楊勇莉，王曉武，韋靜，邵娜娜

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院，西寧810001)

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，2011年有學(xué)者[1]報(bào)道全球每年有超過200,000例女性患宮頸癌，且鱗狀細(xì)胞癌是宮頸癌的主要類型。宮頸鱗狀細(xì)胞癌的早期發(fā)現(xiàn)及根治能夠有效防止復(fù)發(fā)[2]，但宮頸癌患者的術(shù)后5年總生存率低于50%[3]，預(yù)后較差。研究[4]表明，非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)能夠調(diào)控細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移等，參與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。微小RNA(miRNA)和長鏈非編碼RNA(lncRNA)都屬于ncRNA[5]。miRNA是一種能夠通過結(jié)合其靶基因轉(zhuǎn)錄本的互補(bǔ)位點(diǎn)抑制翻譯從而調(diào)控基因表達(dá)的短小RNA[6]。miRNA在多種類型的癌癥，如膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌中調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡、分化[7～10]。宮頸癌中的miRNA可分為致癌因子或抗癌因子[11]。目前有關(guān)微小RNA-590-3p(miR-590-3p)在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義的相關(guān)報(bào)道較少。研究[12]表明，lncRNA能夠與miRNA相互調(diào)節(jié)共同參與腫瘤的進(jìn)展，并且lncRNA和miRNA之間的調(diào)節(jié)關(guān)系已成為目前的研究熱點(diǎn)。但是有關(guān)lncRNA 與miRNA在宮頸癌中表達(dá)的相關(guān)性及臨床意義研究報(bào)道較少。本研究觀察了宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11和miR-590-3p的表達(dá)變化，分析兩者表達(dá)的相關(guān)性，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年8月～2013年7月在青海大學(xué)附屬醫(yī)院接受子宮切除手術(shù)治療的宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者69例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未接受化療、放療、內(nèi)分泌治療等抗腫瘤治療；②術(shù)后經(jīng)病理檢查證實(shí)為宮頸鱗狀細(xì)胞癌；③具備完整的病歷和隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并乳腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤；②合并嚴(yán)重肝、腎等重要器官功能不全。手術(shù)過程中切取癌組織及癌旁正常組織(距離癌組織>3 cm)。69例患者的年齡為29～68歲，其中<50歲者34例、≥50歲者35例；根據(jù)國際抗癌協(xié)會(huì)的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期+Ⅱ期46例、Ⅲ期+Ⅳ期23例；腫瘤分化程度為低分化27例、中分化22例、高分化20例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例；婦科人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染者43例，無HPV感染者26例；癌組織直徑<4 cm者30例、≥4 cm者39例。所有患者隨訪資料完整，以患者術(shù)后出院為隨訪觀察起始時(shí)間，隨訪方式包括電話、來院復(fù)診。末次隨訪時(shí)間為2017年8月，隨訪時(shí)間5～60個(gè)月。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象在知情同意書上簽字。

1.2 儀器與試劑 D-37520型低溫離心機(jī)和NanoDrop2000紫外微量光度計(jì)均購自Thermo公司,GT9612型普通梯度PCR儀購自Biotek公司,MX3005P實(shí)時(shí)熒光定量梯度 PCR 儀購自美國 Aglient公司。TRIzol購自Life公司，DEPC購自Sigma公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green Master Mix試劑盒均購自諾唯贊公司。

1.3 受檢組織中l(wèi)ncRNA HCG11、miR-590-3p的檢測(cè)方法 分別取適量宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織，加入TRIzol提取總RNA，用分光光度計(jì)測(cè)量RNA的濃度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作，將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)SYBR Green Master Mix試劑盒說明書上的反應(yīng)體系及反應(yīng)程序，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)。lncRNA HCG11、miR-590-3p的引物引物序列用Primer Premier5.0設(shè)計(jì)，以GAPDH基因作為內(nèi)參。lncRNA HCG11正、反向引物分別為5′-GCTCTATGCCATCCTGCTT-3′、5′-TCCCATCTCCATCAACCC-3′；miR-590-3p正、反向引物分別為5′-TAATTTTATGTATAAGCTAGT-3′、5′-GCTGAGGTGCTGTGGT-3′；GAPDH正、反向引物分別為5′-TGGATTTGGACGCATTGGTC-3′、5′-TTTGCACTGGTACGTGTTGAT-3′。用2-ΔΔCt表示受檢組織中l(wèi)ncRNA HCG11、miR-590-3p的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織中l(wèi)ncRNA HCG11和miR-590-3p的表達(dá)量比較 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織中l(wèi)ncRNA HCG11的相對(duì)表達(dá)量分別為0.41±0.33、1.04±0.12，兩者相比，P<0.05。宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織中miR-590-3p的相對(duì)表達(dá)量分別為14.6±5.94、1.06±0.23，兩者相比，P<0.05。宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的lncRNA HCG11與miR-590-3p的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.597,P<0.01)。

2.2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11、miR-590-3p表達(dá)量與宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11和miR-590-3p的表達(dá)量與腫瘤組織大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、有無婦科HPV感染、分化程度無關(guān)(P均>0.05)，見表1。

表1 癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11、miR-590-3p表達(dá)量與宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11、miR-590-3p表達(dá)量與宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系 以宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11、miR-590-3p相對(duì)表達(dá)量的平均值為界，將宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者分為lncRNA HCG11高表達(dá)組(32例)與lncRNA HCG11低表達(dá)組(37例)、miR-590-3p高表達(dá)組(36例)與miR-590-3p低表達(dá)組(33例)。lncRNA HCG11高表達(dá)組患者5年總生存率為87.5%(28/32)、低表達(dá)組為59.46%(22/37)，兩者相比，P<0.01。miR-590-3p高表達(dá)組患者5年總生存率為58.33%(21/36)、低表達(dá)組為81.82%(27/33)，兩者相比，P<0.01。

3 討論

miRNAs在各種人類癌癥的腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用[13, 14]。miRNA能夠結(jié)合下游mRNA，在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)mRNA的表達(dá)，使mRNA轉(zhuǎn)錄或降解[15]。miRNA包括癌基因和抑癌基因，參與細(xì)胞的增殖、凋亡、分化等過程[16]。miRNA參與多種癌癥的進(jìn)展過程，可以作為治療癌癥的潛在靶分子。miR-590-3p是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA，能夠通過調(diào)節(jié)PTEN基因促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖[17]。Sun等[18]研究發(fā)現(xiàn)，miR-590-3p能促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。miR-590-3p在胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，miR-590-3p可能是維持胰腺癌干細(xì)胞特性的關(guān)鍵基因[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-590-3p在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與癌旁組織相比上調(diào)，miR-590-3p在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)量與腫瘤組織大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，miR-590-3p低表達(dá)組宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者術(shù)后5年總生存率較高，可以作為預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的靶分子。

研究[20]表明，lncRNA的異常表達(dá)均與癌癥發(fā)生相關(guān)，在癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及術(shù)后預(yù)后中發(fā)揮關(guān)鍵作用。通路富集分析顯示lncRNA HCG11主要參與MAPK信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、Jak-STAT信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路和GnRH信號(hào)通路[21]，在調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞黏附、發(fā)育和蛋白質(zhì)氨基酸磷酸化中起關(guān)鍵作用。有研究[22]報(bào)道lncRNA HCG11在多種腫瘤中表達(dá)失調(diào)并且能夠作為判斷某些腫瘤預(yù)后的潛在指標(biāo)。Quagliata等[23]的研究發(fā)現(xiàn)，敲降lncRNA HCG11不僅抑制肝癌細(xì)胞的生長，而且抑制了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，驗(yàn)證了lncRNA HCG11在肝癌進(jìn)展中的關(guān)鍵作用。有研究[24]發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中l(wèi)ncRNA HCG11表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)lncRNA HCG11能夠調(diào)節(jié)線粒體凋亡，進(jìn)而促進(jìn)肝癌的發(fā)生。但Zhang等[21]的研究表明，在前列腺癌中l(wèi)ncRNA HCG11表達(dá)下調(diào)并且與患者預(yù)后不良有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)lncRNA HCG11在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)顯著低于癌旁組織，lncRNA HCG11在宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者中的表達(dá)量與腫瘤組織大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期相關(guān)，lncRNA HCG11高表達(dá)組子宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者術(shù)后5年總生存率較高，說明lncRNA HCG11表達(dá)量與患者預(yù)后呈正相關(guān)，可以作為宮頸鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后判斷的靶分子。本研究還發(fā)現(xiàn)，lncRNA HCG11的表達(dá)量與miR-590-3p的呈負(fù)相關(guān)，即lncRNA HCG11高表達(dá)的宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，miR-590-3p表達(dá)量明顯下調(diào)。由此推測(cè)，lncRNA通過海綿樣吸附作用，與miRNA發(fā)生競爭性結(jié)合，抑制miRNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，即lncRNA HCG11可能通過在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控miR-590-3p的表達(dá)發(fā)揮抑癌作用[18]。

綜上所述，在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，lncRNA HCG11表達(dá)下調(diào)，而miR-590-3p表達(dá)上調(diào)；宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的lncRNA HCG11低表達(dá)和miR-590-3p高表達(dá)預(yù)示腫瘤組織較大且處于較高臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能性較大、患者預(yù)后較差。推測(cè)lncRNA HCG11與miR-590-3p有可能成為宮頸鱗狀細(xì)胞癌治療的靶標(biāo)分子。