徐 建，康慧芬，楊惠琳，張立忠

(1.寧夏寶塔化工中心實驗室(有限公司)，寧夏 銀川 750001；2.寧夏寶塔石化科技實業(yè)發(fā)展有限公司 ，寧夏 銀川 750001)

甘草是常用的中藥品種之一，具有補脾益氣、清熱解毒、止痛、調(diào)和藥效的效果[1]。甘草的主要有效成分為甘草酸、甘草苷和異甘草素等[2]。經(jīng)藥理研究表明，甘草酸具有顯著的腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，可以用于人體抗衰老、抗炎、降壓、增強機體免疫力、提高生理機能的作用[3]。近年來，還用于病毒性肝炎的預(yù)防和治療癌癥以及艾滋病等[4]。本文采用超聲波提取法及高效液相色譜法對甘草中甘草酸的含量進行測定，效果良好，為甘草的質(zhì)量研究和科學使用提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要試劑

標準品：甘草酸單銨鹽(中國藥品生物制品檢定所)；原料：甘草(河北圣山生物科技有限公司)；試劑：乙醇、磷酸等，均為分析純；乙腈，色譜純；超純水。

1.2 主要儀器

U-3000型高效液相色譜儀(美國熱電儀器有限公司)；電子天平(天津市天馬儀器廠)；紫外-可見分光光度計(德國耶拿儀器公司)等。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.05%磷酸(38∶62)，檢測波長：252 nm，流速：1.0 mL·min-1，柱溫為室溫；進樣量：10μL。

1.3.2 溶液制備

對照品溶液：精密稱取甘草酸單銨鹽對照品適量，加70%乙醇溶液溶解并稀釋制成每1mL中約含甘草酸0.2mg的溶液，搖勻待用。

供試品溶液：精密稱定甘草粉末約0.2 g置具塞錐形瓶中，加入100mL 70%乙醇，密塞搖勻后稱定重量，超聲處理半小時后放冷再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量后搖勻濾過，取續(xù)濾液。

2 結(jié)果與分析

2.1 重復(fù)性試驗

精密量取對照品溶液10μL注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，考察甘草酸含量測定重復(fù)性，結(jié)果見表1。

表1 重復(fù)性考察結(jié)果

由試驗結(jié)果可知，甘草中甘草酸含量測定重復(fù)性良好。

2.2 檢測限

精密稱取甘草酸單銨鹽對照品適量，加70%乙醇溶解并稀釋制成一定濃度的溶液，精密量取10μL，注入液相色譜儀，使甘草酸主峰峰高約為基線噪音的3～5倍，以此濃度作為甘草酸含量測定的檢測限，結(jié)果見圖1。

圖1 方法檢測限色譜圖

由試驗結(jié)果可知，甘草酸含量測定的檢測限為0.001μg/mL。

2.3 定量限

精密稱取甘草酸單銨鹽對照品適量，加70%乙醇溶解并稀釋制成一定濃度的溶液，精密量取10μL，注入液相色譜儀，使甘草酸主峰峰高約為基線噪音的10倍，以此濃度作為甘草酸含量測定的定量限，結(jié)果見圖2。

圖2 甘草酸含量測定方法學定量限色譜圖

由試驗結(jié)果可知，甘草酸含量測定的定量限為0.003μg/mL。

2.4 線性相關(guān)性試驗

稱量甘草酸單銨鹽對照品適量，加70%乙醇溶解并稀釋制成每1 mL中分別約含甘草酸50、100、150、200、250、300、350μg的線性溶液，吸取各線性溶液10μL，注入液相色譜儀，以濃度(C)為橫坐標與峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸。

結(jié)果為：線性回歸方程：A = 0.07495C + 0.48776，R2=0.99993。由此可知，甘草酸在50～350μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性相關(guān)性。

2.5 穩(wěn)定性考察

精密量取新配制的供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，每隔2h進樣檢測一次，考察溶液穩(wěn)定性，結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性考察結(jié)果

由試驗可知，樣品12 h內(nèi)未見顯著變化，樣品穩(wěn)定性良好。

2.6 準確度

精密稱量甘草酸單銨鹽適量，加70%乙醇溶解，稀釋成每1 mL中約含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液；取已知含量的甘草溶液，置10 mL量瓶中，配制9份，分別加入甘草酸單銨鹽對照品適量，加70%乙醇溶解配制成低、中、高三個濃度，搖勻，濾過，作為供試樣品溶液；精密量取上述各溶液10μL，注入液相色譜儀，考察方法的準確度，結(jié)果見表3。

由試驗結(jié)果可知，甘草中甘草酸含量測定方法準確度良好。

表3 準確度試驗結(jié)果

2.7 精密度試驗

精密稱取甘草粉末6份各約0.2 g，置具塞錐形瓶中，加入100 mL 70%乙醇，密塞搖勻后稱定重量，超聲處理半小時，放冷后再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻濾過取續(xù)濾液，平行配制6個樣品，測定含量，考察方法精密度，結(jié)果見表4。

表4 精密度考察結(jié)果

由試驗結(jié)果可知，甘草酸精密度的RSD為0.26%，精密度實驗結(jié)果良好。

3 結(jié)論

(1)以高效液相色譜法檢測甘草中甘草酸的含量。色譜條件為：色譜柱：C18(150 mm×4.6 mm，5μm)，流動相：乙腈-0.05%磷酸(38∶62)，檢測波長：252 nm，流速：1.0 mL·min-1，柱溫為室溫；進樣量：10 μL。

(2)高效液相色譜法檢測甘草中甘草酸具有重復(fù)性好、檢出限低、線性相關(guān)性良好，受環(huán)境影響小、準確度和精密度良好，操作簡單、測定迅速的特點。

(3)以確定的色譜條件對甘草中甘草酸進行含量測定，通過外標法計算甘草中的甘草酸含量為4.79%。該方法簡便、準確、可靠，適用于測定甘草及其制劑產(chǎn)品中的甘草酸含量。