忽俊，唐建明，王麗，熊毅，黃潔，顧永順

臨床已發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)黑白翻轉(zhuǎn)刺激圖像視覺(jué)誘發(fā)電位不能辨別早期的中心視力未受損的視神經(jīng)功能異常。但這些早期中心視力尚好的視神經(jīng)系統(tǒng)疾病多數(shù)已出現(xiàn)色覺(jué)異常。彩色圖形視覺(jué)誘發(fā)電位（Chromatic pattern visual evoked potential,CP-VEP）是采用彩色光譜刺激達(dá)到分離視覺(jué)系統(tǒng)色覺(jué)通路的電生理技術(shù)[1]。CP-VEP檢查可以對(duì)色覺(jué)功能神經(jīng)通路的完整性進(jìn)行評(píng)估，因而有助于在中心視力尚未受損的視路疾?。ㄈ缭缙谇喙庋?，輕度的眼視神經(jīng)鈍挫傷，色覺(jué)異常的嬰幼兒等）早期發(fā)現(xiàn)、診斷和鑒別診斷先天性色覺(jué)異常以及某些疾病所致的色覺(jué)改變[2,3]。本研究中應(yīng)用黑-白、紅-黑及綠-黑三種不同色彩刺激模式檢查不同年齡段受檢者正常視力眼，以比較所得峰時(shí)及振幅情況，通過(guò)圖形分析確定不同年齡段正常視力人群CP-VEP正常參考值及對(duì)CP-VEP的檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用可行性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

納入50名正常視力眼志愿者（共99只眼），年齡3～90歲，平均31.84歲，其中男26人，女 24人。兒童組（3～14歲）19人38只眼，平均年齡6.26歲；青少年及青年組（15～30歲）9人18只眼，平均年齡22.22歲，其中 15～18歲 4人，18～30歲 5人；中年組（31～60歲）11人21只眼，其中1人因1眼為弱視眼而只納入1眼，平均年齡42.45歲；老年組（61～90歲）11人22只眼，平均73.27歲。所有被納入者進(jìn)行裸眼視力（國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)視力表）、色覺(jué)、眼球活動(dòng)、注視性質(zhì)及常規(guī)前后節(jié)檢查。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）無(wú)全身性疾病，排除被檢查眼的眼科疾患；（2）國(guó)際視力表檢查被檢查眼裸眼視力均≥1.0；（3）眼前節(jié)、眼底、眼球活動(dòng)度、中心注視、視網(wǎng)膜對(duì)應(yīng)均正常；（4）色覺(jué)檢查采用 《色覺(jué)檢查圖》，排除色覺(jué)異常者；（5）了解臨床試驗(yàn)情況并簽訂知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在全身系統(tǒng)性疾病，如高血壓病、糖尿病、其他心腦血管病病等；（2）被檢查眼存在眼部疾病，角結(jié)膜病，白內(nèi)障，青光眼、視神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變等；（3）視力表檢查被檢眼裸眼視力<1.0；（4）存在色覺(jué)異常者；（5）中途要求退出臨床實(shí)驗(yàn)者；（6）檢查配合困難者。

1.2 P-VEP檢查方法

檢查設(shè)備及設(shè)置：采用ROLAND CONSULT Stasche&Finger GmbH公司生產(chǎn)的視覺(jué)電生理檢查系統(tǒng)RETI-scan（型號(hào)ISCEV60）。視覺(jué)刺激器為24英寸顯示器，屏幕亮度100 cd/m2，對(duì)比度99%，分辨率800×600。刺激模式：全視野模式刺激，黑白格圖形翻轉(zhuǎn)，翻轉(zhuǎn)頻率3.2 Hz，背景光照度3~5 lx，平均疊加次數(shù)為128次，分析時(shí)間為250 ms，濾波通頻帶寬為0.1~500 Hz。陰極射線管（CRT）顯示器與受檢眼的距離設(shè)定為100 cm。測(cè)試房間平均光亮度80 cd/m2。

刺激條件設(shè)定：用計(jì)算機(jī)軟件編輯設(shè)置紅、綠兩種純色，亮度為30 cd/m2，用PR-650分光測(cè)色計(jì)標(biāo)定紅光波長(zhǎng)624 nm，綠光波長(zhǎng)544 nm分別為長(zhǎng)波長(zhǎng)及中波長(zhǎng)光，同時(shí)選用最高亮度白色（亮度為130 cd/m2）、最低亮度黑色（亮度為10 cd/m2）。將上述四色制成黑-白、黑-紅、黑-綠三種棋盤格翻轉(zhuǎn)圖形刺激模式，并將三種刺激模式亮度對(duì)比度均調(diào)至99%，以消除亮度對(duì)比因素的影響，而觀察單純色覺(jué)刺激特點(diǎn)。

棋盤格翻轉(zhuǎn)的時(shí)間頻率為1 Hz，空間頻率為32.4′，受檢者距離刺激屏63 cm，屏幕水平視角為32°。接受檢查時(shí)，受試者身處安靜、相對(duì)封閉的正常熒光燈照明檢查室，室內(nèi)光照度約為300 lux。

檢測(cè)方法：在屏蔽良好的專用電生理檢查室接受檢查。暗室環(huán)境自然瞳孔。電極的放置采用國(guó)際電生理協(xié)會(huì)建議使用的標(biāo)準(zhǔn)10-20系統(tǒng)電極放置法，記錄電極為金箔盤狀電極，單極導(dǎo)聯(lián)記錄，作用電極1個(gè)，記錄電極安放在枕骨粗隆上1 cm處皮膚面，參考電極放置于前額正中發(fā)際線下5 mm，接地電極放置于耳后乳突區(qū)皮膚面，安置電極前用75%乙醇及電極膏擦洗皮膚，阻抗控制在10 kΩ以下。讓受檢眼分別接受黑-白、黑-紅、黑-綠三種棋盤格翻轉(zhuǎn)圖形模式刺激，一種模式刺激后讓受檢眼閉目休息1 min，再行另一模式刺激，分別記錄所誘發(fā)的波形。檢測(cè)時(shí)單眼檢測(cè)，對(duì)側(cè)眼遮蓋，注視屏幕中央紅色十字交叉線中心點(diǎn)，每只眼測(cè)試均重復(fù)3次，由同一熟練技術(shù)人員進(jìn)行檢查，觀察受試者是否有良好的可重復(fù)性，重復(fù)性差者被篩除。

觀察指標(biāo)：以P-VEP波形的P100波的潛伏期和振幅為觀察指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)室中所記錄到的P-VEP波形顯示為負(fù)波朝下，正波朝上，潛伏期單位為ms，測(cè)量從刺激開始到相關(guān)成分波的波峰 （或波谷）的頂點(diǎn)，振幅的單位是μv，該視覺(jué)電生理檢測(cè)系統(tǒng)采用從基線到波峰或波谷頂點(diǎn)的測(cè)量方式。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。不同刺激模式比較采用重復(fù)測(cè)量資料方差分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，差異比較采用t檢驗(yàn)，同一空間頻率的組間比較采用單因素方差分析，以p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，當(dāng)p＜0.05時(shí)進(jìn)行兩兩比較，采用LSD法。

2 結(jié)果

2.1 不同色彩刺激模式對(duì)四個(gè)年齡組P-VEP的P100波潛伏期的影響

四組不同年齡志愿者在三種不同色彩刺激模式下所誘發(fā)的P-VEP波形相似而穩(wěn)定，其中P100波潛伏期在不同年齡段以及不同色彩刺激模式下均存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （重復(fù)測(cè)量資料的方差分析：F分組=12.273，p＜0.001;F色彩刺激模式=37.67，p＜0.001;F交互作用=2.125，P=0.052）。從整體看，老年組 P100波潛伏期＞青少年組＞中年組＞兒童組（兩兩比較法，LSD法）；同時(shí)黑紅刺激模式P100波潛伏期＞黑綠刺激模式＞黑白刺激模式（不同色彩刺激模式兩兩比較，LSD法）（見表1）。兩兩比較采用LSD法，在黑白模式下青少年組與中年組比較P=0.059，余其它年齡組兩兩比較，P均＜0.05；在黑綠模式下青少年組與與中年組相比，P=0.098，余其它年齡組兩兩比較，均為p＜0.05；在黑紅模式下各年齡組兩兩比較，均為P＞0.05。

表1 三種色彩刺激模式下不同年齡正常眼P-VEP P100波潛伏期比較,ms)

表1 三種色彩刺激模式下不同年齡正常眼P-VEP P100波潛伏期比較,ms)

注：*在黑白模式下青少年組與中年組比較P=0.059，余其它年齡組兩兩比較，均為p＜0.05；#在黑綠模式下青少年組與與中年組相比，P=0.098，余其它年齡組兩兩比較，均為p＜0.05。P-VEP：圖形視覺(jué)誘發(fā)電位

組別 眼數(shù) 色彩刺激模式黑白 黑綠 黑紅116.05±16.64 116.50±5.45 115.38±5.41 121.41±6.52 F值P值兒童組（3～14 歲）青少年組（15～30 歲）中年組（31～60 歲）老年組（61～90 歲）38 18 21 22 103.29±3.82 111±2.03*108.38±4.01 114.82±6.14 107.79±3.57#113.55±5.1 109.85±3.88 116.45±5.99 1.342 0.265 37.1＜0.001 19.06＜0.001

2.2 不同色彩刺激模式對(duì)四個(gè)年齡組P-VEP的P100波振幅的影響

四組不同年齡志愿者在三種不同色彩刺激模式下所誘發(fā)的P-VEP波形中P100波振幅在不同年齡段以及不同色彩刺激模式下均存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（重復(fù)測(cè)量資料的方差分析：F分組=227.537，p＜0.001;F色彩刺激模式=492.923，p＜0.001;F交互作用=87.832，p＜0.001）。從整體看來(lái)，兒童組P100波振幅＞青少年組＞中年組＞老年組（兩兩比較法，LSD法）；同時(shí)黑白刺激模式P100波振幅＞黑綠刺激模式＞黑紅刺激模式（不同色彩刺激模式兩兩比較，LSD 法，p＜0.05）（見表2）

表2 三種色彩刺激模式下不同年齡正常眼P-VEP P100波振幅比較(,μv)

表2 三種色彩刺激模式下不同年齡正常眼P-VEP P100波振幅比較(,μv)

注：*在黑白模式下，中年組與老年組比較P=0.154，余其它年齡組兩兩比較，均為p＜0.05。P-VEP：圖形視覺(jué)誘發(fā)電位

組別 眼數(shù) 色彩刺激模式黑白 黑綠 黑紅23.03±4.71 10.95±2.25 8.31±2.75 6.18±1.99 F值P值兒童組（3～14 歲）青少年組（15～30 歲）中年組（31～60 歲）老年組（61～90 歲）38 18 21 22 45.16±8.54 19.85±3.12 14.33±3.99*11.71±3.13 33.12±5.62 14.84±2.96 10.75±2.76 8.02±1.99 205.503＜0.001 243.329＜0.001 147.818＜0.001

3 討論

色覺(jué)是十分重要的一種視覺(jué)功能，其通路在人類出生后早期即開始發(fā)育，直至青年時(shí)期趨于穩(wěn)定[4]。多種累及視神經(jīng)或視覺(jué)通路的疾病在早期即可出現(xiàn)色覺(jué)功能的障礙，但這種早期障礙通常難以通過(guò)色盲檢查表檢測(cè)出來(lái)，在無(wú)法用語(yǔ)言表達(dá)的嬰幼兒患者，色覺(jué)功能的檢查存在更大的難度。既往已有研究發(fā)現(xiàn)在青光眼、眼外傷等視神經(jīng)損傷疾病中，單純應(yīng)用黑白翻轉(zhuǎn)刺激模式的P-VEP檢查以P100波峰潛時(shí)延長(zhǎng)或和波幅降低為觀察診斷指標(biāo)陽(yáng)性率較低[5]。為提高P-VEP檢測(cè)的陽(yáng)性率，應(yīng)用尋找最佳圖像刺激空間頻率和時(shí)間頻率的方法陽(yáng)性檢查率仍不理想[6]。近年來(lái)的研究提示，在尚未發(fā)現(xiàn)視野異常的青光眼早期病變以及輕度視神經(jīng)挫傷眼即存在獲得性色覺(jué)缺陷[7]，并證實(shí)視神經(jīng)病變時(shí)紅光刺激反應(yīng)較敏感[8]。為進(jìn)一步診斷眼病異常彩色P-VEP提供參考，本研究納入了不同年齡組人群，建立黑白、黑綠、黑紅三種色彩刺激模式分別對(duì)不同年齡組人群進(jìn)行刺激，觀察并分析比較所獲波形的特點(diǎn)，既往研究中尚未見有相同研究方式。

在研究中我們發(fā)現(xiàn)無(wú)論哪種色彩刺激模式下，不同年齡組所獲波形的P100潛伏期以及振幅的變化趨勢(shì)相同，這一點(diǎn)可以用視覺(jué)系統(tǒng)隨年齡增長(zhǎng)的發(fā)育特點(diǎn)進(jìn)行解釋。但在同年齡組內(nèi)不同色彩刺激模式所獲得的P100潛伏期以及振幅則存在顯著差異，在研究設(shè)定三種刺激模式有色光亮度相同且對(duì)比度相同的情況下，黑紅刺激模式所獲波形潛伏期較黑綠模式延長(zhǎng)，而黑綠刺激模式所獲潛伏期又較黑白刺激模式延長(zhǎng)，而振幅變化則表現(xiàn)出黑白刺激模式大于黑綠模式，而黑綠刺激模式所獲振幅大于黑紅刺激模式的特點(diǎn)。三種刺激模式間的波形差異均存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這提示本研究中所設(shè)計(jì)的三種對(duì)比度、亮度相同的色彩刺激模式有效的分離了色覺(jué)通路，也同時(shí)提示波長(zhǎng)越長(zhǎng)的有色光刺激所獲P-VEP的P100波潛伏期越長(zhǎng)而振幅越低。

CP-VEP是研究人類色覺(jué)的一種客觀檢測(cè)方法，對(duì)于早期累及色覺(jué)功能的多種眼病可能起到早期診斷的作用，使其發(fā)揮最大作用關(guān)鍵還在于方法學(xué)本身的進(jìn)一步發(fā)展和完善，本研究所獲不同年齡組人群的彩色P-VEP不同模式正常值將為臨床提供方法學(xué)及數(shù)據(jù)方面參考。