn)

選用Wistar大鼠和昆明種小白鼠，體重分別為180～220 g和18.0～22.0 g，按性別各隨機(jī)分成4 組，按霍恩氏法進(jìn)行劑量設(shè)計(jì)，即4 個(gè)劑量，分別為2.15、4.64、10.00、21.50 g/kg·bw。樣品以蒸餾水為溶劑，灌胃容積為20 mL/kg·bw，其中高劑量組在24 h內(nèi)分2 次進(jìn)行灌胃。大、小鼠禁食16 h后，經(jīng)口灌胃。觀察各組大、小鼠的中毒表現(xiàn)和死亡時(shí)間，觀察時(shí)間為14 d。

1.4 遺傳毒性試驗(yàn)

1.4.1 Ames試驗(yàn)

采用平板摻入法，進(jìn)行2 次平行試驗(yàn)。TA97、TA98、TA100和TA102 4 種菌株均由美國加州大學(xué)Ames實(shí)驗(yàn)室提供，經(jīng)菌株特性鑒定均符合試驗(yàn)要求。劑量設(shè)計(jì)為5.000、1.000、0.200、0.040、0.008 mg/0.1 mL。

1.4.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

昆明種小白鼠，體重25.0～30.0 g，隨機(jī)分成5 組。設(shè)3個(gè)劑量組，分別為高劑量組（5.00 g/kg·bw）、中劑量組（2.50 g/kg·bw）、低劑量組（1.25 g/kg·bw）；陰性對(duì)照組經(jīng)口灌胃蒸餾水；陽性對(duì)照組經(jīng)口灌胃環(huán)磷酰胺，劑量為60.0 mg/kg·bw。各組均按20 mL/kg·bw容積灌胃。計(jì)算微核細(xì)胞率。

表1 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品大鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

表2 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

1.4.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)

昆明種雄性小白鼠，體重25.0～30.0 g，隨機(jī)分成5 組。設(shè)3 個(gè)劑量組，劑量設(shè)計(jì)同小鼠骨髓微核試驗(yàn)，即高劑量組（5.0 g/kg·bw）、中劑量組（2.5 g/kg·bw）、低劑量組（1.25 g/kg·bw）。陰性對(duì)照組經(jīng)口灌胃蒸餾水；陽性對(duì)照組經(jīng)口灌胃環(huán)磷酰酸，劑量為60 mg/kg·bw。各組均按20 mL/kg·bw容積灌胃。計(jì)算畸形率。

1.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

剛斷乳的Wistar大鼠，體重60～80 g，隨機(jī)分成4 組，其中3組為試驗(yàn)組，1 組為陰性對(duì)照組。試驗(yàn)組劑量設(shè)計(jì)為：高劑量組3 g/kg·bw，此劑量相當(dāng)于人體推薦用量的100 倍；中劑量組1.65 g/kg·bw，此劑量相當(dāng)于人體推薦用量的50 倍；低劑量組0.83 g/kg·bw，此劑量相當(dāng)于人體推薦用量的25 倍。按上述劑量將受試樣品加入基礎(chǔ)飼料中，動(dòng)物進(jìn)食量按體重10%計(jì)，陰性對(duì)照組喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料30 d，每天觀察并記錄動(dòng)物的一般狀況、中毒癥狀及死亡情況。每天記錄給食量和撒食量，每周計(jì)算攝食量，每周稱1 次體重。根據(jù)30 d增重和攝食量，計(jì)算食物利用率。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采血檢測血液學(xué)指標(biāo)，并檢測生化指標(biāo)，同時(shí)剖開大鼠腹部，取出肝、腎、脾、睪丸、卵巢稱重，計(jì)算臟器/體重值，并進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1.6 數(shù)據(jù)處理

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)選用泊松分布、方差分析、χ2檢驗(yàn)和均數(shù)t檢驗(yàn)等方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

大鼠和小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果分別見表1和表2。在14 d的觀察期間內(nèi)，大、小鼠均未出現(xiàn)任何中毒癥狀，無動(dòng)物死亡，大、小鼠狀態(tài)良好。根據(jù)觀察到的結(jié)果及大、小鼠急性毒性判定標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)為完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品屬實(shí)際無毒物質(zhì)。

2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1 Ames試驗(yàn)

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品2 次Ames試驗(yàn)結(jié)果分別見表3和表4，結(jié)果表明，受檢樣品對(duì)Ames試驗(yàn)菌株均呈陰性結(jié)果，即為致突變陰性。

表3 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品第一次Ames試驗(yàn)結(jié)果

表4 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品第二次Ames試驗(yàn)結(jié)果

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品的小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果見表5。對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行泊松分布檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，雄、雌小鼠各劑量組的微核細(xì)胞率與陰性對(duì)照組相比，均無顯著差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品的小鼠骨髓嗜多染微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.2.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)

從表6可知，各組小鼠均可見到一定數(shù)量的畸形精子，除陽性對(duì)照組外，各試驗(yàn)組小鼠的精子畸形率與陰性對(duì)照組相比，均沒有超過2倍，且無劑量效應(yīng)關(guān)系，變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率沒有影響。

表5 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠骨髓微核發(fā)生率的影響

表6 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率的影響

2.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

在整個(gè)試驗(yàn)過程中，各組動(dòng)物一般狀況良好，未見受試動(dòng)物有任何不良反應(yīng)，亦無中毒或死亡。

2.3.1 對(duì)大鼠體重的影響

在30 d喂養(yǎng)過程中，完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠體重增長的影響見表7。對(duì)大鼠體重進(jìn)行方差分析處理，結(jié)果顯示各組間均無顯著性差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠體重的增長無顯著影響。

2.3.2 對(duì)大鼠總食物利用率的影響

在30 d喂養(yǎng)過程中，完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠總食物利用率的影響見表8。對(duì)大鼠的食物利用率進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明各組間無顯著性差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠的總食物利用率無顯著影響。

2.3.3 對(duì)大鼠血紅蛋白和白細(xì)胞總數(shù)的影響

大鼠的血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果見表9。血紅蛋白含量和白細(xì)胞計(jì)數(shù)均在正常值范圍內(nèi)。各劑量組與陰性對(duì)照組相比，均無顯著性差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠血紅蛋白含量和白細(xì)胞總數(shù)無顯著影響。

表8 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠總食物利用率的影響

表9 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)的血液學(xué)檢查結(jié)果

表10 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠白細(xì)胞分類的影響

2.3.4 對(duì)大鼠白細(xì)胞分類的影響

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠白細(xì)胞分類的影響檢測結(jié)果見表10。從表10可見，雄性、雌性大鼠的嗜酸性、中性、淋巴、單核等細(xì)胞均在正常值范圍之內(nèi)，且各劑量組與陰性對(duì)照組相比，均無顯著性差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)各型白細(xì)胞均無顯著影響。

2.3.5 對(duì)大鼠末期生化指標(biāo)的影響

30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，分離大鼠血清，檢測血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、血糖（GLu）、血清尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、血清白蛋白（ALb）、球蛋白（GLO）、總膽固醇（TCH）、肌酐（Cr）等指標(biāo)，結(jié)果見表11。結(jié)果表明，各項(xiàng)指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi)，且與陰性對(duì)照組相比，無顯著性差異，說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠生化指標(biāo)無明顯的影響。

表11 末期生化檢驗(yàn)結(jié)果

表12 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠臟器/體重值的影響

2.3.6 對(duì)大鼠臟器/體重值的影響

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠臟器/體重值的影響見表12。試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比，各臟器/體重值均無顯著差異（p＞0.05）。

各組大鼠主要臟器的病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，均未見到明顯病理組織學(xué)改變。各組動(dòng)物肝臟被膜完整，呈小葉結(jié)構(gòu)，無壞死、出血及炎細(xì)胞浸潤等改變；腎臟皮質(zhì)與髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，腎小球與腎小管結(jié)構(gòu)正常，未見壞死、出血及炎性改變；其它臟器亦均未見病理改變。說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)大鼠肝、脾、腎、睪丸等主要臟器無損害作用。

3 小結(jié)

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)屬實(shí)際無毒物質(zhì)；Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)等3 項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)檢測均為陰性結(jié)果；30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)亦未見其對(duì)受試動(dòng)物有任何毒性損害作用。C