朱正華 王超芬 羅敏

【摘 要】 目的 ：建立反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測定消癥散中芍藥苷的含量。方法 ：采用ODS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈-0.1%磷酸（12∶88）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：230nm。結(jié)果 ：芍藥苷濃度在12.05～192.78μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率為98.95%（RSD為 1.32 %）。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)方法簡單、操作簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于消癥散中芍藥苷的含量測定。

【關(guān)鍵詞】 消癥散；芍藥苷；反相高效液相色譜法；含量測定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）14-0025-03

Abstract：Objective To estabLish a method for content determination of paeonifLorin in Xiaozhengsan by RP-HPLC.Method The determination was performed on ODS HYPERSIL C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）coLumn with mobiLe phase consisted of acetonitriLe-0.1% phosphonc acid（12∶88，V/V）at the fLow rate of 1.0 mL/min. The coLumn temperature was 30 ℃，and the detection waveLength was set at 230nm.ResuLts The Linear range of paeonifLorin were 12.5～192.78 μg（r=0.9997）with an average recovery of 98.95%（RSD=1.32%）. ConcLusions The method is simpLe，precise and quick， the resuLt is accurate.It can be used for the determination of paeonif Lorin in Xiaozhengsan.

Keywords：Xiaozhengsan；RP-HPLC；Paeonif Lorin；Content Determination

乳腺包塊的形成，主要與肝氣郁結(jié)、痰凝血瘀、沖任失調(diào)等諸多原因有關(guān)。消癥散是曲靖市中醫(yī)醫(yī)院研制的制劑，主要含有柴胡、當(dāng)歸、赤芍、昆布、浙貝母、茯苓、白術(shù)等藥物，具有調(diào)沖疏肝、清熱活血、軟堅(jiān)散結(jié)的功效，用于治療內(nèi)分泌失調(diào)引起的乳腺小葉增生及各種原因引起的乳房包塊。方中柴胡、茯苓、白術(shù)等可調(diào)理沖任，疏肝理氣，昆布能軟堅(jiān)散結(jié)，赤芍、當(dāng)歸活血化瘀。諸藥協(xié)同作用，可使體內(nèi)分泌機(jī)能得于調(diào)整，激素水平達(dá)到新的平衡狀態(tài)，從而起到良好的治療效果。消癥散現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以薄層色譜鑒別芍藥苷來控制處方中的赤芍[1-2]，未建立制劑中赤芍的含量測定方法。本研究參照文獻(xiàn)[3-8]，以芍藥苷為定量控制指標(biāo)，采用反向高效液相色譜法對(duì)芍藥苷進(jìn)行含量測定，為有效控制“消癥散”質(zhì)量提供了準(zhǔn)確可靠且簡便易行的方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 AgiLent 1200型高效液相色譜儀（包括G1311A系列四元泵，G1315D DAD檢測器，G1316A 柱溫箱，G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；一體式超純水儀（PURELAB FLex 3，英國ELGA公司）。

1.2 試劑 芍藥苷（批號(hào)：110736-201640，中國食品藥品檢定研究院），乙醇為分析純，磷酸為分析純，水為純化水。消癥散（批號(hào)：160905、161114、170202，曲靖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 ODS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶88）為流動(dòng)相；流速為1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：230nm；進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物，混勻，取約 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（頻率：45KHz，功率300W）30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品20.25mg，置50mL量瓶中，加70%的乙醇適量，振搖溶解后，加70%的乙醇稀釋至刻度，搖勻。即得芍藥苷質(zhì)量濃度為385.56μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按消癥散處方要求，分別稱取除赤芍以外的其他藥材，按照消癥散制備工藝，制備不含赤芍的陰性樣品，并按“2.2.1”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下芍藥苷對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加70%乙醇稀釋制成含芍藥苷分別為（單位：μg/mL）：192.78、96.39、48.20、24.10、12.05的系列對(duì)照品溶液。在“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計(jì)算線性回歸方程，得芍藥苷的回歸方程Y= 15.8948X+23.6027（r= 0.9997）。結(jié)果表明：芍藥苷濃度在12.05～192.78μg/mL 范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一芍藥苷對(duì)照品溶液（含芍藥苷96.39μg/mL）照“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值。結(jié)果表明精密度良好，其峰面積值的RSD為0.6%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次消癥散（批號(hào)160905）6份，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法處理，考察方法的重復(fù)性。記錄相應(yīng)的峰面積，計(jì)算結(jié)果。結(jié)果表明供試品中芍藥苷含量測定重復(fù)性良好，RSD為0.4%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液（批號(hào)160905），分別于0、2、4、8、12、24h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置24h質(zhì)量基本穩(wěn)定，芍藥苷含量的RSD為0.9%。

2.7 回收率試驗(yàn) 分別取已知含量的同一批消癥散（批號(hào)160905）約 1g，精密稱定，共6份，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液（濃度為385.56μg/mL）5mL，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，分別測定，計(jì)算回收率。平均回收率為 98.95 % ，RSD為1.3%。見表1。

2.8 專屬性試驗(yàn) 將陰性樣品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果色譜圖中在芍藥苷相應(yīng)出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

2.9 樣品含量測定 取不同批號(hào)的供試品3批按“2.2.1”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷的含量。見表2。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)先后試用了乙腈-0.1%磷酸，甲醇-2%醋酸溶液，乙腈-2%醋酸溶液，甲醇-0.5%醋酸溶液多個(gè)組合為流動(dòng)相測定樣品和對(duì)照品中芍藥苷的含量，含有醋酸的流動(dòng)相基線不平穩(wěn)，噪聲太大。乙腈-0.1%磷酸為流動(dòng)相時(shí)基線較平穩(wěn)，噪聲小，主成分峰形較好，并且樣品中的芍藥苷與其他成分能很好的分離。所以本實(shí)驗(yàn)最后采用了乙腈-0.1%磷酸（12∶88）為流動(dòng)相。

3.2 提取方法的選擇

3.2.1 提取方法的確定 實(shí)驗(yàn)參考了《中華人民共和國藥典》（一部）[2]白芍中芍藥苷的提取方法，結(jié)果顯示超聲提取效果良好，且提取方法簡單方便，加標(biāo)回收率高，故選用超聲提取。

3.2.2 超聲時(shí)間的確定 精密稱取樣品（批號(hào)160905）5份，每份約2g，置100mL量瓶中，加入70%乙醇適量，分別超聲（頻率：45kHz，功率：300W）處理10、20、30、40、50 min后測定芍藥苷含量，結(jié)果超聲30min后，芍藥苷含量基本不再改變，證明樣品超聲處理30min后，能將樣品中的芍藥苷提取完全，所以超聲（頻率：45kHz，功率：300W）時(shí)間確定為30min。

本實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于消癥散中芍藥苷的含量測定。

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（收稿日期：2018-05-16 編輯：程鵬飛）