馮穗芬

【摘 要】 目的： 建立益氣活血通絡(luò)顆粒中葛根素的含量測定方法。方法： 色譜柱：Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（25∶75）；檢測波長：250nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。結(jié)果：葛根素進(jìn)樣量在0.1210～1.2096μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999） ，平均加樣回收率為101.24%，RSD為1.34%。結(jié)論： 該法簡單方便，精密度高，準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 益氣活血通絡(luò)顆粒；葛根素；含量測定；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）05-0017-03

Abstract：Objective To establish a method for determination of puerarin in Yiqihuoxue granules by HPLC. Methods The samples were analyzed on a Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）column and the mobile phase consisted of methanol-water solution （25∶75） at a flow rate of 1.0mL·min-1， the detection wavelength was set at 250nm， the sample size was 10μL and the column temperature was 25℃. Results Puerarin showed a good linear relationship within the range of 0.1210～1.2096μg （r=0.9999） ，the average recovery was 10124%，and RSD was 1.34%.Conclusions The method is simple and convenient with high precision and accuracy，and can be used in the quality control of the preparation.

Keywords：Yiqihuoxue Granules； Puerarin； Content Determination； HPLC

益氣活血通絡(luò)顆粒是我院研制的純中藥制劑，由葛根、黃芪、桂枝、羌活、赤芍、炙甘草等十味中藥以水煎煮提取制備而成，具有舒筋活絡(luò)、解痙止痛的功效，臨床上用于治療頸椎病、肩周炎、肌筋膜炎等疾病。葛根為方中君藥，黃芪、桂枝為方中臣藥，現(xiàn)代藥理研究表明，葛根異黃酮是葛根中的主要有效成分，其中葛根素占主體[1]，桂枝具有明顯的鎮(zhèn)痛解痙作用[2]。本研究參照2015版《中國藥典》及文獻(xiàn)方法[3-6]，采用高效液相色譜法對制劑中的有效成分葛根素進(jìn)行含量測定研究，為控制制劑質(zhì)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 1200系列高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；XS205 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 材料 益氣活血通絡(luò)顆粒（規(guī)格： 每袋裝8g，批號(hào)： 20170401、20170506、20170615） 由醫(yī)院制劑室提供，葛根素（批號(hào)：110752-200912，中國藥品生物制品檢定所），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱： Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（25∶75）；檢測波長：250nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL，理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，葛根素與其他成分分離度符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含120.96μg的對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取細(xì)粉約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（ 250W，40kHz） 30min，取出，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 精密吸取不含葛根的陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn) 在2.1項(xiàng)下色譜條件下，分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖；葛根素保留時(shí)間為15.20min，理論塔板數(shù)為5660，主峰與雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，陰性對照在葛根素色譜峰位置處無峰干擾。如圖1所示。

2.4 線性關(guān)系 考察分別精密吸取1、2、4、6、8、10mL葛根素對照品母液至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖；得到峰面積（Y）與進(jìn)樣量（X）的關(guān)系為Y=1.6233X-60.6190，r=0.9999，表明葛根素在0.1210～1.2096μg 進(jìn)樣量范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液，精密量取10μL，連續(xù)測定6次，結(jié)果峰面積的RSD為0.51% （n= 6） 。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品（批號(hào)：20170401） 溶液10μL，分別在0、2、4、8、12h進(jìn)樣測定一次，結(jié)果峰面積的RSD 為1.44% （n=6） ，結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。