張之遠

經濟高速發(fā)展的今天，國民素質正在提高，但隨地吐痰的現象仍屢見不鮮，這不僅有損我國的形象，也易導致疾病的傳播。痰液尤其是病人的痰液中含有大量致病菌，易傳播疾病。

我對痰液處理的問題產生了好奇，于是和同學一起著手研究常見消毒劑對痰液的殺菌效果，希望能找到處理痰液的好方法。

查閱資料時發(fā)現我校2014級同學曾做過關于痰液的研究性學習課題，他們的課題研究給我提供了參考。

一、研究目標

通過閱讀學長們的研究材料，我發(fā)現他們的實驗過程存在兩個問題：一是將實驗用的痰液稀釋1000倍，即用痰液稀釋液進行痰液的消毒實驗是如何確定的，依據不清楚。二是實驗用的痰液稀釋液標本源自一個人，實驗結果有極大的偶然性，實驗結論是由個別例子得出的普遍結論。

由此，我明確了研究方向：1.通過預實驗確定痰液稀釋液的濃度，以便觀察痰液中菌落的個數。2.在做好第一步的基礎上，采集多個不同年齡段、不同性別的人的痰液標本進行消毒對比實驗，判斷碘伏對痰液的消毒效果。

二、確定痰液稀釋濃度的預實驗

1.實驗用品

（1）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1瓶，一次性培養(yǎng)皿500個，一次性手套100雙，實驗用酒精1瓶，84消毒液1瓶，碘伏1瓶。

（2）用可密封塑料袋取痰液，并記錄研究對象的姓名、性別、年齡。

（3）配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。稱取16g瓊脂溶于500ml蒸餾水中，加熱溶解后分裝于4個可密封塑料瓶中，高壓滅菌后備用。

（4）取4支試管用報紙包好，可密封塑料瓶裝入50ml清水，3支平板涂布器用報紙包好，高壓蒸汽滅菌后備用。一次性吸管、移液槍待紫外滅菌后備用。

2.操作步驟

（1）將滅菌后的培養(yǎng)基快速分裝至13個培養(yǎng)皿中，并進行編號。

（2）對痰液進行濃度梯度稀釋。

將4支試管編號為1、2、3、4，用一次性吸管吸取1ml痰液放入1號試管中，加入9ml無菌水混合均勻，制得稀釋10倍的痰液。

用一次性吸管吸取1ml 1號試管中的液體注入2號試管中，再加入9ml無菌水，混合均勻，制得稀釋100倍的痰液。

用一次性吸管吸取1ml 2號試管中的液體注入3號試管中，加入9ml無菌水混合均勻，制得稀釋1000倍的痰液。

用一次性吸管吸取1ml 3號試管中的液體注入4號試管中，加入9ml無菌水混合均勻，制得稀釋10 000倍的痰液。

（3）分別用移液槍吸取0.1ml 1號試管中的痰液稀釋液注入1-1、1-2、1-3培養(yǎng)皿中，吸取0.1ml 2號試管中的痰液稀釋液注入2-1、2-2、2-3培養(yǎng)皿中， 吸取0.1ml 3號試管中的痰液稀釋液注入3-1、3-2、3-3培養(yǎng)皿中，吸取0.1ml 4號試管中的痰液稀釋液注入4-1、4-2、4-3培養(yǎng)皿中，吸取0.1ml無菌水注入對照培養(yǎng)基中，并用平板涂布器涂布均勻。

將培養(yǎng)皿封好，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后觀察結果，取菌落個數在30至300的稀釋濃度為最佳痰液稀釋濃度。

3.實驗結果

痰液被稀釋10倍時，1-1、1-2、1-3平板中的菌落數均遠遠大于300。當痰液被稀釋100倍時，2-1、2-2、2-3平板中的菌落數均遠大于300。痰液被稀釋1000倍時，3-1、3-2、3-3平板中的菌落數仍大于300。痰液被稀釋10 000倍時，4-1、4-2、4-3平板中的菌落數位于30至300之間。

所以，痰液稀釋到10 000倍時，更加便于觀察菌落的個數。

三、滅菌實驗

1.實驗用品

（1）用可密封塑料袋取痰液（8種），對其進行如下標號：青年男、青年女、中年男、中年女、老年女、老年男、病男、病女，并記錄研究對象的姓名、性別、年齡。

（2）準備試管12支，密封瓶16個，平板涂布器16個，3個可密封塑料瓶各裝入60ml清水以及配置好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，移液槍槍頭若干，待高壓滅菌后備用，一次性吸管、移液槍待紫外滅菌后備用。

2.操作步驟

（1）將滅菌后的培養(yǎng)基快速分裝至49（4×12+1）個培養(yǎng)皿中。

（2）將試管編號為青年男1、青年男2、青年男3；青年女1、青年女2、青年女3；中年男1、中年男2、中年男3；中年女1、中年女2、中年女3。

將密封瓶編號為青男84、青男酒精、青男碘伏、青男水；青女84、青女酒精、青女碘伏、青女水；中男84、中男酒精、中男碘伏、中男水；中女84、中女酒精、中女碘伏、中女水，培養(yǎng)皿編號如表1。

（3）分別取1ml痰液稀釋液于密封瓶中，分別加入不同的消毒液，在搖床上搖動10min。

（4）分別取消毒過后的痰液0.1ml涂布到培養(yǎng)基中。將培養(yǎng)皿封好，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后觀察結果。

實驗結果表明，84消毒液和碘伏對痰液中的細菌均有顯著的殺菌效果，碘伏效果最好，酒精效果最差。

四、實驗結果

針對痰液的消毒，使用碘伏消毒效果優(yōu)于使用84消毒液消毒。因此我建議，在醫(yī)院的傳染病室可用碘伏對病人排出的體液消毒。（指導老師：熊梅初）