陳朋朋，吳澤宇，許 坤，惠愛玲，張文成

（1. 合肥工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥 230009；2. 安徽德信佳生物醫(yī)藥有限公司，安徽阜陽 236000)）

0 引言

東莨菪堿（Scopolamine） 是一種莨菪烷型生物堿，具有多種生物活性，如散瞳、解痙、抗膽堿、麻醉、鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜等，逐漸受到人們的關(guān)注[1]。在臨床上，東莨菪堿的藥效主要基于其抗毒蕈堿作用。作為毒蕈堿阻滯劑，東莨菪堿競爭毒蕈堿受體，打斷副交感神經(jīng)的支配[2-5]。此外，與莨菪堿、阿托品（莨菪堿的外消旋形式）相比，東莨菪堿具有不良反應(yīng)少、療效強的特點。據(jù)初步統(tǒng)計，東莨菪堿的市場需求量是莨菪堿和阿托品總量的10倍[6-8]。因此，東莨菪堿的制備已經(jīng)成為當(dāng)前的研究熱點。

東莨菪堿易消旋、不易保存，所以臨床上主要用其氫溴酸鹽。研究將洋金花提取物溶解后，通過加酸成鹽和冷凍結(jié)晶的方法，制得其臨床用藥氫溴酸東莨菪堿，并采用差示掃描量熱儀、自動旋光儀等進行確證。

1 試驗方法

洋金花提取物（東莨菪堿含量為83%），自制；氫溴酸東莨菪堿對照品（純度99%），購于合肥馭成儀器有限公司（代理）；甲醇、無水乙醇、氫溴酸、乙酸銨、三乙胺等，均購于國藥化學(xué)試劑有限公司。

1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫公司產(chǎn)品；JA2003型電子天平，美國希特公司產(chǎn)品；SC2201型超聲波處理器，上海小巖工貿(mào)發(fā)展有限公司產(chǎn)品；Q200型差示掃描量熱儀，美國TA公司產(chǎn)品；WZZ-2SS型自動旋光儀，上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

液相條件：Eclipse Plus C18型色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫35 ℃；檢測波長215 nm；流速1 mL/min；進樣量20 μL；流動相：甲醇-0.02 mol/L乙酸鈉溶液（加入0.01%三乙胺） （體積比= 40∶60）[9]。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確稱取20 mg氫溴酸東莨菪堿放入5 mL的容量瓶中，用流動相定容。然后將定容后的溶液分別稀釋成質(zhì)量濃度為0.25，0.50，1.00，2.00，4.00 mg/mL的溶液。用0.45 μm的微孔濾膜處理后，分別取20 μL進樣測定，以峰面積（Y） 為縱坐標(biāo)、氫溴酸東莨菪堿的質(zhì)量濃度（X） 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

精確稱取125 mg洋金花提取物，加入500 μL無水乙醇，超聲溶解；然后在混合溶液中加入40%的氫溴酸150 μL，放置在攪拌器上攪拌10 min，使其成鹽；平行3次試驗。

氫溴酸-東莨菪堿溶液放置在-20 ℃冰箱中過夜后，使用布氏漏斗抽濾，去除溶液；用2 mL冰的無水乙醇洗滌結(jié)晶2次，去除晶體表面殘留的雜質(zhì)；然后將晶體置于真空干燥箱中，于40 ℃條件下干燥12 h，去除晶體表面殘留的溶劑和水分；平行3次試驗。

稱取2 mg干燥后的晶體，放入5 mL的容量瓶，用流動相定容；精密吸取20 μL樣品溶液，注入液相色譜儀進行檢測；樣品檢測前，均經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾；根據(jù)液相圖的峰面積及標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算純度。

根據(jù)純度及干燥后的晶體質(zhì)量，按照下面公式（1） 計算回收率：

式中：m結(jié)晶——干燥后的晶體質(zhì)量，mg；

p純度——樣品的純度，%；

m低濃度——洋金花提取物的質(zhì)量，mg；

1.445 ——氫溴酸東莨菪堿與東莨菪堿的摩爾質(zhì)量比；

0.83 ——洋金花提取物中東莨菪堿的含量。

利用Q200 DSC儀對晶體進行確證，小心稱取mg級樣品，精確稱定，記錄質(zhì)量；將晶體移入坩堝中，壓片；將空白坩堝和裝有晶體的坩堝置于Q200 型DSC儀中，氣氛為氮氣，升溫速度10 ℃/min，升溫范圍0～250 ℃，測定DSC差示掃描量熱曲線。

利用WZZ-2SS型自動旋光儀對標(biāo)準(zhǔn)品、得到的晶體進行旋光度測定；稱取適量晶體，用去離子水溶解，靜置15 min后，將溶液移入10 dm測定管中；在旋光儀中測定旋光度，每個樣品重復(fù)3次，取平均值后代入公式（2） 計算旋光度。公式（2） 如下：

式中：[α]——比旋度；

α——旋光儀測定的讀數(shù)；

T——測定時溫度，℃；

D——光源鈉燈的波長（589 nm）；

L——測定管的長度，dm；

C——100 mL溶液中含有被測物質(zhì)的質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程Y=12 863X+148.33（R2=0.999 5），線性范圍為0.25～4.0 mg/mL。根據(jù)晶體樣品液相檢測結(jié)果，計算得到晶體的純度為99.40%。晶體洗滌干凈后，放入干燥箱中充分干燥。根據(jù)回收率計算公式，計算回收率為73.24%。

氫溴酸東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖1，氫溴酸東莨菪堿樣品的HPLC圖見圖2。

圖1 氫溴酸東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 氫溴酸東莨菪堿樣品的HPLC圖

氫溴酸東莨菪堿熱分析數(shù)據(jù)見表1，氫溴酸東莨菪堿的DSC圖見圖3。

由表1可以看出，晶體的熔點為198.54±0.40 ℃，熔程為29.77±0.98 ℃，溶化焓為58.54±2.40 J/g。藥典上記錄其熔點在195～199 ℃，所以制備得到的氫溴酸東莨菪堿符合藥典上對其熔點的規(guī)定。并且從圖3可以看出，只有在熔點附近出現(xiàn)1個吸熱峰，在東莨菪堿熔點（59 ℃） 附近未出現(xiàn)吸熱峰，說明了無東莨菪堿的存在，表明晶體中無未成鹽的東莨菪堿。同時也說明了晶體晶型單一、無雜晶存在。

表1 氫溴酸東莨菪堿熱分析數(shù)據(jù)

圖3 氫溴酸東莨菪堿的DSC圖

經(jīng)檢測，氫溴酸東莨菪堿晶體的比旋光度為-24.9°±0.45，氫溴酸東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品的比旋光度為-24.5°±0.59。根據(jù)藥典記載，氫溴酸東莨菪堿的旋光度為-24°～-27°，說明得到的氫溴酸東莨菪堿符合要求。

3 結(jié)論

以東莨菪堿含量為83%的洋金花提取物為原料，利用加酸成鹽和冷凍結(jié)晶技術(shù)，對東莨菪堿進行純化，制得其臨床用藥氫溴酸東莨菪堿。制得的晶體經(jīng)液相色譜檢測其純度為99.40%，滿足臨床上使用的純度要求。鑒于東莨菪堿易消旋，轉(zhuǎn)化為氫溴酸鹽提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性。差示掃描量熱儀和自動旋光儀測量結(jié)果表明，制得的氫溴酸東莨菪堿晶體符合藥典中關(guān)于熔點和旋光度的標(biāo)準(zhǔn)。