毛漫漫

（遼寧省遼陽縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，遼寧 遼陽 111200）

金黃色葡萄球菌在自然界中普遍存在，是日常生活中最為常見的一種致病菌，特別是在食品中，是引起毒素型食物中毒的主要原因。在人類日常食品中存在的金黃色葡萄球菌數(shù)量超出一定范圍，可導(dǎo)致食用者有出現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉、惡心及嘔吐等臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者還可導(dǎo)致食用者死亡[1]。本文主要分析了不同檢測方法在金黃色葡萄球菌檢測方面的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料：選擇當(dāng)?shù)厥袌黾俺袃?nèi)的生肉、熟肉制品、生牛奶、豆制品、水產(chǎn)品及糕點(diǎn)各40份作為樣品。用B-P培養(yǎng)基、平板計(jì)數(shù)瓊脂、金黃色葡萄球菌快速檢驗(yàn)測試片、營養(yǎng)肉湯、BHI（腦心浸液）肉湯、卵黃亞碲酸鉀增菌劑、鮮兔血漿、革蘭染液與抗凝劑進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)備包括無菌工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、振蕩器、水浴箱、天平、無菌均質(zhì)杯以及移液槍等。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備：B-P平板計(jì)數(shù)法操作內(nèi)容：在無菌環(huán)境下將樣品25 g放入無菌均質(zhì)杯（已提前裝入磷酸緩沖稀釋液225 mL），轉(zhuǎn)速為每分鐘8000 r均質(zhì)120 s，樣品均液為1∶10的固樣質(zhì)量比，使用平板計(jì)數(shù)實(shí)施測定，為了保證測定準(zhǔn)確定，每稀釋度重復(fù)操作2次。

1.2.2 B-P平板法：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)SNT0172-2010中進(jìn)出口食品金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)方法中的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行操作，將試驗(yàn)菌過夜培養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)物采用生理鹽水進(jìn)行稀釋，將合適菌濃度涂布于Baird-Parker平板上，取1 mL進(jìn)行接種，在接種后48 h對(duì)可疑菌落進(jìn)行挑取，將其置入BHI肉湯中，菌液在各培養(yǎng)基中的濃度為100～1000 cfu/mL，在36 ℃環(huán)境下進(jìn)行24～48 h培養(yǎng)，觀察其菌株情況并計(jì)數(shù)。

1.2.3 紙片法：在上層膜掀開后的測試片正中間使用移液槍將1 mL樣品均液垂滴上去，隨后緩慢的將上層膜覆蓋上，保證接觸面內(nèi)無氣泡，并使用壓板對(duì)壓板液進(jìn)行輕壓，確保樣品液能在圓形培養(yǎng)面上均勻的覆蓋，至少靜置1 min待膠體凝固后在14～36 ℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為22～24 h。若無菌落或均為暗紫紅色菌落，可視為測試完成。若為黑色或者藍(lán)綠色可疑菌落，可于34～36 ℃環(huán)境下繼續(xù)加入確認(rèn)反應(yīng)片，進(jìn)行1～3 h培養(yǎng)后觀察結(jié)果。金黃色葡萄球菌全部為暗紫紅色菌落；確認(rèn)片應(yīng)用后，計(jì)數(shù)全部有或沒有菌落的粉紅色暈圈，可視為革蘭桿菌或者其他，不進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)資料用SPSS19.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種測定方法金黃色葡萄球菌檢出率比較：紙片法金黃色葡萄球菌檢出率為31.67%，B-P平板法金黃色葡萄球菌檢出率為20.42%，兩組數(shù)據(jù)對(duì)比差異顯著（χ2=7.886，P=0.000），見表1。

2.2 兩種檢測方法檢測時(shí)長、成本及其他指標(biāo)比較：紙片法與B-P平板法相比，操作度更為簡便，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確度高、勞動(dòng)強(qiáng)度小，檢測時(shí)間較短，但成本高，見表2。

3 討 論

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），隸屬于葡萄球菌屬，是人類常見的一種病原菌，抵抗力較強(qiáng)，屬于典型的革蘭陽性菌。該病原菌對(duì)營養(yǎng)要求不高，但耐鹽性較高，所以容易造成乳品、水產(chǎn)品以及肉類污染[2]。金黃色葡萄球菌具有很強(qiáng)的致病力，經(jīng)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的耐熱腸毒素可造成食用者出現(xiàn)食物中毒，在細(xì)菌性食物中毒總發(fā)生率中排第三，僅次于沙門氏菌與副溶血性孤菌造成的食物中毒事件發(fā)生率[3]。

表2 兩種檢測方法檢測時(shí)長、成本及其他指標(biāo)比較

表1 對(duì)比兩種測定方法金黃色葡萄球菌檢出情況

B-P平板法、紙片法、MPN計(jì)數(shù)法及顯色培養(yǎng)基計(jì)數(shù)法等是定量檢測食品中金黃色葡萄球菌的主要方法，本文重點(diǎn)分析了B-P平板法、紙片法在食品中金黃色葡萄球菌檢測的應(yīng)用價(jià)值。紙片法金黃色葡萄球菌檢出率為31.67%，明顯高于B-P平板法20.42%的檢出率，兩數(shù)據(jù)對(duì)比差異顯著（P＜0.05）。因B-P平板法需要在接種后48 h對(duì)其平板進(jìn)行觀察，并將可疑的菌落轉(zhuǎn)種到BHI肉湯中培養(yǎng)18～24 h后實(shí)施血漿凝固酶試驗(yàn)，最后才能計(jì)數(shù)，所以檢測時(shí)間較長。而紙片法具有操作簡易、計(jì)數(shù)準(zhǔn)確度高、勞動(dòng)強(qiáng)度小的優(yōu)勢(shì)，但具有成本高的特點(diǎn)。除此之外，紙片法在判讀期間因?yàn)樯钭霞t色菌落和較淺的黑色菌落顏色相近，所以分辨難度大，該類顏色識(shí)別錯(cuò)誤現(xiàn)象在速度食品及肉類食品中較為常見，需要相關(guān)人員緊跟時(shí)代進(jìn)步研發(fā)出選擇性更強(qiáng)的培養(yǎng)基，從而提高結(jié)果判讀的準(zhǔn)確性，降低試驗(yàn)成本。

綜上所述，紙片法檢測食品中金黃色葡萄球菌，檢出率較高，雖然檢測成本高，但具有易于操作、檢測時(shí)間短、計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢(shì)，所以在檢測行業(yè)具有較高的推廣價(jià)值。