左 丹，劉 冬，李仕琪，秦亦飛，孫海燕,*，明 建*

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院 深圳市發(fā)酵精制檢測系統(tǒng)重點實驗室，廣東 深圳 518055）

茶是世界三大飲料之一[1]，茶多酚是茶葉多酚類化合物的總稱。茶葉中含有30多種茶多酚，占茶葉干質(zhì)量的15%～30%，在茶葉發(fā)揮主要生物活性及藥理學(xué)活性中起主導(dǎo)作用[2-4]。但民間歷來有“藥茶不能同食”的說法，認(rèn)為茶能降低藥物療效，然而飲茶對藥物的影響一直未見全面報道，相關(guān)作用機(jī)制也缺乏全面的實驗證據(jù)[5-7]。

肝臟細(xì)胞色素P450（cytochrome P450，CYP450）氧化酶是參與大多數(shù)臨床藥物、環(huán)境致癌物、外源毒物及內(nèi)源活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化的主要酶系統(tǒng)，其中CYP450 3A4氧化酶（CYP3A4）占肝臟P450氧化酶總量的35%，由于小鼠和人的藥物代謝酶基因具有同源性，小鼠肝Cyp3a11相當(dāng)于人肝CYP3A4表達(dá)[8-9]。大量研究證實，孕烷X受體（pregnane X receptor，PXR）是調(diào)控CYP3A4基因表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它是核受體（nuclear receptors，NRs）超家族中的重要成員，內(nèi)外源化合物通過激活PXR介導(dǎo)的信號通路調(diào)節(jié)CYP3A4表達(dá)是影響物質(zhì)在體內(nèi)代謝的重要途徑[10]。其機(jī)制為：當(dāng)PXR被內(nèi)源性和外源性化合物激活后，構(gòu)象發(fā)生改變，并與視黃醇X受體（retinoid X receptor，RXR）結(jié)合形成異源二聚體，在某些輔助蛋白酶的作用下，與CYP3A4基因啟動子上特定位點結(jié)合，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，引發(fā)一系列的生物學(xué)效應(yīng)[11]。

本實驗采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time reverse transcription polymerase chain reaction，real-time RT-PCR）和Western blot法，研究黃山毛峰茶多酚對小鼠肝Cyp3a11、PXR的影響，并采用雙熒光素酶報告基因技術(shù)闡明茶多酚調(diào)控CYP3A4的作用機(jī)制，以期揭示“藥茶不能同食”的理論依據(jù)，為臨床合理用藥、保障用藥安全性和有效性提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

C57BL/6小鼠（雌性SPF級，7～8 周齡，體質(zhì)量（17±2）g，許可證號：SCXK（粵）2011-0015）和飼料均購自南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。

人肝癌HepG2細(xì)胞株購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。pSG5-hPXR表達(dá)質(zhì)粒為美國德州大學(xué)西南醫(yī)學(xué)中心Steven Kliewer教授惠贈；pGL3-CYP3A4-XREM報告質(zhì)粒為美國堪薩斯大學(xué)Jeff Staudinger教授惠贈；pRL-TK內(nèi)參質(zhì)粒、pSG5空載體、大腸桿菌DH5α菌株購自北京天恩澤基因科技有限公司。

黃山毛峰購于安徽黃山，屬二級茶葉，經(jīng)烘干、打粉，過80 目篩，避光4 ℃保存。

UNIQ-10柱式TRIzol總RNA抽提試劑盒、1×TE buffer、Cyp3a11、PXR引物、Loading buffer 生工生物工程（上海）股份有限公司；PrimeScriptTMRT Master Mix、SYBR?Premix Ex TaqTM（TliRNaseH Plus）、RNase-free水 日本Takara公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒 美國Pierce公司；脫脂奶粉 美國CST公司；NP-40 美國Merck公司；ECL化學(xué)發(fā)光液、預(yù)染蛋白Maker 美國Bio-Rad公司；胰蛋白胨、酵母提取物 英國Oxoid公司；氯化鈉、氨芐青霉素、甘油 美國Amresco公司；plasmid Midi Kit 德國QIAGEN公司；利福平（rifampicin，RIF）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）、四甲基乙二胺、過硫酸銨、100×蛋白酶抑制劑、乙酸、乙腈、福林-酚試劑、沒食子酸（gallic acid，GA）、表兒茶素（epicatechin，EC）、表沒食子兒茶素（epigallocatechin，EGC）、兒茶素（catechin，C）、兒茶素沒食子酸酯（catechin gallate，CG）美國Sigma公司；Cyp3a11、PXR一抗（多克隆兔抗）、二抗（辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔） 英國Abcam公司；DMEM basic（1×）、澳洲特級胎牛血清、Penicillin-Streptomycin雙抗、體積分?jǐn)?shù)0.05%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid，trypsin-EDTA）（1×）、Opti-MEM培養(yǎng)基 美國Gibco公司；Lipofectamine?3000 Transfection Kit 美國Invitrogen公司；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 美國Promega公司；沒食子兒茶素沒食子酸酯（gallocatechin gallate，GCG）、咖啡因（caffeine，CAF）、沒食子兒茶素（gallocatechin，GC） 北京盛世康晉化工研究院；表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG） 廣州和為化工有限公司；表兒茶素沒食子酸酯（epicatechin gallate，ECG） 上海源葉生物科技有限公司；甲醇、氯仿、無水乙醇等均為國產(chǎn)試劑。

1.2 儀器與設(shè)備

5180R型冷凍離心機(jī)、22331紫外分光光度計、微量移液槍、普通PCR儀 德國Eppendorf公司；FastPrep-24樣品處理系統(tǒng) 安倍醫(yī)療器械貿(mào)易（上海）有限公司；ABI Q6 Flex全功能定量PCR儀 美國Applied Biosystems公司；MiniProtein電泳系統(tǒng)、MiniTrans-Blot轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)、全自動凝膠成像儀 美國Bio-Rad公司；SpectraMax M5e多功能酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices公司；Laborota4001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國Hedolphg公司；MS1 Minishaker漩渦混合儀 德國IKA公司；DMIRB倒置生物熒光顯微鏡 德國Leica公司；LC-20A高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀日本島津公司；ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱 美國Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 茶多酚提取物含量及組分分析1.3.1.1 黃山毛峰茶多酚的提取

參照GB/T 8313—2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》[12]并稍作修改：取20 g已處理的黃山毛峰茶粉，按1∶25（m/V）加入預(yù)熱的體積分?jǐn)?shù)70%甲醇溶液，70 ℃水浴中冷凝回流冷浸提30 min，重復(fù)浸提3 次，合并濾液，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的15%～20%，保證甲醇幾乎被完全蒸發(fā)，再用3 倍體積氯仿萃取1 次，再次旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，旋至萃取后體積的5%左右，溶解剩余部分于超純水中。15 000 r/min離心20 min，取上清液，真空冷凍干燥，常溫避光保存。

1.3.1.2 茶多酚提取物總多酚含量測定

總多酚含量測定采用Folin-Ciocalteu法[13]。茶多酚含量以每克茶多酚提取物中所含的沒食子酸當(dāng)量（mg GAE/g md）表示。每個樣品做3 組平行。

1.3.1.3 HPLC法分析茶多酚組成

樣品儲備液制備：準(zhǔn)確稱取黃山毛峰茶多酚提取物10 mg，用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液溶解，定容至10 mL，經(jīng)0.45 μm有機(jī)膜過濾，于－80 ℃冰箱貯藏備用。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品GA、CAF、EGCG、EC、EGC、ECG、C、GC、CG、GCG 5 mg，分別用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液定容至5 mL，于－80 ℃冰箱貯藏備用。使用前，根據(jù)實驗需要將各標(biāo)準(zhǔn)品貯備液用體積分?jǐn)?shù)50%的甲醇溶液等梯度稀釋成適合濃度，配制成標(biāo)準(zhǔn)工作液以及混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。進(jìn)樣前經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜過濾。

色譜條件：色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A為體積分?jǐn)?shù)0.17%乙酸溶液；流動相B為體積分?jǐn)?shù)100%乙腈；檢測波長280 nm；流速1 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；柱溫35 ℃。HPLC梯度洗脫程序參考李艷等[14]的方法（表1）。

表1 高效液相色譜洗脫條件Table1 Elution conditions for HPLC

1.3.2 茶多酚提取物對肝藥酶Cyp3a11的調(diào)控作用

1.3.2.1 動物實驗設(shè)計

將24 只健康成年SPF級C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4 組，即空白對照組，黃山毛峰茶多酚提取物低（75 mg/（kg·d），以體質(zhì)量計，下同）、中（150 mg/（kg·d））、高劑量（300 mg/（kg·d））組。動物在相對濕度50%～60%、溫度20～25 ℃、光照/黑暗分別為12 h的SPF級屏障環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)。每天早上分別對實驗組小鼠灌胃不同劑量黃山毛峰茶多酚提取物，持續(xù)7 d，空白對照組按體質(zhì)量（10 mL/kg）灌胃超純水7 d，灌胃2 h后正常進(jìn)食、飲水。第7天灌胃2 h后斷頸處死，取肝組織，－80 ℃保存。

1.3.2.2 RNA的提取及real-time RT-PCR實驗

取凍存的小鼠肝臟50 mg，按照UNIQ-10柱式TRIzol總RNA抽提試劑盒和PrimeScriptTMRT Master Mix試劑盒提取及逆轉(zhuǎn)錄RNA。紫外分光光度計測定RNA純度。采用SYBR?Premix Ex TaqTM（TliRNaseH Plus）試劑盒對mRNA的表達(dá)進(jìn)行相對定量，所有操作均在冰上進(jìn)行；選擇β-actin作為內(nèi)參基因，定量方法采用比較閾值法（2－△△Ct法），計算實驗組和空白對照組之間的基因表達(dá)水平的差異[15]。引物序列參照文獻(xiàn)[16]設(shè)計（表2）。

表2 Real-time RT-PCR引物Table2 Real-time RT-PCR primers used in this study

1.3.2.3 蛋白提取及Western blot實驗

用蛋白裂解液（每1 mL加10 μL 100 mmol/L的PMSF）提取肝臟蛋白，用BCA法定量蛋白質(zhì)量濃度，取所需體積的蛋白質(zhì)溶液按比例加入5×Loading buffer，100 ℃沸水浴煮5 min。樣品經(jīng)過電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育一抗、洗膜、孵育二抗、洗膜，加入ECL發(fā)光液反應(yīng)5 min后，采用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)進(jìn)行自動曝光，并用Image Lab 5.1軟件系統(tǒng)對各顯色條帶進(jìn)行半定量分析。

1.3.2.4 質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染與雙熒光素酶報告基因檢測

對數(shù)生長期HepG2細(xì)胞按1×104個/孔接種到96 孔板中，培養(yǎng)24 h。將質(zhì)粒pSG5-hPXR或pSG5、pRL-TK、CYP3A4-XREM-Luc、脂質(zhì)體與Opti-MEM培養(yǎng)基孵育20 min。移去96 孔中原有培養(yǎng)基，每孔加入50 μL無雙抗的DMEM培養(yǎng)基（含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清）。完成孵育后，向每孔中加入50 μL上述脂質(zhì)體-DNA混合物。培養(yǎng)24 h后，加入含有不同質(zhì)量濃度黃山毛峰茶多酚提取物（茶多酚低、中、高質(zhì)量濃度組分別為100、200、300 μg/mL）的無血清培養(yǎng)基，同時設(shè)置10 μmol/L RIF作為陽性對照組，體積分?jǐn)?shù)0.1% DMSO作為溶劑對照組。給藥24 h后，移去培養(yǎng)基，并用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞1 次，按雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒操作說明進(jìn)行雙熒光酶活力檢測。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 茶多酚提取物含量及組分分析

根據(jù)沒食子酸濃度與吸光度得標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝0.002 4x+0.032 3（R2＝0.998 8），式中y表示吸光度，x表示沒食子酸質(zhì)量濃度，由該回歸方程計算得出黃山毛峰茶多酚提取物中總多酚含量為（434.11±8.76）mg GAE/g md。HPLC結(jié)果表明黃山毛峰茶多酚提取物中含EGCG（265.57 μg/mg，占總物質(zhì)的26.6%）、ECG（133.05 μg/mg）、C（69.27 μg/mg）、EGC（64.92 μg/mg）、CAF（37.85 μg/mg）、EC等物質(zhì)（圖1、表3）。

圖1 茶多酚混合標(biāo)準(zhǔn)品（A）、黃山毛峰茶多酚提取物（B）在280 nm波長處的色譜圖Fig.1 Chromatograms of mixed standards of tea polyphenols (A) and tea polyphenols from Huangshan Maofeng tea (B)

表3 HPLC定量分析黃山毛峰茶多酚Table3 HPLC quantitative analysis of tea polyphenols in Huangshan Maofeng tea

2.2 黃山毛峰茶多酚提取物對Cyp3a11表達(dá)水平的影響

圖2 黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11 mRNA表達(dá)的作用Fig.2 Effect of tea polyphenols from Huangshan Maofeng tea on mRNA expression of Cyp3a11 in liver of mice

如圖2所示，與空白對照組相比，黃山毛峰茶多酚提取物各劑量組對小鼠肝Cyp3a11 mRNA的表達(dá)呈顯著誘導(dǎo)作用（P＜0.01），無明顯的量效關(guān)系。

圖3 黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11蛋白表達(dá)的作用Fig.3 Effect of tea polyphenols from Huangshan Maofeng tea on protein expression of Cyp3a11 in liver of mice

如圖3所示，與空白對照組相比，黃山毛峰茶多酚提取物各劑量組均對小鼠肝Cyp3a11蛋白的表達(dá)有顯著誘導(dǎo)作用（P＜0.01），隨劑量的升高誘導(dǎo)作用逐漸減弱，呈一定的量效關(guān)系。

由圖2、3可以看出，在黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11的影響作用中，其mRNA和蛋白表達(dá)的分析結(jié)果趨勢不大相同，但總體說來，各劑量組對小鼠肝Cyp3a11 mRNA及其蛋白的表達(dá)均呈顯著誘導(dǎo)作用，mRNA表達(dá)結(jié)果與蛋白表達(dá)結(jié)果一致，說明黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11呈顯著誘導(dǎo)作用。

2.3 黃山毛峰茶多酚提取物對PXR表達(dá)水平的影響

如圖4所示，與空白對照組相比，黃山毛峰茶多酚提取物各劑量組均對小鼠肝PXR mRNA的表達(dá)呈顯著誘導(dǎo)作用（P＜0.01），隨劑量的增高誘導(dǎo)作用逐漸減弱，存在明顯的量效關(guān)系。

圖4 黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝PXR mRNA表達(dá)的作用Fig.4 Effect of tea polyphenols from Huangshan Maofeng tea on mRNA expression of PXR in liver of mice

圖5 黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝PXR蛋白表達(dá)的作用Fig.5 Effect of tea polyphenols from Huangshan Maofeng tea on protein expression of PXR in liver of mice

如圖5所示，與空白對照組相比，黃山毛峰茶多酚提取物各劑量組均對小鼠肝PXR蛋白的表達(dá)有極顯著誘導(dǎo)作用（P＜0.01），無明顯的量效關(guān)系。

由圖4、5可以看出，在黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝PXR的影響作用中，其mRNA和蛋白表達(dá)的分析結(jié)果趨勢不大相同，但總體說來，黃山毛峰茶多酚提取物各劑量組對小鼠肝PXR mRNA及其蛋白的表達(dá)均呈顯著誘導(dǎo)作用，mRNA表達(dá)結(jié)果與蛋白表達(dá)結(jié)果一致，說明黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝PXR呈顯著誘導(dǎo)作用。

2.4 黃山毛峰茶多酚提取物對PXR-CYP3A4雙熒光素酶報告基因的影響

與溶劑對照組比較，陽性對照組CYP3A4熒光素酶活力極顯著增強(qiáng)（P＜0.01），是溶劑對照組的6.11 倍，表明高靈敏度的PXR-CYP3A4熒光素酶報告基因體系成功建立（圖6）；隨著黃山毛峰茶多酚提取物質(zhì)量濃度的升高，CYP3A4螢光素酶活力逐漸增強(qiáng)（P＜0.01），100、200、300 μg/mL黃山毛峰茶多酚提取物劑量組分別是溶劑對照組的（3.86±0.05）、（4.82±0.72）、（5.38±0.11）倍，呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，提示黃山毛峰茶多酚物提取物可能作為PXR的配體從而激活CYP3A4 DNA反應(yīng)元件，上調(diào)CYP3A4的表達(dá)。與陽性對照組比較，黃山毛峰茶多酚提取物低、中、高各質(zhì)量濃度+RIF組CYP3A4熒光素酶活力均有不同程度增強(qiáng)，其中，中質(zhì)量濃度+RIF組CYP3A4熒光素酶活力極顯著增強(qiáng)（P＜0.01），說明黃山毛峰茶多酚提取物與RIF能夠協(xié)同作用于PXR通路誘導(dǎo)CYP3A4活性。

圖6 黃山毛峰茶多酚提取物經(jīng)PXR通路對CYP3A4熒光素酶活性的影響Fig.6 Effect of tea polyphenols from Huangshan Maofeng tea on CYP3A4 luciferase activity through the PXR pathway

3 討 論

茶多酚主要經(jīng)由CYP450酶代謝，其中CYP3A作為P450家族中最重要的I相藥物代謝酶系統(tǒng)參與多種內(nèi)源性及外源性物質(zhì)在體內(nèi)轉(zhuǎn)化[17]。而通過它進(jìn)行代謝作用的物質(zhì)本身亦會對它產(chǎn)生作用，其誘導(dǎo)或抑制將產(chǎn)生復(fù)雜的藥物和其他藥物或化合物之間的相互作用，這種相互作用可能會引起藥物在體內(nèi)的潛在毒性[18-19]。國內(nèi)外大量研究表明，內(nèi)、外源性物質(zhì)對于CYP3A酶活性的抑制或誘導(dǎo)作用往往是源于其作為配體激活了多種NRs，其中PXR是CYP3A4的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子[20-21]。目前國內(nèi)外研究主要集中在茶多酚提取物一些生物活性上，如對抗氧化、抗腫瘤、抑菌等，而茶多酚對肝藥酶的影響作用研究甚少[22]。本實驗從基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平上對黃山毛峰茶多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11的作用進(jìn)行了探討，并采用雙熒光素酶報告基因檢測技術(shù)來觀察黃山毛峰茶多酚提取物是否為PXR的外源性配體，從基因調(diào)控角度闡明茶多酚影響Cyp3a11的作用機(jī)制。

PXR報告基因依據(jù)PXR調(diào)節(jié)CYP3A4表達(dá)而建立，通過此實驗?zāi)Ｐ涂闪私馔庠椿瘜W(xué)物對CYP3A4的誘導(dǎo)情況及對CYP3A4的誘導(dǎo)是否通過PXR這一途徑起作用。PXR活化在報告基因?qū)嶒灪腿烁渭?xì)胞實驗中有很好的相關(guān)性，實驗系統(tǒng)不存在個體差異，重現(xiàn)性好。本研究采用了目前報告基因應(yīng)用最為廣泛的HepG2細(xì)胞模型，該細(xì)胞中的PXR表達(dá)量低，內(nèi)源性干擾少，故外源性的PXR可以實現(xiàn)高表達(dá)。為了提高實驗系統(tǒng)的靈敏度，優(yōu)化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染體系，基于本實驗室各方面的條件及其他成員的研究，最終選擇每孔轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒質(zhì)量分別為：100 ng pSG5-hPXR、100 ng pGL3-CYP3A4-XREM以及6 ng pRL-TK。

本研究結(jié)果表明：1）黃山毛峰茶多酚提取物中總多酚含量為（434.11±8.76）mg GAE/g md，主要含有EGCG、ECG、C、EGC這4 種物質(zhì)，含量高達(dá)532.81 μg/mg，占總物質(zhì)的53.3%。此外，在HPLC圖中存在其他高響應(yīng)峰，可推斷黃山毛峰茶多酚提取物中還含有其他含量較高的酚類物質(zhì)及衍生物，需要進(jìn)一步確認(rèn)這些高含量物質(zhì)，以便更全面分析黃山毛峰茶多酚提取物中主要酚類組分成分及含量對肝藥酶的調(diào)控作用。2）黃山毛峰茶多酚提取物各劑量組對小鼠肝Cyp3a11及核受體PXR的mRNA和蛋白表達(dá)均呈顯著誘導(dǎo)作用，說明黃山毛峰茶多酚提取物能誘導(dǎo)小鼠肝Cyp3a11表達(dá)各劑量組可能機(jī)制為通過對調(diào)控PXR實現(xiàn)。PXR是一種配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子，底物廣泛，配體上官能團(tuán)電子性質(zhì)對PXR調(diào)節(jié)方向至關(guān)重要，決定其是PXR抑制劑或激活劑[23-24]。3）報告基因檢測結(jié)果進(jìn)一步驗證上述判斷，黃山毛峰茶多酚提取物可通過激活PXR通路來上調(diào)CYP3A4表達(dá)。Rhodes等[25]在CYP3A4啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)并鑒定了反向重復(fù)序列（everted repeat，ER）-6、遠(yuǎn)端外源物反應(yīng)增強(qiáng)子模體、直接重復(fù)序列（directed repeat，DR）-3等PXR的反應(yīng)元件。此外，結(jié)合人源化轉(zhuǎn)基因小鼠模型可知，CYP3A4誘導(dǎo)表達(dá)的種屬特征完全由PXR受體決定[26]。4）PXR-CYP3A途徑不是一個封閉式的反應(yīng)模式，CYP3A4調(diào)控區(qū)可以和多種核受體結(jié)合從而促進(jìn)或抑制基因的表達(dá)，且它們對CYP3A4轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用方式及調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄過程之間的關(guān)聯(lián)有待進(jìn)一步研究。Burk等[27]研究表明PXR和組成型雄甾烷受體（constitutiveandrostane receptor，CAR）能以交互方式的方式共同調(diào)節(jié)CYP3A轉(zhuǎn)錄活化，顯示核受體對P450酶的調(diào)控方式可能具有網(wǎng)絡(luò)性。Keisuke[28]等曾報道肝X受體α（liver X receptor α，LXRα）在CYP3A4的表達(dá)中的獨(dú)特雙重作用：作為CYP3A4正調(diào)節(jié)因子，LXRα可通過dNR1和eNR3A4反應(yīng)元件上調(diào)CYP3A4表達(dá)，但卻抑制PXR介導(dǎo)CYP3A4表達(dá)。此外，影響CYP3A4表達(dá)的因素很多，如一些影響核受體與CYP3A4結(jié)合的因素[29]、物質(zhì)與酶的直接結(jié)合產(chǎn)生的競爭性抑制效應(yīng)或變構(gòu)效應(yīng)等[30-31]。

綜上所述，黃山毛峰多酚物提取物通過PXR通路來誘導(dǎo)Cyp3a11表達(dá)，從而影響其他藥物或化學(xué)物在人體的代謝，甚至有可能發(fā)生與合用藥物之間的相互作用。要全面闡述酶的抑制或誘導(dǎo)機(jī)制，這些方面仍需繼續(xù)深入研究，如黃山毛峰多酚物提取物對Cyp3a11表達(dá)的影響是否與其他核受體如CAR、LXRα有關(guān)，它們與配體之間的結(jié)合能力和結(jié)合順序是否有差異，當(dāng)介導(dǎo)Cyp3a11表達(dá)時它們之間的關(guān)系又如何。此外，還需要結(jié)合黃山毛峰多酚物提取物對其他CYP450亞型和其他藥物代謝酶（如酯酶、葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體（如P-糖蛋白）的相關(guān)作用及它們之間的聯(lián)系才能準(zhǔn)確預(yù)測黃山毛峰多酚物提取物對其他藥物或化學(xué)物代謝行為的影響。