趙曉娟 胡律江 郭慧玲

摘要：目的 探究建昌幫特色飲片四制香附調(diào)經(jīng)止痛的物質(zhì)基礎(chǔ)。方法 采用系統(tǒng)溶劑提取法對香附進(jìn)行分部位提取，從在體、離體和血液流變學(xué)三個層面對其活性成分進(jìn)行測定，并采用NMR對其有效成分進(jìn)行分析。結(jié)果 石油醚部位為香附調(diào)經(jīng)止痛的有效部位，其有效成分有豆甾醇、胡蘿卜苷、大黃素甲醚和十六烷酸。結(jié)論 本研究首次采用在體模型、離體模型和血液流變學(xué)指標(biāo)三種方法同時評價建昌幫四制香附調(diào)經(jīng)止痛效應(yīng)，切入江西地方炮制品種，有利于江西傳統(tǒng)炮制流派的傳承與發(fā)展。

關(guān)鍵詞：建昌幫;四制香附;調(diào)經(jīng)止痛

中圖分類號：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）09-0073-03

作為雙子葉植物莎草科植物莎草（Cyperus rotundus L.）的干燥根莖，香附又名雷公頭、香附子、雀頭香，主產(chǎn)于我國河南、浙江、山東、湖南等地?，F(xiàn)代藥理研究表明，香附內(nèi)含綠葉萜烯酮、考布松、香附醇、香附子烯、檸檬烯、果糖及葡萄糖等成分，具有抗菌、鎮(zhèn)痛和抑制子宮收縮的作用，有“氣病之總司，女科之主帥”之美稱[1]，為婦科調(diào)經(jīng)止痛的要藥?，F(xiàn)代常用香附治療痛經(jīng)及月經(jīng)不調(diào)、胃腸功能紊亂癥、胃痙攣疼痛及胃炎等[2]。痛經(jīng)是婦科常見病，病因復(fù)雜，易反復(fù)，其高發(fā)病率直接影響了女性的健康、工作和生活質(zhì)量，因此，人們對治療痛經(jīng)藥物的關(guān)注度越來越高。本研究采用小鼠在體痛經(jīng)模型、縮宮素所致大鼠離體子宮收縮模型和大鼠血液流變學(xué)影響三種方法結(jié)合使用評價江西建昌幫四制香附調(diào)經(jīng)止痛效應(yīng)，為其開發(fā)研究提供參考。

1 儀器與試劑

香附飲片（購于江西匯仁藥業(yè)有限公司），BT25S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），縮宮素注射液（安徽豐原藥業(yè)股份有限公司），布洛芬混懸液（揚州市三藥制藥有限公司），己烯雌酚，生理鹽水乙醇，石油醚，乙酸乙酯，水飽和正丁醇，雙蒸水，所用試劑均為分析純

2 方法與結(jié)果

2.1 有效部位提取 采用系統(tǒng)溶劑提取法進(jìn)行提取。將95%乙醇加入香附粗粉中回流3次，2h/次，回收得乙醇浸膏，再加水混懸，萃取液依次為石油醚、乙酸乙酯、水飽及正丁醇，再回收溶劑，作為石油醚、乙酸乙酯及正丁醇部位;將水加至藥渣中煎煮3次，過濾和濃縮得水煎液，混合水層，濃縮至浸膏作為水提部位。另在圓底燒瓶加入香附飲片和適量水，以水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油部位。再以收率比例取適量乙醇浸膏、水煎液、揮發(fā)油混合，作為香附藥材對照液。

2.2 有效成分藥理效應(yīng)研究

2.2.1 在體模型 取240只KM小鼠，體重18～22 g，雄性小鼠24只，雌性小鼠216只。陰性對照組為雄性小鼠。將216只雌性小鼠隨機分為空白組、模型組（布洛芬混懸液）、陽性對照組及各供試組，每天灌胃小鼠己烯雌酚10 mg/kg，空白組灌胃20 mL/kg生理鹽水，連續(xù)一周，各組動物禁食不禁水1d，第8 d灌胃給藥1次，提取物20 mL/kg（約合生藥量為7.5 g/kg），給藥30 min后腹腔注射10 u/kg縮宮素，觀察小鼠在注入后30 min內(nèi)的扭體次數(shù)（見表1）。同時計算平均抑制率。

平均抑制率（%）= （對照組平均扭體數(shù)-給藥組平均扭體數(shù)）/ 對照組平均扭體數(shù)×100%

表1 香附不同提取部位對小鼠在體痛經(jīng)模型的影響

實驗結(jié)果表明，相比于空白組，模型組小鼠扭體次數(shù)增加，證實造模成功。在同樣藥量下，石油醚部位平均抑制率67.25%，明顯高于其它提取部位，為其治療痛經(jīng)的主要有效部位。乙酸乙酯部位和揮發(fā)油部位有減少小鼠扭體次數(shù)的趨勢。

2.2.2 離體模型[3] 取KM未孕雌性大鼠，實驗前灌胃10 mg/kg·d己烯雌酚，連續(xù)4d，在第5d取出大鼠子宮置于LokeS液（NaCl 9.2 g，Glucose 1.0 g，CaCl2 0.24 g，KCl 0.42 g，NaHCO3 0.15 g溶于1000 mL重蒸餾水）中清洗，從子宮頸端剪開，浴槽內(nèi)固定器底部小鉤上固定子宮頸端，張力換能器上連接卵巢端。置于恒溫浴槽中，內(nèi)含15 mL LokeS液，通入5% CO2+95% O2混合氣體，溫度為（37 ± 0.1）℃，pH =7.3。加0.3 g的負(fù)荷以調(diào)節(jié)螺母，平衡40 min，每10 min換1次營養(yǎng)液，0.05 u縮宮素在子宮收縮頻率平穩(wěn)后加入，作用15 min后再依次加入對照組、各供試組15 mg，其中對照組給藥3%吐溫-80 15 μL，記錄給藥后子宮張力，觀察藥物對縮宮素導(dǎo)致子宮痙攣性收縮的對抗作用，記錄時間20 min，以營養(yǎng)液沖洗3次后觀察下一次實驗結(jié)果。記錄給藥前后子宮肌肉張力，抑制的百分率采用Chart4.0.1軟件進(jìn)行計算，以SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理，給藥組均有一定程度抑制，且石油醚部位抑制作用最強。

2.2.3 血液流變學(xué)[4] 取健康雌性大鼠170只，隨機分為17組，即陰性對照（等容生理鹽水）、月月舒、各供試組。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)14 d。末次給藥后30 min，采用20%烏拉坦麻醉大鼠，經(jīng)腹主動脈取血4-5 mL，并快速加入混有肝素的抗凝管內(nèi)，混勻后對血液流變學(xué)指標(biāo)（全血黏度高切、全血黏度低切、全血還原黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)）進(jìn)行測定。結(jié)果表明，模型組全血高、低切黏度顯著增加，給藥后全血黏度均有一定程度的降低，其中，石油醚部位改善作用最強。

2.3 有效成分的分離與鑒定 取石油醚浸膏適量，以柱層析用硅膠拌樣裝柱，以石油醚-丙酮梯度洗脫分離。分離得到4個化合物。經(jīng)NMR檢測鑒定其分別為豆甾醇（stigmasterol）、胡蘿卜苷（daucosterol）、大黃素甲醚（physcion）、十六烷酸（hexadecanoic acid）。

3 討論

痛經(jīng)屬于一種常見的婦科癥狀，可分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng)，其中原發(fā)性痛經(jīng)是指生殖器官無器質(zhì)性病變者，其發(fā)生與月經(jīng)期子宮內(nèi)膜前列腺素（PG）含量的升高明顯相關(guān)，繼發(fā)性痛經(jīng)則是指由盆腔器質(zhì)性疾病所引起的痛經(jīng)。主要證型包括氣血兩虛、腎氣虧損、濕（痰）熱瘀阻、癖熱互結(jié)、寒凝血瘀及氣滯血瘀等，常見治療藥物以活血化瘀、補虛等中藥、甲芬那酸、氟芬那酸、布洛芬等前列腺素合成酶抑制劑及避孕藥等為主。

作為一種常用中藥，香附主要含有揮發(fā)油類成分，并含有黃酮類糖類、三萜類等其它化學(xué)成分。其有著廣泛的生物學(xué)活性，能夠治療多種疾病，尤其在婦科疾病中有著廣泛的應(yīng)用。因此，繼續(xù)深入研究香附的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，開發(fā)臨床療效確切、毒副作用小的新藥很有意義。

中醫(yī)理論認(rèn)為，香附微甘、微苦、辛、平，歸肝、脾、三焦經(jīng)，具有調(diào)經(jīng)止痛、理氣寬中、疏肝解郁等作用。a-香附酮是香附的主要成分之一，具有抑制未孕大鼠離體子宮肌自發(fā)性收縮，同時抑制由縮宮素引起的離體子宮肌的收縮，對縮宮素所致的小鼠子宮激烈收縮進(jìn)行抑制，且作用強度呈劑量依賴性。本研究證實了香附鎮(zhèn)痛作用顯著，可在減輕小鼠痛經(jīng)疼痛癥狀的同時緩解縮宮素所致的小鼠子宮收縮。結(jié)果得到在同樣藥量下，石油醚部位平均抑制率67.25%，明顯高于其它提取部位，證實了治療痛經(jīng)的主要有效部位為石油醚部位。另外，模型組全血高、低切黏度顯著增加，給藥后全血黏度均有一定程度的降低，其中，石油醚部位改善作用最強。表明香附具有一定的改善血流動力學(xué)指標(biāo)作用，可有效改善血流，發(fā)揮活血化淤作用。同時，本研究采用NMR對其有效成分進(jìn)行了測定，分離出了4中化合物分別為豆甾醇、胡蘿卜苷、大黃素甲

醚和十六烷酸。證實了以上成分是香附發(fā)揮調(diào)經(jīng)止痛的主要組成。

本研究首次采用在體模型、離體模型和血液流變學(xué)指標(biāo)三種方法同時評價建昌幫四制香附調(diào)經(jīng)止痛效應(yīng);切入江西地方炮制品種，有利于江西傳統(tǒng)炮制流派的傳承與發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

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[4]薛建欣，嚴(yán)永清，蔣瑩.黃芪、歸尾、香附、川芎、赤芍等配伍對“血瘀”大鼠血液流變學(xué)的影響[J].中國中藥雜志，1994，19（2）：108-128.

（收稿日期：2018-05-31）