張莉 譚華 羅晨禹 劉英海 鞏固 吳畏

中圖分類號 R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）09-1227-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.09.18

摘 要 目的：確定酒精依賴或戒斷模型大鼠單次靜脈注射丙泊酚的半數(shù)有效劑量（ED50），觀察2倍ED50丙泊酚對其的麻醉效果。方法：取50只SD大鼠根據(jù)乙醇消耗量是否大于3.0 g/（kg·d）分為飲酒組（n=23）和對照組（n=27），飲酒組大鼠持續(xù)自由間斷飲用乙醇建立酒精依賴模型，對照組大鼠只給予飲用水進(jìn)行乙醇洗脫，2組大鼠各隨機(jī)選取16只采用序貫法確定單次靜脈注射丙泊酚的ED50，首劑量為6.02 mg/kg；洗脫1周后，選取撤離乙醇24 h出現(xiàn)酒精戒斷表現(xiàn)的飲酒組大鼠納入酒精戒斷模型，同法確定酒精戒斷組和對照組大鼠的丙泊酚ED50；洗脫1周后，觀察酒精依賴組、酒精戒斷組和對照組大鼠單次靜脈注射2倍ED50劑量丙泊酚的麻醉效果[前爪翻正反射（FRR）消失時(shí)間、FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間和活動完全恢復(fù)時(shí)間]及其對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)和給藥前的呼吸頻率， 考察給藥后48 h的肝功能指標(biāo)（血清白蛋白、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶）和肝組織形態(tài)學(xué)變化，每組10只。結(jié)果：酒精依賴模型大鼠丙泊酚的ED50為9.563 mg/kg，大于對照組的5.623 mg/kg；酒精戒斷模型大鼠丙泊酚的ED50為4.086 mg/kg，小于對照組的5.297 mg/kg；與對照組比較，酒精依賴組和酒精戒斷組大鼠的FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間均明顯延長（P<0.05），F(xiàn)RR消失時(shí)間和活動完全恢復(fù)時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），F(xiàn)RR消失時(shí)的呼吸頻率均小于注射丙泊酚前、FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)和活動完全恢復(fù)時(shí)（P<0.01）。注射2倍ED50劑量丙泊酚后，酒精依賴組和酒精戒斷組FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間均長于對照組（P<0.05），且酒精依賴組FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間長于酒精戒斷組（P<0.05）；酒精依賴組大鼠活動完全恢復(fù)時(shí)間長于對照組和酒精戒斷組（P<0.05）；3組大鼠FRR消失時(shí)的呼吸頻率均小于注射丙泊酚前、FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)和活動完全恢復(fù)時(shí)（P<0.01），3組大鼠肝功能指標(biāo)和肝組織形態(tài)學(xué)變化無明顯差異。結(jié)論：大鼠酒精依賴后丙泊酚ED50增加，酒精戒斷后ED50減小，2倍ED50劑量丙泊酚對其肝功能無明顯毒性。

關(guān)鍵詞 序貫法；丙泊酚；酒精依賴；酒精戒斷；半數(shù)有效劑量；大鼠

ABSTRACT OBJECTIVE： To determine the median effective dose （ED50） of propofol with single intravenous injection in alcohol dependence or withdrawal model rats， and to observe the anaesthetic effect of 2-fold ED50 propofol. METHODS： Fifty SD rats were divided into drinking group （n=23） and control group （n=27） based on whether the consumption of alcohol was greater than 3.0 g/（kg·d）. Drinking group continued to drink freely and intermittently to establish alcohol dependence model. Control group was only given drinking water for ethanol elution. 16 rats were randomly selected from each group to determine ED50 of propofol with single intravenous injection by sequential method， and initial dose was 6.02 mg/kg. After eluting for a week， alcohol dependence rats stopped drinking for 24 hours and had alcohol withdrawal symptoms to establish alcohol withdrawal model. ED50 of propofol in alcohol withdrawal group and control group were determined with same method. After eluting for a week， anaesthetic effect [disappearance time and reappearance time of forepaw righting reflex （FRR）， time of activity complete recovery] of 2-fold ED50 propofol with single intravenous injection were observed in alcohol dependence group， alcohol withdrawal group and control group， and corresponding time point and the frequency of respiration before administration were also observed. Changes of liver function indexes （serum albumin， alanine transaminase， total bilirubin， γ glutamyl transaminopeptidase） and liver histomorphology were observed 48 h after medication， 10 in each group. RESULTS： ED50 of propofol in alcohol dependence model rats was 9.563 mg/kg， which was higher than 5.623 mg/kg of control group. ED50 of propofol in alcohol withdrawal model rats was 4.086 mg/kg， which was lower than 5.297 mg/kg of control group. Compared with control group， reappearance time of FRR was prolonged significantly in alcohol dependence group and alcohol withdrawal group （P<0.05）. There was no statistical significance in disappearance time of FRR or activity complete recovery time （P>0.05）. The frequency of respiration during FRR disappearance was lower than before propofol injection， FRR reappearance and activity complete recovery （P<0.01）. After intravenous injection of 2-fold ED50 propofol， reappearance time of FRR in alcohol dependence group and alcohol withdrawal group were longer than control group （P<0.05）； the alcohol dependence group was longer than the alcohol withdrawal group （P<0.05）. The time of activity complete recovery in alcohol dependence group was longer than control group and alcohol withdrawal group （P<0.05）. The frequency of respiration in 3 groups during FRR disappearance were all lower than before propofol injection， FRR reappearance and activity complete recovery （P<0.01）. There was no significant difference in the change of liver function indexes or liver histomorphology. CONCLUSIONS： ED50 of propofol is increased in alcohol dependence rats， while ED50 of propofol is decreased in alcohol withdrawal rats. 2-fold ED50 of propofol has no significant toxicity to liver function.

KEYWORDS Sequential method； Propofol； Alcohol dependence； Alcohol withdrawal； Median effective dose； Rat

近年來，酒精濫用及其危害日益嚴(yán)重。世界衛(wèi)生組織發(fā)表的《2014年酒精與健康全球狀況報(bào)告》顯示，2012年全世界有害使用酒精導(dǎo)致的死亡人數(shù)超過330萬，可能導(dǎo)致200多種疾病的發(fā)生和酒精依賴[1]。長期飲酒會改變中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常功能，最終產(chǎn)生對酒精的依賴。酒精依賴者若中斷酒精的補(bǔ)給，可能誘發(fā)嚴(yán)重的酒精戒斷綜合癥（Alcohol withdral syndrome， AWS）。長期飲酒者會對巴比妥產(chǎn)生交叉耐受[2]，急性酒精攝入影響苯二氮 類藥物代謝[3]，而酒精對其他麻醉藥物的影響以及酒精戒斷者對靜脈全身麻醉藥物的反應(yīng)，目前缺乏系統(tǒng)的研究，導(dǎo)致這類患者需要使用麻醉藥物時(shí)，臨床醫(yī)師無法準(zhǔn)確判斷藥物的劑量，而使麻醉風(fēng)險(xiǎn)大幅度增加。

丙泊酚是臨床上現(xiàn)作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)最短效的靜脈麻醉藥物，其起效迅速、作用時(shí)間短、持續(xù)輸注無蓄積，停藥后蘇醒快、無精神癥狀，故被廣泛用于麻醉誘導(dǎo)和維持術(shù)后鎮(zhèn)靜及門診短小手術(shù)麻醉，小兒乃至老年患者都適用[4]。但丙泊酚對酒精依賴及酒精戒斷患者進(jìn)行麻醉是否安全，缺乏詳細(xì)的數(shù)據(jù)資料。故本研究通過復(fù)制酒精依賴和酒精戒斷大鼠模型，測定模型大鼠靜脈注射丙泊酚的半數(shù)有效劑量（ED50），用以評估臨床上對酒精依賴和酒精戒斷手術(shù)患者實(shí)施麻醉時(shí)丙泊酚的用藥劑量，為臨床麻醉工作提供參考依據(jù)，提高麻醉的安全性。

1 材料

1.1 儀器

AU2700全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）；CX21生物顯微鏡（日本Olympus公司）；Epoch酶學(xué)檢測儀（美國BioTek公司）；DY89-11電動玻璃勻漿器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；Neofuge 15R臺式高速冷凍離心機(jī)（力康生物醫(yī)療科技控股有限公司）。

1.2 藥品與試劑

丙泊酚注射液（江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號：G0280，規(guī)格：200 mg ∶ 20 mL）；乙醇（東莞市喬科化學(xué)有限公司，批號：20161002，純度：95%）；G1120 HE染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）。

1.3 動物

50只6周齡健康SD封閉群大鼠，♂，體質(zhì)量160～200 g，購于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2012-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 建模與分組

2.1.1 酒精依賴模型 參照研究[5-6]報(bào)道的方法，取50只大鼠以6%乙醇（V/V，下同）水溶液作為唯一水源，24 h自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)8周。于第9周將大鼠單只獨(dú)籠飼養(yǎng)，進(jìn)行兩瓶水[1瓶飲用水/1瓶20%乙醇混合溶液]自由間斷飲用（星期一、三、五給予飲用水和20%乙醇水溶液，星期二、四、日只給予飲用水或20%乙醇混合溶液中的一種），記錄每只大鼠每日乙醇消耗量，連續(xù)觀察測試1周，以大鼠平均乙醇攝入量為3.0 g/（kg·d）為標(biāo)準(zhǔn)，乙醇攝入量大于3.0 g/kg（高水平乙醇消耗）的大鼠納入飲酒組，繼續(xù)單只單籠飼養(yǎng)，兩瓶水自由間斷飲用；其余大鼠納入對照組，只給予飲用水，進(jìn)行酒精洗脫。于第16周，觀察飲酒組大鼠仍維持高水平乙醇消耗并將大鼠逐只放入規(guī)格為100 cm×50 cm×60 cm、底部描有等分8格底紋的敞口箱，記錄5 min內(nèi)大鼠爬過的格子數(shù)和站立次數(shù)。與對照組比較，飲酒組大鼠在飲酒（飲用20%乙醇混合溶液）期間和停止飲酒后2、24 h時(shí)的站立次數(shù)分別減少74.02%、72.95%、51.35%，5 min內(nèi)爬過的格子數(shù)分別減少71.10%、65.15%、47.05%，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明飲酒組大鼠出現(xiàn)飲酒后行為學(xué)改變，提示酒精依賴模型建立成功，納入酒精依賴組。從酒精依賴組和對照組大鼠中隨機(jī)各選取16只，確定其單次靜脈注射丙泊酚的ED50，實(shí)驗(yàn)后按飲酒組和對照組飲水方案進(jìn)行藥物洗脫1周。

2.1.2 酒精戒斷模型 “2.1.1”項(xiàng)下藥物洗脫后（即第17周），觀察飲酒組大鼠撤除乙醇后0、2、24 h的行為體征，參照改良柳田知司評分表[7]進(jìn)行酒精戒斷評分，結(jié)果顯示，飲酒組大鼠3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的酒精戒斷評分分別為3.89、10.44、9.01，而對照組大鼠3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的酒精戒斷評分分別為3.48、3.61、3.43，可見飲酒組大鼠撤離乙醇后2、24 h的酒精戒斷評分明顯高于對照組（P<0.05），提示飲酒組大鼠的酒精戒斷模型建立成功，納入酒精戒斷組。從酒精戒斷組和對照組大鼠中隨機(jī)各選取16只，確定其單次靜脈注射丙泊酚的ED50，實(shí)驗(yàn)后按“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行藥物洗脫1周。改良柳田知司評分見表1。

2.2 藥物ED50的確定

2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法 大鼠單次尾靜脈注射丙泊酚，以前爪翻正反射（Forepaw righting reflex，F(xiàn)RR）消失作為麻醉有效（陽性）的標(biāo)準(zhǔn)，反之則認(rèn)為麻醉無效（陰性）。依照改良序貫法[8]：相鄰組別劑量按等比數(shù)級設(shè)置，組間比例設(shè)為1.2 ∶ 1，已有研究報(bào)道靜脈麻醉時(shí)丙泊酚的ED50為6.02 mg/kg[9]，本研究以此作為首劑量進(jìn)行序貫，下一只大鼠實(shí)驗(yàn)所需劑量根據(jù)上一只大鼠的反應(yīng)結(jié)果確定，若前一只大鼠反應(yīng)表現(xiàn)為陰性則后一只大鼠采用相鄰的高劑量，若反應(yīng)表現(xiàn)為陽性則采用相鄰的低劑量，重復(fù)該過程，直至出現(xiàn)6 次陽性-陰性轉(zhuǎn)折交叉點(diǎn)，終止序貫。實(shí)驗(yàn)納入計(jì)算的動物數(shù)（n），從第1次出現(xiàn)陽性-陰性或陰性-陽性轉(zhuǎn)折交叉點(diǎn)的第1只大鼠開始計(jì)算。

2.2.2 計(jì)算方法 采用Dixon-Mood法[8]計(jì)算各組大鼠單次尾靜脈注射丙泊酚后FRR消失即麻醉有效時(shí)的ED50及ED50的95%置信區(qū)間（CI）。計(jì)算公式如下：

式中，x為給藥劑量，n為納入動物數(shù)，p為陽性率，d為兩相鄰劑量對數(shù)的差值。最后取反對數(shù)即求得ED50以及ED50的95%CI。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)全程記錄大鼠一般情況，每日乙醇消耗量，每周固定時(shí)間對大鼠稱體質(zhì)量。

2.3.2 安全性指標(biāo) 記錄各組大鼠注射ED50劑量和2倍ED50劑量丙泊酚的不良反應(yīng)，記錄注射丙泊酚前（T1）、FRR消失時(shí)（T2）、FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)（T3）、活動完全恢復(fù)時(shí)（T4）4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的呼吸頻率。

2.3.3 麻醉效果指標(biāo) 記錄各組大鼠FRR消失時(shí)間即麻醉起效時(shí)間，為藥物注射完畢至FRR消失的時(shí)間；FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間即麻醉蘇醒時(shí)間，為FRR消失至FRR再度出現(xiàn)的時(shí)間；活動完全恢復(fù)時(shí)間即麻醉完全恢復(fù)時(shí)間，為FRR消失至活動恢復(fù)正常的時(shí)間。

2.4 2倍ED50劑量丙泊酚的大鼠實(shí)驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下酒精依賴組、酒精戒斷組、對照組大鼠，各10只，根據(jù)上述結(jié)果，以各組大鼠丙泊酚ED50的2倍為給藥劑量，單次靜脈注射丙泊酚，給藥48 h后尾靜脈取血，腹腔注射0.4%水合氯醛，處死，分離肝組織。觀察3組大鼠給藥前和給藥后48 h的平均飲食量和體質(zhì)量變化；采用全自動生化分析儀檢測給藥后48 h血清白蛋白（ALB）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（T-BIL）、 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）水平；使用生物顯微鏡觀察給藥后48 h肝組織的病理學(xué)變化。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以x±s表示。兩個(gè)樣本均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，重復(fù)測量資料采用重復(fù)測量方差分析，兩兩比較使用LSD檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí)表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 體質(zhì)量和乙醇消耗量

實(shí)驗(yàn)過程中，大鼠體質(zhì)量整體平穩(wěn)增長。飲酒組大鼠共23只，對照組大鼠27只，兩組大鼠實(shí)驗(yàn)第16、17、18周時(shí)的平均體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。強(qiáng)制飲酒期間（前8周），大鼠平均每日消耗6%乙醇水溶液113.34 mL/kg，換算為乙醇消耗量為6.01 g/（kg·d）。分組后第1周（實(shí)驗(yàn)第9周），飲酒組大鼠乙醇消耗量維持在3.05 g/（kg·d）左右，4周（實(shí)驗(yàn)第13周）后乙醇消耗量逐漸上升且維持在4.00 g/（kg·d）以上。實(shí)驗(yàn)第16、17、18周時(shí)大鼠平均乙醇消耗量為4.15、4.23、4.17 g/（kg·d），這3周的大鼠乙醇消耗量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組大鼠第16、17、18周的體質(zhì)量結(jié)果見表2。

3.2 酒精依賴模型大鼠ED50

結(jié)果顯示，酒精依賴組大鼠丙泊酚的ED50為9.563 mg/kg（95%CI：8.945～10.242 mg/kg），明顯高于對照組大鼠丙泊酚的ED50 5.623 mg/kg（95%CI：5.023～6.295 mg/kg）。其中，酒精依賴組中有7只大鼠麻醉有效，對照組中有8只大鼠麻醉有效，兩組麻醉有效大鼠進(jìn)行比較，依賴組FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間比對照組顯著延長（P<0.01），F(xiàn)RR消失時(shí)間和活動完全恢復(fù)時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見表3。

兩組麻醉有效大鼠T1、T3、T4的呼吸頻率明顯大于T2（P <0.01），但兩組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），結(jié)果見表4。

3.3 酒精戒斷組大鼠ED50

結(jié)果顯示，戒斷組大鼠丙泊酚的ED50為4.086 mg/kg（95%CI：3.566～4.675 mg/kg）低于對照組大鼠丙泊酚的ED50 5.297mg/kg（95%CI：4.919～5.945 mg/kg）。酒精戒斷組和對照組各有8只大鼠麻醉有效，兩組麻醉有效大鼠進(jìn)行比較，酒精戒斷大鼠FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間比對照組延長（P<0.05），F(xiàn)RR消失時(shí)間和活動完全恢復(fù)時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見表5。

兩組麻醉有效大鼠T1、T3、T4的呼吸頻率明顯大于T2（P <0.01），組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見表6。

3.4 大鼠2倍ED50 實(shí)驗(yàn)

取酒精依賴組、酒精戒斷組、對照組各10只，以各組大鼠2倍ED50劑量進(jìn)行單次靜脈注射丙泊酚，即對照組11.24 mg/kg、酒精依賴組19.12 mg/kg、酒精戒斷組8.18 mg/kg。3組大鼠在注射丙泊酚前、后48 h平均飲食量、體質(zhì)量無明顯變化。注射丙泊酚后，3組大鼠均出現(xiàn)明確、可逆的麻醉效果，無明顯不良反應(yīng)，無大鼠呼吸暫停或死亡。3組大鼠FRR消失時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；酒精依賴組大鼠FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間長于酒精戒斷組（P<0.05），酒精戒斷組大鼠FRR復(fù)現(xiàn)時(shí)間長于對照組（P<0.05）；酒精依賴組大鼠活動完全恢復(fù)時(shí)間長于對照組和酒精戒斷組（P<0.05），結(jié)果見表7。

3組大鼠T1、T3、T4的呼吸頻率明顯大于T2（P <0.01），組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），結(jié)果見表8。

3組大鼠肝功能指標(biāo)ALB、ALT、T-BIL、γ-GT 4項(xiàng)指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見表9。

3組大鼠肝組織40倍光鏡下顯示，對照組與酒精依賴組大鼠肝細(xì)胞與肝血竇以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完好，細(xì)胞核大而圓，組織結(jié)構(gòu)正常，形態(tài)清晰，未見明顯病理變化；酒精戒斷組大鼠偶見蛋白管型，部分血管腔內(nèi)有粉紅色蛋白液滲出，少量肝細(xì)胞胞漿疏松、透明，呈氣球樣變，未見明顯肝壞死以及假小葉形成。3組大鼠肝組織形態(tài)學(xué)變化見圖1。

4 討論

隨著酒文化在世界各國的盛行，飲用酒精制品帶來的嗜酒、醉酒等不良事件不斷發(fā)生，成為危及社會發(fā)展和公共衛(wèi)生安全的社會隱患。酒精依賴以及酒精戒斷帶來的醫(yī)療問題受到越來越多醫(yī)務(wù)人員的高度重視，酒精依賴-戒斷動物模型的成功建立將是研究酒精依賴、酒精戒斷以及伴發(fā)病理生理學(xué)改變成因和機(jī)制的起始步驟。長期大量飲酒不僅造成個(gè)體精神障礙，還引起軀體包括神經(jīng)、心血管、消化、內(nèi)分泌和代謝多個(gè)系統(tǒng)的損害，慢性酒精暴露導(dǎo)致的酒精性肝病、轉(zhuǎn)氨酶升高、營養(yǎng)不良、維生素B缺乏、電解質(zhì)紊亂等都可能影響藥物的正常代謝和功效。

在本次實(shí)驗(yàn)初期，將6%乙醇水溶液作為唯一飲水源強(qiáng)制喂養(yǎng)8周，保障了大鼠有足量的乙醇消耗；后期進(jìn)行嗜酒與非嗜酒的篩選，促進(jìn)嗜酒大鼠進(jìn)一步消耗乙醇，確保酒精依賴的形成。經(jīng)過評估，共有23只大鼠進(jìn)入飲酒組，成功率46.00%；4周后，飲酒組大鼠乙醇消耗量從3.05 g/（kg·d）上升并維持在4.00 g/（kg·d）以上，逐漸形成酒精依賴，與Carnicella S等[6]報(bào)道的該模型成功率在50.00%左右以及酒精消耗最終可維持在（4.8±0.4） g/（kg·d）的結(jié)果一致。

本研究的每項(xiàng)步驟由專人操作，所用設(shè)備、藥物均已固定，流程采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，只單一接受丙泊酚麻醉，保證了麻醉效應(yīng)的均一性，實(shí)驗(yàn)程序可靠。飲酒組大鼠在接受6%、20%乙醇飼養(yǎng)后與正常對照組大鼠體質(zhì)量相比，未見明顯差異，排除其他非處理因素后，可認(rèn)為3組大鼠間測得的丙泊酚的ED50不同，是由乙醇作用引起。本次實(shí)驗(yàn)采用序貫法而未用傳統(tǒng)的Bliss法測定丙泊酚的ED50，是因?yàn)樾蜇灧ㄟm用于反應(yīng)快速的藥物并可節(jié)約大量實(shí)驗(yàn)動物[10]，其測定結(jié)果與傳統(tǒng)方法測算值并無明顯差異。結(jié)果顯示，兩次測定對照組丙泊酚的ED50分別為5.623 mg/kg和5.297 mg/kg，與Chen X等[11]測定的ED50數(shù)值6.02 mg/kg相比偏小，可能原因是：本次實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)周期長，大鼠鼠齡較大，對丙泊酚麻醉作用較為敏感。測得酒精組、酒精戒斷組大鼠丙泊酚的ED50分別為9.563、4.086 mg/kg，分別比對照組大鼠劑量增加70.11%和減少22.83%，提示丙泊酚對酒精依賴大鼠的麻醉作用降低，而對酒精戒斷組大鼠的麻醉作用增強(qiáng)。

孫林浩等[12]發(fā)現(xiàn)，50%乙醇灌胃后小鼠再以丙泊酚腹腔注射，麻醉持續(xù)時(shí)間延長，表明酒精與丙泊酚產(chǎn)生協(xié)同作用，加強(qiáng)中樞抑制，與本實(shí)驗(yàn)酒精依賴大鼠丙泊酚ED50增加即麻醉作用降低，出現(xiàn)相反的結(jié)果。其原因可能是：乙醇作為大腦皮層活動的抑制物具有兩面性，食用少量乙醇將導(dǎo)致腦組織皮層下中樞脫抑制性興奮，出現(xiàn)控制力降低、情緒高漲、精神亢奮等欣快表現(xiàn)，但食用大量乙醇會影響大腦供血[13]，引起中樞神經(jīng)的抑制作用。以50%乙醇灌胃的小鼠已呈中樞神經(jīng)抑制狀態(tài)，再注射丙泊酚作用時(shí)間必然延長。而本實(shí)驗(yàn)酒精依賴大鼠自由飲用乙醇水溶液，只是滿足精神和軀體上的渴求，當(dāng)食用乙醇到達(dá)欣快狀態(tài)時(shí)不再進(jìn)一步飲用，大鼠此時(shí)處于興奮狀態(tài)，需要加大丙泊酚劑量才能起到麻醉效果。另外，正常情況進(jìn)入體內(nèi)的丙泊酚約有20%經(jīng)由肝臟微粒體乙酸化系統(tǒng)（MEOS）路徑代謝，長期乙醇作用而未發(fā)生乙醇性肝損害時(shí)，MEOS路徑活性異常增強(qiáng)，會對通過該路徑的丙泊酚消除具有明顯促進(jìn)作用[14]。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對照組、酒精依賴組和酒精戒斷組大鼠肝功能以及肝組織病理學(xué)形態(tài)未見明顯差異，表明大鼠給予乙醇后尚未對肝造成損害，而激活的MEOS路徑加快了丙泊酚的代謝，使丙泊酚ED50增加。除此以外，乙醇可以改變中樞神經(jīng)多種神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺、谷氨酸、多巴胺、去甲腎上腺素傳遞功能[15]；γ-氨基丁酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的抑制性遞質(zhì)，γ-氨基丁酸受體又是乙醇作用的主要靶點(diǎn)之一，乙醇可使γ-氨基丁酸受體表達(dá)下調(diào)[16]，這些機(jī)制也在某些方面影響了丙泊酚的麻醉作用，造成丙泊酚ED50發(fā)生改變。

酒精戒斷后易誘發(fā)AWS，一般出現(xiàn)在末次飲酒后1～3 d[17]，其主要表現(xiàn)是自主神經(jīng)活性增強(qiáng)，意識、動作和神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀[18]，此次測定酒精戒斷24 h丙泊酚的ED50明顯低于酒精依賴組與正常對照組，可能也是軀體已發(fā)生變化的一個(gè)佐證。長期大量飲酒者顱腦磁共振成像顯示出現(xiàn)腦萎縮、腦白質(zhì)脫髓鞘病變、腦梗死等改變[19]，表明酒精對大腦產(chǎn)生不可逆的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。大鼠停止飲用乙醇后，初期適量的乙醇濃度使大鼠處于興奮狀態(tài)，彌補(bǔ)了缺失神經(jīng)元的部分功能，維持軀體正常或高于正常的興奮性，隨著時(shí)間延長乙醇濃度降低，使得原興奮穩(wěn)態(tài)不能得以保持，出現(xiàn)興奮性-抑制性的“反跳”，這也解釋了酒精戒斷后AWS迅速出現(xiàn)并在24 h左右緩慢恢復(fù)的現(xiàn)象。此時(shí)，大鼠主要表現(xiàn)為中樞抑制作用，少量丙泊酚即可發(fā)揮明顯抑制效能，麻醉作用在酒精戒斷期增強(qiáng)。

3組大鼠分別接受自身2倍ED50劑量的丙泊酚后，全部呈現(xiàn)麻醉狀態(tài)，說明測定的ED50數(shù)值有效、可靠。3組丙泊酚起效時(shí)間無明顯差異，而酒精戒斷組和酒精依賴組麻醉作用時(shí)間延長。酒精依賴組麻醉作用與活動完全恢復(fù)時(shí)間均較對照組和酒精戒斷組延長，可能與該組注射劑量較大有關(guān)。酒精戒斷組雖注射劑量較對照組少，但麻醉作用時(shí)間延長，可能與該組乙醇神經(jīng)細(xì)胞毒性持續(xù)存在、中樞興奮性受抑制有關(guān)。在20 min左右，3組大鼠自主活動均完全恢復(fù)，未對遠(yuǎn)期造成不良影響，即丙泊酚對3組大鼠均產(chǎn)生了有效的、可逆的麻醉作用。在注射2倍ED50劑量的丙泊酚前、后，大鼠呼吸頻率均在正常范圍之內(nèi)，各組FRR消失時(shí)呼吸頻率均較其他時(shí)間點(diǎn)減低，證實(shí)丙泊酚對呼吸有一定程度的抑制作用，但持續(xù)時(shí)間較短，未引發(fā)呼吸暫停等嚴(yán)重不良反應(yīng)。大鼠飲食量、體質(zhì)量在注射自身2倍ED50劑量丙泊酚前和注射后48 h未出現(xiàn)明顯變化，也說明單次使用丙泊酚對大鼠生理行為未造成不良影響。

綜上所述，大鼠酒精依賴期間單次靜脈注射丙泊酚，丙泊酚的ED50增加。大鼠酒精戒斷期間單次靜脈注射丙泊酚，丙泊酚的ED50減少。對酒精依賴、酒精戒斷的大鼠，根據(jù)病情調(diào)整丙泊酚的用量，也是比較安全的。但本研究僅對高飲酒水平雄性大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以后可在雌性、中-低飲酒水平大鼠方面做進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 中國新聞網(wǎng).世界衛(wèi)生組織發(fā)布酒精與健康全球狀況報(bào)告[EB/OL].（2014-05-14）[2017-10-22].http：//www.chinanews.com/wine/2014/05-14/6167445.shtml.

[ 2 ] KHANNA JM， KALANT H， SHAH G， et al. Tolerance to ethanol and cross-tolerance to pentobarbital and barbital in four rat strains[J]. Pharmacol Biochem Behav，1991，39（3）：705-709.

[ 3 ] SELLERS EM， BUSTO U. Benzodiazepines and ethanol： assessment of the effects and consequences of psychotropic drug interactions[J]. J Clin Psychopharmacol，1982，2（4）：249-262.

[ 4 ] 中華醫(yī)學(xué)會麻醉學(xué)分會老年人麻醉學(xué)組.中國老年患者圍術(shù)期麻醉管理指導(dǎo)意見[J].國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志，2014，35（10）：870-881、901.

[ 5 ] LUCCHI L， MORESCO RM， GOVONI S， et al. Effect of chronic ethanol treatment on dopamine receptor subtypes in rat striatum[J]. Brain Res，1988，449（1/2）：347- 351.

[ 6 ] CARNICELLA S，RON D，BARAK S. Intermittent ethanol access schedule in rats as a preclinical model of alcohol abuse[J]. Alcohol，2014，48（3）：243-252.

[ 7 ] 王慎軍.慢性飲酒及戒斷致大鼠背側(cè)紋狀體突觸可塑性變化的研究[D].南京：南京醫(yī)科大學(xué)，2009.

[ 8 ] JUNG H，CHOI SC. Sequential method of estimating the LD50 using a modified up-and-down rule[J]. J Biopharm Stat，1994，4（1）：19-30.

[ 9 ] 周毅，楊俊，康儀，等.異丙酚前藥HX0891和HX0892在大鼠體內(nèi)的初步藥效學(xué)評價(jià)[J].華西藥學(xué)雜志，2012，27（1）：45-47.

[10] 王海燕， 楊俊， 殷望， 等. 丙泊酚前藥HX0969w及磷丙泊酚鈉與丙泊酚乳劑灌胃對大鼠的鎮(zhèn)靜催眠效應(yīng)及其安全性比較[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2015，46（2）： 214-217.

[11] CHEN X，YAN R，BAI Z，et al. Enhanced sedative efficacy and delayed recovery in propofol anesthesia in a rat model of hepatic cirrhosis[J]. Int J Clin Exp Med，2015，8（4）：5723-5730.

[12] 孫林浩，袁玲，張露露，等.乙醇對丙泊酚催眠效應(yīng)的影響[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，35（8）：497-499.

[13] 高俊.酒精中毒致精神障礙患者腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)功能研究[J].國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志，2015，42（5）：439- 442.

[14] CICHOZ-LACH H，PARTYCKA J，NESINA I，et al. Genetic polymorphism of alcohol dehydrogenase 3 in digestive tract alcohol damage[J]. Hepatogastroenterology，2007，54（76）：1222-1227.

[15] ANDERSON PD，BOKOR G. Forensic aspects of drug-induced violence[J]. J Pharm Pract，2012，25（1）：41-49.

[16] HEMBY SE，OCONNOR JA，ACOSTA G，et al. Ethanol-induced regulation of GABA-A subunit mRNAs in prefrontal fields of cynomolgus monkeys[J]. Alcohol Clin Exp Res，2006，30（12）：1978-1985.

[17] PERRY EC. Inpatient management of acute alcohol withdrawal syndrome[J]. CNS Drugs，2014，28（5）：401-410.

[18] JESSE S，BRATHEN G， FERRARA M， et al. Alcohol withdrawal syndrome： mechanisms， manifestations， and management[J]. Acta Neurol Scand， 2017，135（1）：4-16.

[19] 崔益明，吳德軍.鹽酸納美芬治療急性酒精中毒昏迷患者的臨床觀察[J].中國藥房，2014，25（12）：1103-1105.

（收稿日期：2017-10-30 修回日期：2018-02-07）

（編輯：鄒麗娟）