李桂紅，李二虎，張 武，趙 瑞，李 俊，程 媛

[農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(天津)，天津 300061]

氯蟲苯甲酰胺是美國杜邦公司近年研究開發(fā)成功的殺蟲劑，屬鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲劑。該劑主要激活魚尼汀受體，釋放平滑肌和橫紋肌細(xì)胞內(nèi)貯存的鈣離子，引起肌肉調(diào)節(jié)衰弱，肌肉麻痹，直至最后害蟲死亡。氯蟲苯甲酰胺對鱗翅目害蟲的幼蟲活性高，殺蟲譜廣，持效性好，具有長而穩(wěn)定的對作物的保護作用。防治水稻主要害蟲時，迅速保護水稻，尤其對其他水稻殺蟲劑產(chǎn)生抗性的害蟲有特效，如稻縱

卷葉螟、二化螟、三化螟、大螟，對稻癭蚊、稻象甲、稻水象甲也有很好的防治效果。該農(nóng)藥屬微毒級，對施藥人員非常安全，對稻田有益昆蟲、魚蝦也非常安全。持效期可以達(dá)到15 d以上，對農(nóng)產(chǎn)品無殘留影響，同其他農(nóng)藥混和性能好[1]。

1 試驗方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

TSQ Quantum Access三重四極桿串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用儀(Thermo Fisher Scientific公司)；高速勻漿機(IKA?-WERKE, T25 basic)；水浴氮吹儀(N-EVAP111,Organomation Associates, Jnc.)。

1.1.2 試劑與材料

氯蟲苯甲酰胺標(biāo)樣(1 000 mg/L)、甲醇、乙腈均為 HPLC 級(Merck，Darmstadt，Germany)，二氯甲烷、氯化鈉(140 ℃烘烤4 h)均為分析純；娃哈哈純凈水；氨基柱(Cleanert NH2-SPE；500 mg/6 mL)；0.22 μm過濾膜。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

將氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇配置成濃度為100 mg/L作為儲備液。系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液用甲醇配制(現(xiàn)用現(xiàn)配)。

1.1.4 色譜與質(zhì)譜條件

色譜條件：色譜柱：Hypersil Gold(2.1×100 mm)；柱溫：室溫；流動相采用梯度洗脫(洗脫參數(shù)見表1)；進(jìn)樣體積：5 μL。

表1 梯度洗脫參數(shù)

質(zhì)譜條件：ESI正離子模式；噴霧電壓4000V；離子傳輸毛細(xì)管溫度：350 ℃；鞘氣：35 psi；采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)掃描模式。質(zhì)量條件參數(shù)見表2。

表2 質(zhì)譜質(zhì)量條件參數(shù)

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品提取

稱取果蔬(粉碎樣)樣品25.00 g，置于125 mL的廣口瓶中，加入50 mL乙腈，高速勻漿1 min，然后過濾到100 mL的具塞量筒中，加入6 g氯化鈉，振搖提取2 min，靜置分層后，分離有機相和水相，量取有機相10 mL于60 ℃水浴上氮吹至近干，殘余用洗耳球吹干。用2 mL二氯甲烷+甲醇(95︰5，體積比)混合液溶解，待凈化。

1.2.2 樣品凈化

凈化用氨基柱，先用 5 mL二氯甲烷+甲醇(95︰5，體積比)的混合溶液預(yù)淋柱子，當(dāng)溶液到達(dá)吸附層表面時，立即將上述濃縮液加至柱中，并用刻度試管接洗脫液，用上述混合液5 mL洗滌3次，收集全部淋洗液。將收集的洗脫液在45 ℃水浴氮吹至近干，用甲醇準(zhǔn)確定容至5 mL，用0.22 μm濾膜過濾，待上機。

1.2.3 測定步驟

在1.1.4色譜工作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)行色譜分析。采用外標(biāo)法對樣品進(jìn)行定量分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 洗脫液選擇

本方法選用二氯甲烷+甲醇(95︰5，體積比)作為凈化洗脫溶液。當(dāng)用5 mL洗脫液洗脫2次時回收率最佳，且雜質(zhì)影響不大。

2.2 流動相選擇

本方法對流動相條件進(jìn)行了優(yōu)化，采用梯度洗脫，使得峰型得到了很好的改善，并且能夠使氯蟲苯甲酰胺和雜質(zhì)得到很好的分離，效果比較理想。

2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

根據(jù)氯蟲苯甲酰胺分子的結(jié)構(gòu)，選擇 ESI(＋)作為電離化模式，將氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成1.0 μg/mL的甲醇溶液，通過全掃描模式找出母離子。

使用二級掃描的方式根據(jù)母離子選擇特征離子，選用離子強度較大的2個子離子作為定量和輔助定性離子，并優(yōu)化其碰撞能量，最后在SRM方式中進(jìn)一步驗證碰撞能量。最終選擇的母離子、特征離子和碰撞能量詳見表2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

2.4 分析方法的線性相關(guān)測定

在上述確定的色譜條件下，氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)樣品譜圖見圖1。用甲醇將氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液配制成 10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0 μg/L 系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。將系列濃度分別進(jìn)樣5 μL，在液質(zhì)聯(lián)用儀上測定峰面積，每個濃度測得的峰面積與對應(yīng)的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氯蟲苯甲酰胺的濃度在10.0～320.0 μg/L呈良好的線性關(guān)系，線性方程為 y=21 154x－188 580，R2=0.995 3 (圖 2)。

圖2 氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度、回收率試驗

采用添加法，在表3所列無雜質(zhì)干擾的空白樣中添加已知含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述的色譜條件下進(jìn)行測定，添加量0.04 mg/kg、0.08 mg/kg和0.16 mg/kg，測得花椰菜等11種果蔬樣品添加回收率為70.60%～116.42%，色譜圖如圖3～圖13，表明本方法對花椰菜等 11種果蔬中氯蟲苯甲酰胺農(nóng)藥殘留的測定靈敏度高，操作簡單，定量準(zhǔn)確。具體數(shù)據(jù)見表3。

3 結(jié) 論

本文選用LC-MS/MS法的SRM方式檢測花椰菜等11種果蔬中的氯蟲苯甲酰胺，用固相萃取柱凈化，過濾后進(jìn)行分析，方法簡便、快速。

表3 花椰菜等11種果蔬中氯蟲苯甲酰胺添加回收率(n=5)

圖3 花椰菜樣品添加回收譜圖

圖4 蘋果樣品添加回收譜圖

圖5 甘藍(lán)樣品添加回收譜圖

圖6 油菜樣品添加回收譜圖

圖7 姜樣品添加回收譜圖

圖8 馬鈴薯樣品添加回收譜圖

圖9 芹菜樣品添加回收譜圖

圖10 菜豆樣品添加回收譜圖

圖11 黃瓜樣品添加回收譜圖

圖12 西葫蘆樣品添加回收譜圖

圖13 草莓樣品添加回收譜圖

采用三重四極桿質(zhì)譜的選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)方式，確定其母離子，經(jīng)碰撞能量優(yōu)化試驗確定特征離子，獲得極高的檢測靈敏度。

經(jīng)試驗驗證，在10.0～320.0 μg/L，氯蟲苯甲酰胺的相關(guān)系數(shù)為0.995 3，回收率為70.60%～116.42%，精密度小于15.2%。

綜上所述，本方法可適用于花椰菜等11種果蔬的測定，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點，方法靈敏度高、選擇性更優(yōu)、重現(xiàn)性更好。