夏守平，陳 丹, 周 影，夏巖峰，季福田

(1.輝南縣林業(yè)技術(shù)推廣站,吉林 通化 135100；2.吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院，吉林 吉林 132012；3.輝南縣林業(yè)局調(diào)查設(shè)計(jì)隊(duì)，吉林 通化 135100；4.輝南縣福田林下中藥材種植專業(yè)合作社，吉林 通化 135056)

天麻(GastrodiaelataBlume)為蘭科天麻屬植物，我國(guó)天麻原產(chǎn)地主要為湖北、云南、貴州、四川、陜西、吉林等6個(gè)省，國(guó)內(nèi)天麻主產(chǎn)區(qū)有4個(gè)，即長(zhǎng)江三峽神農(nóng)架天麻產(chǎn)區(qū)，云、貴、川、陜高原天麻產(chǎn)區(qū)，大別山天麻產(chǎn)區(qū)和長(zhǎng)白山天麻產(chǎn)區(qū)。長(zhǎng)白山區(qū)具有豐富的天麻種植原材料和勞動(dòng)力資源以及得天獨(dú)厚的氣候優(yōu)勢(shì)，適宜發(fā)展天麻產(chǎn)業(yè)，通化、靖宇等市、縣政府把種植天麻作為當(dāng)?shù)匕傩彰撠氈赂坏捻?xiàng)目來(lái)扶持。雖然我省是天麻的原產(chǎn)地又是主產(chǎn)區(qū)，但目前天麻種植產(chǎn)業(yè)技術(shù)發(fā)展水平還落后于國(guó)內(nèi)幾個(gè)主要天麻種植產(chǎn)區(qū)，如湖北宜昌，云南昭通，陜西漢中等，主要原因是缺乏適宜本地區(qū)寒冷氣候特點(diǎn)的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)天麻品種和技術(shù)[1]。長(zhǎng)白山烏天麻是分布在我國(guó)東北寒冷地區(qū)的優(yōu)質(zhì)天麻，但產(chǎn)量低、適種區(qū)域窄，難以滿足長(zhǎng)白山地區(qū)優(yōu)質(zhì)天麻種植產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要[2]。我們通過(guò)試驗(yàn)研究選育出了綠天麻“翡翠1號(hào)”(暫命名)，其種子萌發(fā)早，分生能力和抗逆性較強(qiáng)，生長(zhǎng)速度快，周期短，產(chǎn)量高，有效成分天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總量含量較高?，F(xiàn)將“翡翠1號(hào)”選育試驗(yàn)情況報(bào)告如下。

1 試驗(yàn)方法

1.1 選育方法

1.1.1 野生種源收集

2013年,在輝南縣樣子哨鎮(zhèn)采集野生天麻時(shí)發(fā)現(xiàn)一群綠天麻，這在長(zhǎng)白山野生天麻中非常罕見(jiàn)，與烏天麻分別收集。

1.1.2 試驗(yàn)材料

萌發(fā)菌種為紫萁小菇8104，蜜環(huán)菌種為京—234，均選購(gòu)于陜西漢王略陽(yáng)中藥科技有限公司。烏天麻、綠天麻為收集并經(jīng)選擇的野生箭麻。段木為蒙古櫟蠶場(chǎng)更新枝材，直徑為5～8 cm、鋸成50 cm長(zhǎng)的段，兩側(cè)砍2～3排魚鱗口，每排6～7個(gè)，深至木質(zhì)部。短枝為直徑為1～2 cm、長(zhǎng)度5 cm左右的鮮蒙古櫟枝，樹葉為干蒙古櫟樹葉，栽培基質(zhì)為河沙。

1.1.3 有性繁殖栽培比較試驗(yàn)

在3月中旬，對(duì)箭麻進(jìn)行室內(nèi)加溫培育，烏天麻、綠天麻箭麻栽植和培育期管理按常規(guī)箭麻培育法[3]，40 d左右箭麻進(jìn)入花期，開(kāi)始人工授粉。經(jīng)20 d左右天麻蒴果成熟時(shí)及時(shí)采摘。掰開(kāi)蒴果抖落出天麻種子，并分別將種子拌種在萌發(fā)菌葉中，裝袋發(fā)菌2～3 d后播種栽培。

栽培試驗(yàn)在5月下旬進(jìn)行，將蒙古櫟樹葉提前1 d浸泡一夜后撈出，瀝去水分備用，栽培試驗(yàn)中每平方米使用天麻蒴果20個(gè)，萌發(fā)菌2袋(菌袋規(guī)格12 cm×28 cm)，蜜環(huán)菌短枝菌種4袋(菌袋規(guī)格16 cm×33 cm)，在暖棚中雙層播種。

底層鋪5 cm厚的河沙(濕度調(diào)到60 %)，撒上一薄層濕樹葉，再將已拌好種子的萌發(fā)菌葉均勻地撒播在樹葉上，間隔3～4 cm擺放一根段木，將蜜環(huán)菌菌種放置在段木魚鱗口處及段木兩端，再將短枝撒放在木段間隙，加入填充料至木段上1 cm，然后再按上述操作順序播種第二層，最后上面覆蓋河沙2～3 cm，其上再覆蓋一層5 cm厚的濕樹葉或稻草，遮陽(yáng)保溫保濕。播種后的管理方法按天麻常規(guī)管理方法進(jìn)行。

采用隨機(jī)區(qū)組法，烏天麻、綠天麻各播種5 m2，重復(fù)3次，試驗(yàn)中各組天麻蒴果數(shù)量、萌發(fā)菌和蜜環(huán)菌數(shù)量、段木、短枝和樹葉數(shù)量一致，18個(gè)月后采收天麻，測(cè)定產(chǎn)量。

1.1.4 無(wú)性繁殖生產(chǎn)比較試驗(yàn)

2015年4月，分別挑選經(jīng)過(guò)越冬休眠貯藏的無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)病蟲害的單個(gè)質(zhì)量在10～20 g的烏天麻、綠天麻種麻各30 kg，在林下采用菌材法進(jìn)行無(wú)性繁殖。試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組法，烏天麻、綠天麻各播種10 m2，每平方米用種量1 kg，重復(fù)3次。選擇郁閉度大于60 %，坡度小于30°的林地，順山坡做寬1.2 m的地上床，刨松表層土，擺放菌棒間隔3～4 cm，將種麻貼靠菌棒擺放，菌棒質(zhì)量、粗細(xì)、用量及田間管理方法相同，當(dāng)年10月份采收天麻，測(cè)定產(chǎn)量。

1.1.5 區(qū)域栽培試驗(yàn)

2016—2017年，將烏天麻、綠天麻按1.1.4標(biāo)準(zhǔn)選擇30 kg種麻，在通化、吉林不同地區(qū)林下做栽培比較試驗(yàn)，產(chǎn)量調(diào)查面積為10 m2，取3次調(diào)查的平均數(shù)。

1.2 質(zhì)量鑒定

1.2.1 生物學(xué)特性試驗(yàn)觀察

以長(zhǎng)白山烏天麻為對(duì)照，對(duì)綠天麻的生物學(xué)特性、萌發(fā)率、分生力、產(chǎn)量、形態(tài)及抗逆性進(jìn)行調(diào)查。

1.2.2 天麻素含量測(cè)定

1.2.2.1 供試品溶液的制備

取烏天麻、綠天麻供試品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2 g，精密稱定，平行重復(fù)3次，加稀乙醇50 mL，稱重，回流3 h后，稱定重量，稀乙醇補(bǔ)足。搖勻后過(guò)濾，精密量取濾液10 mL，濃縮至近干，殘?jiān)右译?水(3∶97)混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻。

1.2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取天麻素(C17H18O7)對(duì)照品、對(duì)羥基苯甲醇(C7H8O2)對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈-水(3∶97)混合溶液制成每1 mL含天麻素250 μg、對(duì)羥基苯甲醇200 μg的混合溶液。

1.2.2.3 色譜條件

色譜柱為Agilent C18(4.6×250 mm 5-Micron)，柱溫30 ℃，流動(dòng)相為乙腈：0.05 %磷酸溶液(3∶97)。檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，流速1.0 mL·min-1,理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

1.2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

吸取上述對(duì)照品溶液0.25、0.5、1、2、4、10 mL定容到10 mL容量瓶中，按上述色譜條件進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，天麻素計(jì)算回歸方程：Y=314.19X+0.1975(Y：天麻素的峰面積，X：天麻素的濃度，R=0.9999),線性范圍5～200.15 mg·L-1；對(duì)羥基苯甲醇回歸方程：Y=489.59X-0.5956(Y:對(duì)羥基苯甲醇的峰面積，X：對(duì)羥基苯甲醇的濃度，R=0.9995), 線性范圍6.28～251.22 mg·L-1。

1.2.2.5 供試品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μL與供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積，計(jì)算天麻素、對(duì)羥基苯甲醇含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 有性繁殖栽培比較試驗(yàn)

2014年10月，對(duì)大棚有性繁殖的長(zhǎng)白山烏天麻和綠天麻進(jìn)行產(chǎn)量調(diào)查，各試驗(yàn)區(qū)分別按箭麻、白麻和總產(chǎn)量調(diào)查，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同品種有性繁殖產(chǎn)量調(diào)查結(jié)果Tab. 1 The result of sexual reproduction yield of different varieties

從表1中可以看出，有性繁殖在大棚內(nèi)經(jīng)過(guò)18個(gè)月的培育，綠天麻箭麻和白麻的總產(chǎn)量3組平均為6.87，烏天麻為3.62，綠天麻的產(chǎn)量是烏天麻的1.90倍，增產(chǎn)效果差異極顯著。

2.2 無(wú)性繁殖生產(chǎn)比較試驗(yàn)

無(wú)性繁殖生產(chǎn)比較試驗(yàn)的天麻于2015年10月采收，產(chǎn)量調(diào)查結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 無(wú)性繁殖產(chǎn)量比較試驗(yàn)結(jié)果Tab. 2 The comparison experiment result of asexual reproduction yield

從表2中可以看出，無(wú)性繁殖在林下經(jīng)過(guò)6個(gè)月的培育，綠天麻箭麻和白麻的總產(chǎn)量3組平均為8.85，烏天麻為4.89，綠天麻的產(chǎn)量是烏天麻的1.81倍，增產(chǎn)效果差異極顯著。

2.3 不同區(qū)域栽培試驗(yàn)

在通化、吉林地區(qū)2年栽培試驗(yàn)平均產(chǎn)量調(diào)查結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同地區(qū)栽培試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果Tab. 3 Investigation result of cultivation experiment of different regions

從表3中可以看出，無(wú)性繁殖在林下經(jīng)過(guò)6個(gè)月的培育，通化地區(qū)綠天麻箭麻和白麻的總產(chǎn)量3組平均為8.71，烏天麻為4.56；吉林地區(qū)綠天麻的產(chǎn)量是8.42烏天麻為4.68，不同地區(qū)之間栽培產(chǎn)量無(wú)顯著差異。

2.4 萌發(fā)率、分生能力調(diào)查

播種后90 d，烏天麻、綠天麻萌發(fā)及分生情況調(diào)查，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 烏天麻和綠天麻萌發(fā)情況觀測(cè)結(jié)果Tab. 4 Observation result of germination between Gastrodia elata f.glauca and Gastrodia elata Bl. var. pallens Kitagawa.

從表4中可以看出，綠天麻種子萌發(fā)率顯著高于烏天麻，平均萌發(fā)率為85 %，是烏天麻的1.89倍，發(fā)芽狀態(tài)，形成二級(jí)分枝處于營(yíng)養(yǎng)繁殖莖階段，而烏天麻處于原球莖階段，綠天麻分生能力比烏天麻強(qiáng)，原球莖生長(zhǎng)速度也比烏天麻快。

2.5 抗病性及商品性狀調(diào)查

在大棚有性繁殖和林下無(wú)性繁殖過(guò)程中，均未發(fā)現(xiàn)綠天麻有腐爛和被真菌感染的現(xiàn)象，說(shuō)明該變型抗逆性較強(qiáng)。綠天麻商品麻顏色較白，鱗片少，形體好，商品性狀好。

2.6 主要成分含量測(cè)定

按照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部，通則檢測(cè)方法對(duì)綠天麻和烏天麻的天麻素的總量進(jìn)行測(cè)定，烏天麻總量為0.38 %，綠天麻為0.42 %，均高于中華人民共和國(guó)藥典(2015年版)要求的標(biāo)準(zhǔn)0.25 %[4]。

3 結(jié)論

上述試驗(yàn)結(jié)果顯示，綠天麻從產(chǎn)量、質(zhì)量、抗逆性等生物學(xué)性狀及主要藥效成分等方面比較均好于烏天麻，因此，我們將其暫定名為“翡翠1號(hào)”天麻栽培品種，并建議在長(zhǎng)白山及東北地區(qū)大力推廣栽培。