李 靜， 蘇 慶， 李立順， 時維靜， 賀紹君， 劉德義

(安徽科技學(xué)院 動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100)

白頭翁為毛茛科多年生白頭翁屬植物。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，主要分布在東北、華北等地的山崗、荒坡及田野間[1]。白頭翁可清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲，是防治腹瀉的藥[2]。還可用于治療細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾等[3]。白頭翁具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能、抗炎、抗病原微生物、抗寄生蟲、保肝及治療內(nèi)毒素血癥等作用[4-5]。白頭翁皂苷是白頭翁的主要活性成分[6]，白頭翁皂苷在體外對P-388細(xì)胞的生長抑制率為53.7%[7]，能抑制綠膿桿菌、痢疾桿菌、枯草桿菌、傷寒桿菌等的生長[8]。目前對白頭翁主成分的研究只限23-羥基白樺酸和擬原白頭翁素等少數(shù)幾種[9]。本試驗通過在AA肉雞的飲水里添加白頭翁粗皂苷提取液，測定肉雞血清的抗氧化指標(biāo)，研究白頭翁粗皂苷對肉雞血清抗氧化能力的影響，為臨床用藥提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物分組

1日齡AA肉雞72只，隨機(jī)分成對照組和試驗組，每組2個重復(fù)，每個重復(fù)18只，在安徽科技學(xué)院附屬獸醫(yī)院動物房內(nèi)進(jìn)行立體層疊式籠養(yǎng)，隨機(jī)分為試驗組和對照組。自由采食和飲水，自然光照，保持良好的通風(fēng)和溫度控制，并按常規(guī)進(jìn)行肉雞的免疫接種。在1日齡時，在開口液中添加5 g腹瀉清；在5日齡時，在開口液中添加10 g腹瀉清；在7日齡時，進(jìn)行新城疫疫苗(IV系)(生產(chǎn)批號：20110822，廣西麗原生物股份有限公司)1.5倍劑量滴鼻點(diǎn)眼，頸部皮下注射0.5 mL免疫；在14日齡時，進(jìn)行傳染性法氏囊炎疫苗(法倍靈)(生產(chǎn)批號：20110906)2倍劑量滴鼻點(diǎn)眼免疫；在15日齡用白頭翁粗皂苷提取液(由安徽科技學(xué)院時維靜教授提供)連續(xù)3 d給藥。試驗組每日飲含0.5%藥液水3 600 mL，飲完后給予清水。在18日齡時，進(jìn)行新城疫疫苗(IV系)4倍劑量飲水免疫?；A(chǔ)日糧組成(表1)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 PX-8600型電熱恒溫水槽(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)、DL-5型低速離心機(jī)(湖南湘儀)、7230G型可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2.2 白頭翁粗皂苷提取液 取白頭翁100 g，粉碎成粗粉，放于索式提取器中，以乙醚回流脫脂藥粉，晾干加95%的乙醇600 mL，回流6 h，過濾。藥渣用200 mL 95%乙醇分兩次洗滌，合并濾液，減壓濃縮至最小體積，加入過量丙酮，即析出白色粉質(zhì)，再使其溶于40 mL熱乙醇中，放置析出白色飴狀物，使所得白色沉淀溶于甲醇，過濾，將濾液添加到丙酮-乙醚(體積比為1∶1)的混合溶劑中，濾集白色物質(zhì)，低溫干燥，磨細(xì)，即得白頭翁總皂苷，再制備提取液。

1.2.3 試劑 過氧化氫酶(CAT)可見光試劑盒(生產(chǎn)批號：2011125)、超氧化物歧化酶(SOD)可見光試劑盒(批號：2011125)、丙二醛(MDA)可見光試劑盒(生產(chǎn)批號：2011125)、谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-Px)可見光試劑盒(生產(chǎn)批號：2011125)，以上試劑盒均由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。生理鹽水，冰醋酸(AR,國藥集團(tuán))等。

1.3 血清采集與處理

在25、29、33日齡每組選6只屠宰，2個重復(fù)采血，以3 000 r/min的離心10 min，裝入已編號的瓶中，于超低溫冰柜中保存待測。

1.4 測定指標(biāo)與方法

超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黃嘌呤氧化酶法；谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-Px)活性采用DTNB法；過氧化氫酶(CAT)活性采用可見光法；丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗所有數(shù)據(jù)用SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析，用LSD法作多重比較，試驗數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 白頭翁粗皂苷對肉雞血清SOD活力的影響

由表2可知，在25、29、33日齡時試驗組與對照組的肉雞血清SOD活力差異均不顯著(P>0.05)。

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)*表示差異顯著(P<0．05)，下同。

Note: The shoulder-marked * in the same column represents a significant difference (P<0.05), the same below.

2.2 白頭翁粗皂苷對肉雞血清CAT活力的影響

由表3可知，在25日齡時，試驗組的CAT活力顯著低于對照組(P<0.05)；在29、33日齡時，試驗組與對照組的肉雞血清CAT活力差異不顯著(P>0.05)。

表3 白頭翁粗皂苷對肉雞血清CAT活力的影響(單位：U/mL)

2.3 白頭翁粗皂苷對肉雞血清MDA含量的影響

由表4可知，在25、29、33日齡時，試驗組與對照組的肉雞血清MDA含量差異均不顯著(P>0.05)。

表4 白頭翁粗皂苷對肉雞血清MDA含量的影響(單位：nmol/mL)

2.4 白頭翁粗皂苷對肉雞血清GSH-Px活力的影響

由表5可知，在25、29日齡時，試驗組肉雞血清GSH-Px活力顯著低于對照組(P<0.05)，在33日齡時，試驗組肉雞血清GSH-Px活力顯著高于對照組(P<0.05)。

表5 白頭翁粗皂苷對肉雞血清GSH-Px活力的影響(單位：U/mL)

3 結(jié)論與討論

動物機(jī)體在正常新陳代謝的過程中，活性氧自由基的產(chǎn)生和消除始終保持著動態(tài)平衡[10]。SOD、GSH-Px、CAT是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶。MDA是脂質(zhì)過氧化物(LPO)氧化形成的終產(chǎn)物，機(jī)體內(nèi)MDA的水平可直接反映LPO的水平，即顯示機(jī)體脂質(zhì)受活性氧自由基攻擊的損害程度[11]。本課題組已有研究發(fā)現(xiàn)白頭翁及白頭翁皂苷對雞增重、免疫器官功能有一定的促進(jìn)作用，對雞中性粒細(xì)胞的吞噬率有極顯著的增強(qiáng)作用，白頭翁及其皂苷作為免疫增強(qiáng)劑，具有很好的研究價值與應(yīng)用前景。劉忠平等[12]研究發(fā)現(xiàn)白頭翁水提物具有抗誘變和抗氧化作用，可使小鼠血清SOD活性及血清總抗氧化能力提高，其機(jī)制可能與消除自由基、中斷或終止自由基的氧化反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的總抗氧化能力有關(guān)。在本次試驗中，對照組中肉雞血清SOD活力呈升高趨勢，而試驗組在25日齡時肉雞血清SOD活力略高于對照組，但在29、33日齡時均略低于對照組，差異不顯著(P>0.05)；試驗組中肉雞血清CAT活力呈升高趨勢，但在25、29日齡時，試驗組肉雞血清CAT活力低于對照組且在25日齡時差異顯著(P<0.05)，在33日齡時，試驗組肉雞血清CAT活力略高于對照組，差異不顯著(P>0.05)；在25、29、33日齡時，試驗組與對照組肉雞血清MDA含量均升高，且在25日齡時試驗組略高于對照組，差異不顯著(P>0.05)；在25、29日齡時，試驗組肉雞血清GSH-Px活力低于對照組，而在33日齡時，試驗組高于對照組，試驗組與對照組差異顯(P<0.05)。

綜上所述，本次試驗結(jié)果表明，白頭翁粗皂苷對肉雞血清有一定的抗氧化能力。但在試驗中，對不同日齡肉雞血清的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測定，差異大，無明顯趨勢和規(guī)律。結(jié)果可能與肉雞不同日齡發(fā)育狀況不同、中藥在體內(nèi)的代謝以及中藥的雙向調(diào)節(jié)等有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。