沈靜靜 金國璽

【摘要】目的 探討T2DM患者血清中PCSK9水平與血脂等動(dòng)脈硬化危險(xiǎn)因素之間的關(guān)系，以及動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病中PCSK9與IL-6、IL18等炎癥因子是否存在相關(guān)性。方法 采用橋聯(lián)ABC-ELISA夾心法檢測60例T2DM患者和28例正常對照組血清中PCSK9水平以及IL-6、IL18的水平，同時(shí)對T2DM組血清PCSK9水平的相關(guān)因素行Person相關(guān)性分析。結(jié)果 2型糖尿病大血管病變組（B組）與2型糖尿病無血管病變組（A組）患者血清中PCSK9水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；2型糖尿病患者血清中PCSK9水平與TC、LDL-C、TG、FBG、SBG等存在顯著正相關(guān)關(guān)系，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2型糖尿病患者血清中PCSK9的表達(dá)與左側(cè)頸總動(dòng)脈IMT、右側(cè)頸總動(dòng)脈IMT、平均總動(dòng)脈IMT、RCCA內(nèi)徑、RCCARI及LCCARI等均存在顯著正相關(guān)關(guān)系（P<0.05），與RCCA V max、LCCA V max、RCCA V mix、RICA V mix等頸動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性指標(biāo)呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。PCSK9水平與IL-6、IL18等炎癥因子存在顯著正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。結(jié)論 2型糖尿病患者血清中PCSK9的表達(dá)增加，提示PCSK9可能在糖尿病大血管病變過程中起一定的作用，與IL-6、IL18共同作用加速糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】PCSK9；動(dòng)脈粥樣硬化；炎癥因子；IL-6；IL18

【中圖分類號(hào)】R54 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2018.09..02

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016～2017年住院及門診T2DM組患者60例，男32例，女28例，其入選完全符合當(dāng)前國際公認(rèn)的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡32～76歲，平均（57.50±8.16）歲，然后依據(jù)他們是否合并糖尿病血管病變，再將其分為兩組，一組是大血管病變組30例（B組，男14例，女16例）；另一組是無血管病變組30例（A組，男18例，女12例）。其中，符合大血管病變診斷的患者必須應(yīng)最少滿足以下一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)：（1）心肌梗死或者有心絞痛或病史，并通過動(dòng)態(tài)心電圖和超聲心動(dòng)圖等技術(shù)手段明確診斷的臨床冠心??；（2）有腦血管意外病史，頭顱CT或MRI掃描明確有缺血病灶；多普勒超聲檢查可見頸或雙下肢動(dòng)脈血管壁硬化斑塊或血栓形成或動(dòng)脈廣泛不規(guī)則狹窄；下肢缺血性臨床表現(xiàn)（間歇性跛行、缺血性疼痛、壞疽等）。正常對照組28例（男14例，女14例），為同期查體健康者，年齡36～67歲，平均（55.14±7.23）歲，空腹及餐后2 h血糖均正常。組間年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 臨床資料

①臨床資料收集：受試者經(jīng)10 h過夜空腹，到醫(yī)院休息20 min，測量血壓、體重、身高、腰圍、臀圍，并行心電圖、心臟彩超、雙下肢、雙頸動(dòng)脈及腦血管彩色多普勒超聲檢查，包括右側(cè)頸總動(dòng)脈IMT（RCCA IMT）、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈IMT（RICA IMT）、左側(cè)頸總動(dòng)脈IMT（LCCA IMT）、左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈IMT（LICA IMT）、平均總動(dòng)脈IMT、RCCA內(nèi)徑、RICA內(nèi)徑、LCCA內(nèi)徑、LICA內(nèi)徑、右側(cè)頸總動(dòng)脈阻力指數(shù)（LICA RI）、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈阻力指數(shù)（RICA RI）、左側(cè)頸總動(dòng)脈阻力指數(shù)（LCCA RI）、左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈阻力指數(shù)（LICA RI）、右側(cè)頸總動(dòng)脈最大血流速度（RCCA V max）、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈最大血流速度（RICA V max）、左側(cè)頸總動(dòng)脈最大血流速度（LCCA V max）、左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈最大血流速度（LICA V max）、右側(cè)頸總動(dòng)脈舒張末期速度（RCCA V mix）、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈舒張末期速度（RICA V mix）、左側(cè)頸總動(dòng)脈舒張末期速度（LCCA V mix）、左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈舒張末期速度（LICA V mix）等。②生化指標(biāo)的檢測：經(jīng)12 h過夜空腹抽取肘前靜脈血檢測各種指標(biāo)，包括血脂（生化比色法）、血糖（葡萄糖氧化酶法）、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、糖基化血紅蛋白（HbA1c）。③血清PCSK9水平的收集與測定：將全血樣品放置于室溫2小時(shí)或者在4℃溫度下好過12小時(shí)后于1000×g離心20分鐘，然后取上清檢測，本實(shí)驗(yàn)中收集血液的試管必須滿足以下兩點(diǎn)：第一，無熱原；第二，無內(nèi)毒素，用抗人PCSK9抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品中的人PCSK9會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人PCSK9抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。④血清IL6、IL18水平的收集與測定：方法同PCSK9。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件，計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 T2DM各亞組與正常對照組各檢測指標(biāo)比較

T2DM無大血管病變組（A組）的血漿收縮壓、FBG、TC、HDL、LDL、LDL-C、TG、HbA1c、PCSK9、IL-6、IL-18水平較正常對照組顯著升高（P值分別為0.039、0.000、0.032、0.000、0.045、0.065、0.003、0.000、0.000、0.000、0.003）；T2DM合并大血管病變組（B組）的血漿收縮壓、FBG、TC、HDL、LDL、LDL-C、TG、HbA1c、PCSK9、IL-6、IL-18水平較正常對照組顯著升高（P值分別為0.002、0.000、0.002、0.000、0.002、0.002、0.003、0.002、0.000、0.000、0.000、0.000）；T2DM合并大血管病變組（B組）的血漿PCSK9、IL-6、IL-18水平較T2DM無大血管病變組（A組）顯著性升高（P值分別為0.001、0.004、0.018）。

2.2 三組患者血清PCSK9水平

三組患者血清PCSK9水平與SBP、TC、LDL-C、TG、FBG等動(dòng)脈粥樣硬化的常見危險(xiǎn)因素呈顯著正相關(guān)關(guān)系，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而與HDL呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系：三組患者血清PCSK9水平與一般指標(biāo)的相關(guān)性分析（n=88）

2.3 2型糖尿病患者的血清PCSK9水平

2型糖尿病患者的血清PCSK9水平與右側(cè)頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（RCCA IMT）、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（RICA IMT）、左側(cè)頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（LCCA IMT）、左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（LICA IMT）及平均總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（MCA IMT）均存在顯著正相關(guān)關(guān)（P<0.05），與RCCA內(nèi)徑、RICA內(nèi)徑、LCCA 內(nèi)徑、LICA內(nèi)徑、RICA Vmax 、LICA R I、RICA R I、LCCA RI等頸動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性指標(biāo)也呈顯著正相關(guān)關(guān)系（P<0.05），與RCCA V max、LCCA V max、LICA V max、RCCA V mix、RICA V mix、LCCA V mix、LICA V mix等頸動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性指標(biāo)呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。

2.4 2型糖尿病伴有大血管病變患者血清PCSK9水平

2型糖尿病伴有大血管病變患者血清PCSK9水平與IL6、IL18呈顯著正相關(guān)關(guān)系（P<0.05），而2型糖尿病無大血管病變及健康組血清PCSK9水平與IL6、IL18無明顯相關(guān)關(guān)系，見表1。

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者的 PCSK9水平與IL-6、IL-18水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系。而糖尿病有大血管病變者PCSK9水平也比糖尿病無并發(fā)癥組明顯升高，提示PCSK9可能在糖尿病大血管病變過程中起一定的作用。其中有一些和炎癥有關(guān)系的基因表達(dá)，如IL-17B、LCK、TNFRSuperfamilyMember 3及MKK6等處于PCSK9 基因的下游調(diào)控之列。功能獲得型突變 D374Y-PCSK9 基因分析也表明PCSK9調(diào)節(jié)LDL時(shí)出現(xiàn)某些特殊炎癥反應(yīng)，可能與p38MAPK信號(hào)通路有關(guān)[3]。PCSK9 siRNA能夠抑制ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞炎癥因子IL-1α、IL-6和TNF-α表達(dá)，其機(jī)制與抑制NF-κB核位移有關(guān)，提示PCSK9可能參與了炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)[4]。

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本文編輯：吳宏艷