金衍健 應忠真 朱劍 李子孟 王范盛

(浙江省海洋水產(chǎn)研究所， 農(nóng)業(yè)部重點漁場漁業(yè)資源科學觀測實驗站，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點實驗室， 浙江舟山 316100)

三唑磷(triazophos)是一種廣譜殺蟲、殺螨劑，具有較強的觸殺作用，對魚類、甲殼類和軟體動物具有高毒性[1，2]。近年來養(yǎng)殖戶為提高經(jīng)濟效益，保護養(yǎng)殖產(chǎn)品不受敵害生物的侵害，使用其清除敵害生物，不僅容易導致水域生態(tài)環(huán)境污染并對水生生物造成負面影響，而且污染水體排入開放水域后，對其他水體中的養(yǎng)殖生物產(chǎn)生毒殺作用，引起污染事故，產(chǎn)生經(jīng)濟糾紛[3]；然而由于三唑磷在環(huán)境中高毒且易降解，引起魚類等經(jīng)濟生物死亡后，一般從取樣到實驗室需經(jīng)過相對較長的時間，對證據(jù)的保留和檢測比較困難。一般目前針對污染事故魚類樣品，前處理基本都是取其肌肉檢測，存在很大程度上的假陰性的可能，而且目前對三唑磷在急性毒性死亡后魚體不同組織內(nèi)殘留并沒有相應的報道。本次實驗通過人工染毒，造成鯔魚三唑磷急性中毒死亡，取不同組織的樣品，研究其不同組織內(nèi)三唑磷殘留含量，為以后由三唑磷引起漁業(yè)污染事故的樣品檢測提供技術(shù)支持。

1 實驗材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀(安捷倫7890B，配NPD測器，美國)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，固相萃取裝置，氮吹儀，渦旋振蕩器( IKA vortex genius3型，德國)，堿性氧化鋁固相萃取柱(2.5g/6mL，CNW)，丙酮(色譜純)、二氯甲烷(色譜純)、正己烷(色譜純)。

1.2 色譜條件

色譜柱為HP-35(30m×0.25mm×0.25μm)；進樣口溫度260℃，柱流速為2.0mL/min，柱溫箱升溫程序條件如表1所示。

表1 柱溫箱升溫程序條件

1.3 樣品的來源

樣品來自舟山岱山海域，因三唑磷農(nóng)藥污染致海洋中鯔魚急性毒性死亡，魚樣分別取其腦、腸、肝臟、皮、鰓、血、性腺、胰臟和肌肉共9個部位，切碎勻漿，立刻取樣進行前處理。

1.4 樣品處理方法

取適量的樣品，置于50mL離心管內(nèi)，加入20mL乙酸乙酯渦旋振蕩提取2min，收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，重復提取一次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2mL正己烷洗脫，取上層正己烷過活化好的堿性氧化鋁柱(2.5g/6mL，CNW)，不收集流出有機相，重復加正己烷2mL洗脫旋轉(zhuǎn)蒸瓶。再用5mL二氯甲烷洗脫堿性氧化鋁柱，收集流出有機相于15mL離心管中，氮吹至干，加丙酮定容至1mL，供氣相色譜氮磷檢測器分析。

2 結(jié)果與討論

通過GC-NPD測得不同組織三唑磷含量特征的結(jié)果如表2所示。

表2 不同魚體組織中三唑磷含量

結(jié)果測得數(shù)值在2.04～114.42μg/kg之間，腦中含量最高，肌肉中含量最低，總體趨勢分為三個階梯，腦>血、性腺>鰓、胰臟、肝臟、腸、皮和肌肉，腦的殘留量是鰓、胰臟、肝臟、腸、皮和肌肉等的13.8～56.0倍，是血、性腺的1.45～2.07倍。

三唑磷為有機磷酸酯類化合物，其中毒機制主要是抑制乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性，使其失去水解乙酰膽堿(ACh)的能力，造成膽堿能神經(jīng)末梢釋放的ACh大量蓄積，興奮ACh的毒蕈堿型受體(M受體)和煙堿型受體(N受體)，產(chǎn)生毒蕈堿樣和煙堿樣作用及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀[4-6]。

有機磷農(nóng)藥毒性主要是對乙酰膽堿酯酶的抑制，本次實驗測得腦、血和性腺中三唑磷含量比較高，可能原因是三唑磷通過鰓的快速吸收[7，8]，進入魚體內(nèi)，由于神經(jīng)中樞和血液中含有大量乙酰膽堿酶，快速與其結(jié)合，引起乙酰膽堿蓄積，使膽堿能神經(jīng)持續(xù)沖動后死亡。本次研究發(fā)現(xiàn)性腺內(nèi)三唑磷濃度相對較高，可能由于性腺脂類物質(zhì)含量很高，而且三唑磷是脂溶性很強的物質(zhì)，在乙酸乙酯中溶解度可達到500000mg/L，所以三唑磷可能通過血液快速地積蓄在性腺中。

由于我們檢測魚體中藥殘傳統(tǒng)方法通常是取其肌肉檢測，但通過本文對因三唑磷急性毒性死亡鯔魚的研究發(fā)現(xiàn)三唑磷積蓄含量最高的組織主要為腦、血和性腺，其肌肉和魚皮中含量最低。從實驗結(jié)論可以得出，本研究對檢測急性毒性死亡的魚體中三唑磷含量具有指導意義，對其他有機磷引起的污染事故取樣具有參考價值。