王靜，賀英，王萍，武欣

(1河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院,河北張家口，075000；2河北北方學(xué)院病理教研室)

卵巢癌是婦女常見的致死性惡性腫瘤之一[1]，大多數(shù)患者就診時(shí)已為晚期，臨床治療和預(yù)后均不理想。早期診斷和早期治療是卵巢癌最有效的治療方法。泛素1屬于泛素樣蛋白一族，在調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解中起著重要作用。在真核生物中，泛素1連接蛋白酶體和泛素化蛋白質(zhì)以刺激泛素化蛋白質(zhì)降解，促進(jìn)錯(cuò)誤折疊的自噬調(diào)節(jié)[2]。泛素1功能的失活可誘導(dǎo)人類多種神經(jīng)退行性疾病的病理過程，例如阿爾茨海默病和亨廷頓病等[3,4]。泛素1與鼻咽癌、非小細(xì)胞肺癌和胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5～7]，但泛素1在卵巢癌組織中的表達(dá)及作用尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究觀察了卵巢癌組織中泛素1的表達(dá)變化，分析其表達(dá)水平與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系及與卵巢癌預(yù)后的相關(guān)性，為卵巢癌的診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)提供分子生物學(xué)標(biāo)記物。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2012年1月～2015年1月收治的卵巢癌患者80例，均接受手術(shù)治療(術(shù)前未接受其他治療)，術(shù)中留取卵巢癌組織(自癌灶中心處獲取)和相應(yīng)癌旁正常組織。80例患者術(shù)后定期復(fù)查、電話隨訪，末次隨訪時(shí)間為2017年12月31日，中位隨訪時(shí)間為25個(gè)月;隨訪期間24例生存，56例死亡。

1.2 受檢組織中泛素1的檢測(cè) 采用免疫組化法。鼠抗UBQLN1單克隆抗體(編號(hào)：128011)購(gòu)于美國(guó)Abcam公司，免疫組化試劑盒、DAB顯色劑購(gòu)于上海Gene Tech公司。受檢組織用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，染色，切片進(jìn)行烘烤，乙醇脫水，內(nèi)源性過氧化物酶滅活，高溫高壓水化修復(fù)，PBS沖洗，先后加入一抗(1∶100)50 μL、二抗50 μL。DAB顯色，輕度復(fù)染，沖洗，梯度乙醇脫水，松節(jié)油透明和樹膠行封片處理,光鏡下觀察。PBS代替一抗作陰性對(duì)照。泛素1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，少量表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕黃色或褐色顆粒。計(jì)算泛素1陽性染色細(xì)胞百分比，陽性細(xì)胞1%～10%計(jì)1分、11%～50%計(jì)2分、51%～80%計(jì)3分、81%～100%計(jì)4分；細(xì)胞無著色計(jì)0分、淺黃色計(jì)1分、黃色計(jì)2分、深黃色計(jì)3分；上述兩分值相乘，乘積0為-、1～4為+、5～8為++、9～12為+++，+、++、+++定為陽性[5]。

1.3 卵巢癌組織中泛素1表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析 收集80例卵巢癌患者臨床病理資料，包括患者年齡、是否絕經(jīng)、腫瘤分化程度、腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清CA125、血清HE4、Ki-67，分析卵巢癌組織中泛素1表達(dá)與上述指標(biāo)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman秩相關(guān)分析法，通過Cox回歸模型分析卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 泛素1在卵巢癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)比較 泛素1在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)率為72.50%(58/80)，癌旁正常組織為17.50%(14/80)，兩者相比，P<0.01。卵巢癌組織和癌旁正常組織中泛素1的表達(dá)情況見圖1。

注：a為癌旁正常組織中泛素1的表達(dá)情況； b 為卵巢癌組織中中泛素1的表達(dá)情況。

圖1卵巢癌組織和癌旁正常組織中泛素1的表達(dá)(×200)

2.2 卵巢癌組織中泛素1表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 卵巢癌組織中泛素1的陽性表達(dá)與卵巢癌患者腫瘤分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CA125(+)、HE4(+)和Ki-67(+)有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤大小、是否絕經(jīng)等無關(guān)(P均>0.05)，見表1。卵巢癌組織泛素1陽性表達(dá)的58例中Ki-67表達(dá)陽性者44例、陰性14例，泛素1陰性表達(dá)的22例中Ki-67陽性8例、陰性14例，兩者表達(dá)呈正相關(guān)，r=0.259，P<0.01。

2.3 卵巢癌組織泛素1表達(dá)與卵巢癌患者生存預(yù)后的關(guān)系 卵巢癌組織泛素1陽性表達(dá)的58例卵巢癌患者，12例生存、46例死亡，中位生存時(shí)間為22個(gè)月；泛素1陰性表達(dá)的22例患者中，10例生存、12例死亡，中位生存時(shí)間為30個(gè)月；兩者相比，P<0.05。

泛素1表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、FIGO分期、CA125(+)、HE4(+)、Ki-67表達(dá)均是影響卵巢癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P均<0.05)。

3 討論

泛素1是一種核小體表面蛋白，屬于高度保守的泛素樣蛋白家族中的重要成員，位于人9q22染色體，內(nèi)含589個(gè)氨基酸序列，在人體組織中廣泛表達(dá)。泛素1由11個(gè)外顯子、3個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成;其中N末端系泛素樣區(qū)域(介導(dǎo)與蛋白酶體的相互作用)，C末端系泛素相關(guān)區(qū)域,中間的STI伴侶樣區(qū)域負(fù)責(zé)傳遞功能，三者共同將多泛素化靶目標(biāo)提供給特定的蛋白，促進(jìn)蛋白酶體降解[8,9]。泛素1能通過促進(jìn)錯(cuò)誤折疊的自噬調(diào)節(jié)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和受體轉(zhuǎn)運(yùn)等多種調(diào)控機(jī)制影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲等生物學(xué)行為[10～12]。Bao等[13]采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)179例胃癌及癌旁正常組織中的泛素1，發(fā)現(xiàn)其在胃癌組織中的表達(dá)上調(diào)，且泛素1高表達(dá)與胃癌組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，泛素1高表達(dá)的胃癌患者預(yù)后較差；Wang等[14]采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)125例浸潤(rùn)性乳腺癌樣本中的泛素1，發(fā)現(xiàn)其在癌組織中呈過表達(dá)，且其表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和血管侵犯相關(guān)，泛素1陽性患者5年無病生存期和總生存期遠(yuǎn)低于泛素1陰性患者，同時(shí)首次證實(shí)了泛素1是浸潤(rùn)性乳腺癌患者總生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。

表1 卵巢癌組織中泛素1表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，泛素1在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，且泛素1的陽性表達(dá)與卵巢癌分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清CA125(+)和HE4(+)有關(guān)，且泛素1與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)，二者在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能具有協(xié)同作用。Shah等[15]通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)泛素1基因沉默能促進(jìn)肺癌細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)，泛素1基因的缺失導(dǎo)致包括E-鈣黏蛋白和Claudin1在內(nèi)的上皮標(biāo)記物表達(dá)的降低，而包括波形蛋白、Snail和ZEB1在內(nèi)的間充質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)升高，因而考慮泛素1能誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重組和上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)變，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[16]。

本研究結(jié)果顯示，泛素1陽性表達(dá)的卵巢癌患者生存期明顯短于陰性表達(dá)的患者，泛素1陽性表達(dá)提示預(yù)后不良，Cox回歸模型分析顯示泛素1陽性表達(dá)為卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。

綜上所述，泛素1在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)率較高，與卵巢癌的臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系密切，其在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用，臨床上可將其作為卵巢癌診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)的潛在生物學(xué)指標(biāo)。進(jìn)一步對(duì)泛素1致癌機(jī)制的深入研究將為卵巢癌的靶向治療提供理論基礎(chǔ)。