王姣

摘 要：本實驗對依托紅霉素片中的依托紅霉素的測定方法進行研究。方法：采用C18 色譜柱，0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.4）-乙腈（60∶40）為流動相，檢測波長為205nm，流速為1.0ml/min。依托紅霉素在0.5～3.0mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。依托紅霉素平均回收率分別為99.3%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于依托紅霉素片中依托紅霉素的含量測定。

關(guān)鍵詞：依托紅霉素片；含量；測定

依托紅霉素片屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對葡萄球菌屬、各組鏈球菌和革蘭陽性桿菌均具抗菌活性。本實驗采用高效液相色譜法對依托紅霉素片含量進行測定。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高分離度液相色譜”，是色譜法的一個重要分支。1960年中后期以及機械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了高效液相色譜法。高效液相色譜法具有、高壓、高速、高效、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣等特點。本實驗對依托紅霉素片中的依托紅霉素的測定方法進行研究。

1儀器與試藥

1.1儀器：ZXTA-20雙極反滲透實驗室超純水機（北京卓信博澳儀器有限公司）；FA2004電子天平儀器（上海天平儀器技術(shù)有限公司）；HWP-5實驗室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三頻恒溫數(shù)控超聲波清洗器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；賽默飛Spectronic 200可見分光光度計（百道亨儀器設(shè)備（北京）有限公司）；WC-52B1精密恒溫槽（上海思爾達科學(xué)儀器有限公司）；DTA-27多功能靜音型臺式超聲波清洗機（鼎泰（湖北）生化科技設(shè)備制造公司）；上海PHS-25臺式數(shù)顯pH計（上海圣科儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品）。

1.2色譜柱：迪馬C18鉆石色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：依托紅霉素

1.4試劑：甲醇（武漢強松精細化學(xué)品有限公司）、乙腈（永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司）、磷酸（武漢強松精細化學(xué)品有限公司）、十二烷基磺酸鈉（武漢強松精細化學(xué)品有限公司）、三乙胺（武漢強松精細化學(xué)品有限公司）、醋酸鈉（淄博鑫榮化工科技有限公司）、醋酸銨（淄博鑫榮化工科技有限公司）、氨水（淄博鑫榮化工科技有限公司）、甲酸（武漢強松精細化學(xué)品有限公司）、磷酸二氫鉀（淄博鑫榮化工科技有限公司）、磷酸二氫鈉（武漢強松精細化學(xué)品有限公司）。

2測定方法確定

2.1色譜條件

色譜條件條件如下[1-6]。流動相：0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.4）-乙腈（60∶40）為流動相，檢測波長：205nm，流速：1.0m·min-1。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取依托紅霉素對照品適量，加流動相制成每毫升含1毫克依托紅霉素的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取依托紅霉素片，研碎，置25毫升容量瓶中，加入流動相10毫升，超聲處理5分鐘，放冷，用流動相定容，濾過，即得。

2.4精密度試驗

精密稱取依托紅霉素對照品溶液精密吸取10μl，測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.56%，表明本方法精密度良好。

2.5對照品的線性考察

精密稱取適量依托紅霉素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0毫克的溶液。依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，依托紅霉素在0.5～3.0mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的依托紅霉素片樣品6份，測定含量并計算RSD值，結(jié)果RSD為0.76%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7陰性溶液的制備

依照處方取輔料等，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，依上述方法測定，結(jié)果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.8準(zhǔn)確度試驗

精密稱取已知含量的樣品9份，加入依托紅霉素對照品，測定含量并技術(shù)回收率，回收率為99.3%，RSD為0.83%。

2.9樣品穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于第0、1、2、3、4、5小時測定并記錄色譜圖。測定依托紅霉素片中依托紅霉素的RSD=0.73%。結(jié)果表明供試品5小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.10樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定依托紅霉素片三批樣品中依托紅霉素的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為標(biāo)示量的100.6%、99.8%、99.6%。

3討論

分別考察以甲醇-水為流動相梯度洗脫；甲醇-0.02mol·L-1醋酸鈉（62∶40）；乙腈-40mmol·L-1醋酸銨水溶液（氨水調(diào)pH至10.5）33：67）；A為0.1%甲酸-水（V/V），流動相B為乙腈，線性洗脫梯度；乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相進行梯度洗脫；10%甲酸水溶液-甲醇/乙腈/水/甲酸（22.5/22.5/40/10，V/V）；磷酸二氫鉀溶液（0.05mol·L-1） -甲醇 （400∶600） （pH4.0）和磷酸二氫鉀溶液 （0.05mol·L-1） -乙腈（55∶45） 梯度洗脫；0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.4）-乙腈（60∶40），結(jié)果以0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.4）-乙腈（60∶40）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好。本實驗表明此方法可用于依托紅霉素片中依托紅霉素的含量測定。

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