李秀杰,孫慧慧,崔小偉,吳仁海,蘇旺蒼,薛 飛,徐洪樂,孫建偉

(河南省農業(yè)科學院 植物保護研究所/河南省農作物病蟲害防治重點實驗室，河南 鄭州 450002)

化學除草已廣泛應用于花生生產，但受人為、氣候等因素影響，花生田除草劑藥害頻繁發(fā)生，部分受害田塊減產甚至絕收，藥害問題亟待解決。除草劑藥害等各種脅迫均能導致植物細胞產生大量的活性氧[1-2]，植物可以通過增加或激活抗氧化酶來防御活性氧物質對細胞造成的傷害[3]。超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)和抗壞血酸過氧化物酶(APX)是植物體內清除氧自由基的重要酶，其中，SOD可以催化氧自由基的歧化反應，生成H2O2，是植物體內清除活性氧系統(tǒng)的第一道防線，POD和CAT則是細胞內廣泛存在并具有較高清除H2O2活性的酶[4]，APX是抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)中的關鍵酶，直接清除葉綠體內的H2O2，對保持體內代謝平衡起著重要的作用[1]。丙二醛(MDA)是膜脂過氧化的最終產物，是植物細胞膜脂過氧化程度的體現，其含量可以反映植物遭受逆境傷害的程度[5]?？扇苄蕴呛渴侵参矬w內物質代謝的重要指標，可反映碳水化合物的合成和運輸情況，同時與植物的抗性、衰老、光合作用和產量形成密切相關[6]。

為緩解除草劑藥害，研究者做出了多種嘗試，常用的方法是使用除草劑安全劑、增強植物營養(yǎng)和應用生長調節(jié)劑等，通過調節(jié)和促進作物生長，增加作物抗逆能力，從而加快作物從除草劑藥害的損傷中恢復[7-9]?；瘜W合成物質的應用不可避免地帶來新的潛在環(huán)境污染風險，而開發(fā)植物源物質具有重大意義[10]。安融樂是南非尼勒思科882有限責任公司開發(fā)的農藥、肥料噴霧助劑，主要有效成分為卵磷脂。卵磷脂從大豆中提取，多用于醫(yī)藥、食品領域。在田間生產方面，馬菁平等[11]研究表明，葉面噴施卵磷脂減緩了MDA的產生速率及葉綠素的降解，降低了膜透性，提高了抗氧化酶CAT、APX、SOD的活性，從而提高了玉米幼苗的抗冷性。另有研究顯示，安融樂在提高茶葉產量[12]、作為生物表面活性劑增加水溶肥潤濕性能[13]、防治大白菜花葉病毒病[14]及馬鈴薯晚疫病[15]等方面具有積極作用。截至目前，未見將安融樂用于花生田抵抗除草劑脅迫的研究。因此，選取花生田常用的除草劑精喹禾靈+氟磺胺草醚、高效氟吡甲禾靈乳油+乙羧氟草醚、甲咪唑煙酸，分別與安融樂混合后莖葉噴施，研究安融樂對除草劑防治雜草效果、花生藥害的影響及其生理機制，探討安融樂在花生田與除草劑混用對藥害的緩解作用，為花生田除草劑安全應用及推進安融樂的使用提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 供試花生

花生品種為豫花22，由河南省農業(yè)科學院經濟作物研究所培育。

1.2 供試藥劑

安融樂懸乳劑(有效成分為卵磷脂、維生素E)由南非尼勒思科882有限責任公司生產，推薦劑量5 000倍液；50 g/L精喹禾靈乳油由中農住商(天津)農用化學品有限公司生產，推薦劑量37.5～60 g/hm2；108 g/L高效氟吡甲禾靈乳油由美國陶氏益農公司生產，推薦劑量32.4～48.6 g/hm2； 25%氟磺胺草醚水劑由江蘇長青農化股份有限公司生產，推薦劑量250.13～300 g/hm2；10%乙羧氟草醚乳油由江蘇長青農化股份有限公司生產，推薦劑量75～90 g/hm2；240 g/L甲咪唑煙酸水劑由德國巴斯夫歐洲公司生產，推薦劑量72～108 g/hm2。

1.3 試驗設計

2017年7月11日在河南省農業(yè)科學院長垣分院試驗田開展試驗，花生有3～5片復葉，單雙子葉雜草混生。

藥劑有效成分劑量設計如下：50 g/L精喹禾靈+25%氟磺胺草醚為45+337.5(A1)、60+450(A2)(單位g/hm2，下同)，50 g/L精喹禾靈+25%氟磺胺草醚+安融樂為45+337.5+5 000倍液(A1+)、60+450+5 000倍液(A2+)，108 g/L高效氟吡甲禾靈+10%乙羧氟草醚為48.6+30(B1)、64.8+45(B2)，108 g/L高效氟吡甲禾靈+10%乙羧氟草醚+安融樂為48.6+30+5 000倍液(B1+)、64.8+45+5 000倍液(B2+)，240 g/L甲咪唑煙酸為72(C1)、108(C2)，240 g/L甲咪唑煙酸+安融樂為72+5 000倍液(C1+)、108+5 000倍液(C2+)。設空白對照(CK)，每個處理3次重復，隨機排列，小區(qū)面積為3.5 m×6 m=21 m2。采用莖葉噴霧，施藥液量為450 L/hm2。

1.4 測定項目

分別于藥后3、7、14、30 d測定雜草防效級別。藥后7 d以SPAD-502 Plus儀器測定花生頂端已完全展開葉片的SPAD值(葉綠素含量)，并采集頂端幼嫩葉片，迅速液氮冷凍保存，測定SOD、POD、CAT、APX的活性及MDA含量、可溶性糖含量等生理指標[16]。藥后30 d測定雜草鮮質量防效，公式如下：

參照劉學等[17]編著的《農藥生物活性測試標準操作規(guī)范：除草劑卷》評價除草劑對雜草防效級別和對花生藥害級別并略有調整。雜草防效級別為：0級，中毒程度0，無活性；1～3級，中毒程度10%～30%，活性小；4～6級，中毒程度40%～60%，活性一般；7級，中毒程度70%，活性好；8級，中毒程度80%，活性較好；9級，中毒程度90%～100%，活性很好至完全死亡?；ㄉ~片藥害級別為：0級，中毒程度0，很安全；1級，中毒程度10%，安全；2級，中毒程度20%～30%，輕微藥害；3級，中毒程度40%～50%，有藥害；4級，中毒程度60%～80%，嚴重藥害；5級，中毒程度90%～100%，植株死亡。

1.5 數據分析

試驗數據采用IBM SPSS Statistics 19 軟件進行分析，應用Duncan氏新復極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 安融樂對除草劑活性的影響

2.1.1 對花生葉片藥害的影響 試驗劑量下，精喹禾靈+氟磺胺草醚處理藥后短期即可對花生產生嚴重藥害(表1)，加入安融樂對其低劑量[(45+337.5)g/hm2]下藥害有一定緩解，藥害級別降低1～2級，對其高劑量[(60+450)g/hm2]下花生藥害無緩解作用。高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚藥后短期對花生葉片有輕微藥害，加入安融樂無明顯緩解作用，藥后7 d調查時，藥害癥狀已消失。而甲咪唑煙酸對花生相對安全，藥后14 d調查時高劑量下有輕微藥害發(fā)生，加入安融樂藥害癥狀得到有效緩解。

對花生葉片SPAD值測定結果表明，除草劑處理均不同程度降低花生葉片的SPAD值(表1)，其中精喹禾靈+氟磺胺草醚處理、甲咪唑煙酸處理達顯著水平。加入安融樂，精喹禾靈+氟磺胺草醚處理花生葉片SPAD值有一定程度升高，但不顯著，而甲咪唑煙酸處理加入安融樂SPAD值進一步降低，與除草劑處理之間無顯著差異，但與空白對照差異顯著。

除草劑處理均不同程度提高花生葉片數(表1)，其中高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚(48.6+30)g/hm2處理達顯著水平。加入安融樂后，精喹禾靈+氟磺胺草醚(45+337.5)g/hm2處理，甲咪唑煙酸72、108 g/hm2處理花生葉片數均有一定程度增多，但不顯著。

表1 安融樂對除草劑藥后14 d內花生藥害的影響

注：同列數值后不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。

2.1.2 對藥后3 d雜草防效級別的影響 藥后3 d內除草劑對雜草表觀防效明顯(表2)，以精喹禾靈+氟磺胺草醚處理防效級別最高，可達7～9級，高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚次之，可達5～8級，甲咪唑煙酸最差，可達3～6級。

表2 安融樂對除草劑藥后3 d雜草防效級別的影響

安融樂多表現為保持或升高除草劑對雜草的防效級別；可使高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚(48.6+30)g/hm2處理控制莎草的防效提高2級，使甲咪唑煙酸72、108 g/hm2處理控制禾本科雜草、莎草的防效提高2級。

2.1.3 對藥后7 d雜草防效級別的影響 藥后7 d精喹禾靈+氟磺胺草醚處理、高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對莎草防效較差，防效級別介于3～4級，甲咪唑煙酸主要對打碗花防效較差，對苘麻、反枝莧、馬泡瓜及莎草的活性較前期調查數據有明顯上升，其余處理對雜草防效級別多數可達5～9級(表3)。加入安融樂混合使用多降低除草劑對莎草的活性，尤其對甲咪唑煙酸影響較大，防效級別降低2～3級；安融樂可使精喹禾靈+氟磺胺草醚對苘麻、馬唐的防效級別降低1～2級；同時安融樂可使甲咪唑煙酸對苘麻、馬唐的防效級別提高1級。

表3 安融樂對除草劑藥后7 d雜草防效級別的影響

2.1.4 對藥后14 d雜草防效級別的影響 藥后14 d高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對苘麻、馬唐，甲咪唑煙酸對反枝莧活性略低，其余除草劑處理對雜草均有明顯防效，防效級別可達6～9級，但精喹禾靈+氟磺胺草醚處理、高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對雜草防效較藥后7 d數據有下降趨勢，尤其對苘麻、馬泡瓜、馬唐及狗尾草的防效降低明顯(表4)。

表4 安融樂對除草劑藥后14 d雜草防效級別的影響

安融樂對除草劑雜草防效有一定影響(表4)，降低精喹禾靈+氟磺胺草醚(60+450)g/hm2、高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對莎草的防效，分別可降低3級、2～3級；使精喹禾靈+氟磺胺草醚處理對苘麻、馬泡瓜的防效級別降低1～2級；但可使高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對禾本科雜草馬唐、狗尾草的防效升高1～3級，對苘麻的活性升高，但總體防效級別仍較低；使甲咪唑煙酸對馬唐的防效級別升高2級，對苘麻、馬泡瓜及反枝莧的防效可提高1級。

2.1.5 對藥后30 d雜草防效級別的影響 藥后30 d，試驗劑量下，精喹禾靈+氟磺胺草醚處理、高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對苘麻、馬泡瓜防效進一步降低(表5)，尤其是后者對苘麻的防效，僅介于1～2級，其余除草劑處理對雜草均有明顯活性。

添加安融樂混合噴施對除草劑活性有一定影響?？墒咕天`+氟磺胺草醚低劑量處理[(45+337.5)g/hm2]對苘麻的防效降低4級，對硬草的防效降低3級。使高劑量處理[(60+450)g/hm2]對苘麻的防效降低1級，對馬齒莧的防效升高1級，對牛筋草的防效升高2級。

安融樂可使高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚(48.6+30)g/hm2處理對馬泡瓜的防效降低3級，對稗草的防效提高2級，對牛筋草的防效提高1級。使高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚(64.8+45)g/hm2處理對馬泡瓜的防效降低4級，對馬齒莧的防效降低1級，對馬唐的防效升高2級。

安融樂可使甲咪唑煙酸對苘麻、馬泡瓜及馬唐的防效級別升高1級，對反枝莧、馬齒莧的防效降低2～3級。

表5 安融樂對除草劑藥后30 d雜草防效級別的影響

2.1.6 對藥后30 d雜草防效的影響 對鮮質量防效測定結果表明，精喹禾靈+氟磺胺草醚處理對4種主要雜草苘麻、馬泡瓜、馬唐及狗尾草的活性均較差(表6)，加入安融樂混合噴施，對苘麻、馬唐的防效明顯降低，對狗尾草的防效有一定程度提高；高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理對苘麻、馬唐及狗尾草活性較差，對馬泡瓜的活性較好，其低劑量[(48.6+30)g/hm2]加入安融樂對苘麻、馬泡瓜的防效降低，對馬唐的防效明顯提高，其高劑量[(64.8+45)g/hm2]加入安融樂提高對雜草的防效，尤其對禾本科雜草的防效，從基本無防效提高至43.21%～100%；甲咪唑煙酸對苘麻、馬泡瓜有較高的防效，但對禾本科雜草馬唐、狗尾草，僅能一定程度抑制其生長，不能有效防除，加入安融樂混合噴施提高對4種雜草的防效，尤其闊葉雜草均得到有效防治。

表6 安融樂對除草劑藥后30 d雜草 鮮質量防效的影響 %

2.2 安融樂對花生葉片生理指標的影響

2.2.1 對抗氧化酶活性的影響 與空白對照比，除草劑處理多表現為不同程度升高花生葉片的抗氧化酶活性(圖1—4)，其中精喹禾靈+氟磺胺草醚(45+337.5)、(60+450)g/hm2處理POD、APX活性均顯著上升，低劑量下CAT活性顯著升高，加入安融樂其POD、APX活性保持顯著升高狀態(tài)，可使低劑量下CAT活性降至空白對照水平，高劑量下SOD、CAT活性顯著高于對照；高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理及甲咪唑煙酸處理均為高劑量下APX活性顯著升高，高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚低劑量處理[(48.6+30)g/hm2]加入安融樂后POD、CAT、APX活性顯著升高，而其高劑量處理[(64.8+45)g/hm2] 加入安融樂后APX活性降至空白對照水平，甲咪唑煙酸108 g/hm2處理加入安融樂后APX活性保持顯著升高水平。

不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)，下同圖1 安融樂對除草劑藥后7 d SOD活性的影響

圖2 安融樂對除草劑藥后7 d POD活性的影響

圖3 安融樂對除草劑藥后7 d CAT活性的影響

圖4 安融樂對除草劑藥后7 d APX活性的影響

2.2.2 對MDA和可溶性糖含量的影響 MDA是具有細胞毒性的物質，主要破壞細胞膜系統(tǒng)，植物在遇逆境傷害時含量增加[18]。除草劑處理MDA含量變化均不顯著(圖5)。其中，甲咪唑煙酸72、108 g/hm2處理MDA含量有一定程度升高，分別升高17.89%、10.04%，加入安融樂后花生葉片MDA含量低于空白對照，表明甲咪唑煙酸對花生葉片有一定藥害，加入安融樂可以有效抑制甲咪唑煙酸脅迫造成的膜脂過氧化發(fā)生；安融樂對精喹禾靈+氟磺胺草醚處理MDA含量影響較??；加入安融樂后高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚(48.6+30)、(64.8+45)g/hm2處理MDA含量有一定程度升高，其中低劑量下較空白對照水平提高30.78%。

植物受到干旱等逆境影響會提高自身可溶性糖含量，以提高自身的滲透調節(jié)能力抵御外界脅迫[19]。除草劑處理對花生葉片可溶性糖含量有一定影響(圖6)，精喹禾靈+氟磺胺草醚(45+337.5)、(60+450)g/hm2處理升高花生葉片可溶性糖含量，分別較空白對照升高13.34%、32.07%，高劑量下達顯著水平。加入安融樂后低劑量處理可溶性糖含量進一步升高，2個處理分別較空白對照升高62.21%、20.29%，均達顯著水平。高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理、甲咪唑煙酸處理可溶性糖含量均接近空白對照水平。加入安融樂對高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理花生葉片可溶性糖含量影響較小，對甲咪唑煙酸72、108 g/hm2處理可溶性糖含量有一定程度提高，分別較空白對照升高12.24%、19.31%，但均不顯著。

圖5 安融樂對除草劑藥后7 d MDA含量的影響

圖6 安融樂對除草劑藥后7 d可溶性糖含量的影響

3 結論與討論

甲咪唑煙酸對雜草活性較慢，早期防效差，但后期顯示出良好的禾闊雙除作用，加入安融樂對其防治花生田闊葉及禾本科雜草的活性均有明顯提高，且對于甲咪唑煙酸高劑量造成的輕微藥害有明顯緩解效果。精喹禾靈+氟磺胺草醚處理、高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理早期對苘麻防效明顯，但后期苘麻大苗重新長出嫩葉，防效較差，加入安融樂對精喹禾靈+氟磺胺草醚控制狗尾草的活性有明顯提高，對高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚高劑量處理控制闊葉及禾本科雜草活性均有提高，同時加入安融樂對精喹禾靈+氟磺胺草醚處理藥害有一定緩解作用。

植物在逆境脅迫下一般表現為抗氧化酶活性上升和MDA含量增加，但當脅迫超過一定范圍或持續(xù)一定時間后抗氧化酶活性便會下降，而MDA含量則持續(xù)上升[11，20-21]。精喹禾靈+氟磺胺草醚處理藥害狀態(tài)下，花生葉片內部抗氧化酶活性及脅迫指標多不同程度升高，其中POD活性、APX活性、低劑量下CAT活性、高劑量下可溶性糖含量均顯著升高，高劑量下MDA含量略有升高但不顯著。加入安融樂，僅可使低劑量下藥害降低1～2級，對高劑量下藥害無明顯緩解，POD、APX活性保持顯著升高水平，對于CAT活性的調節(jié)，低劑量下降至空白對照水平，高劑量下顯著升高，可溶性糖含量均顯著高于空白對照水平，而MDA含量與空白對照無顯著差異。因此，POD、CAT、APX活性及可溶性糖含量的顯著升高揭示了花生葉片持續(xù)受脅迫的狀態(tài)，抗氧化酶活性變化及MDA的調節(jié)表明安融樂在緩解精喹禾靈+氟磺胺草醚處理花生藥害和維護膜結構方面起到了一定的保護作用。

高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理后短期內造成輕微藥害，藥后7 d藥害癥狀已消失，數據顯示高劑量下APX活性顯著升高，加入安融樂混合噴施則降至空白對照水平，使低劑量下POD、CAT、APX活性顯著升高，對SOD活性、MDA含量及可溶性糖含量影響較小，由此推測，在高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚處理后，花生葉片內部APX最先預警，POD、CAT、APX活性的變化反映安融樂在清除花生體內過多氧自由基，調節(jié)花生免受高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚藥害方面起到積極作用。

花生在高劑量甲咪唑煙酸處理后14 d有輕微藥害，加入安融樂藥害得到有效緩解。藥后7 d生理指標測定結果顯示，僅高劑量下APX活性顯著升高，加入安融樂其活性保持顯著升高狀態(tài)，POD活性、可溶性糖含量有一定程度升高，CAT活性、MDA含量有一定程度降低，但變化均不顯著，與空白對照水平相當，對SOD活性影響較小。推測花生受到甲咪唑煙酸脅迫后APX最先預警，而POD、CAT活性及MDA含量的變化表明安融樂在清除花生體內過多自由基，調節(jié)花生免受甲咪唑煙酸藥害方面起積極作用。

根據本研究結果，推薦甲咪唑煙酸加入安融樂混合噴施用于花生田雜草防除，鑒于精喹禾靈+氟磺胺草醚在花生田雜草上的表現，不建議安融樂與其混合噴施使用，以狗尾草為主的花生田可考慮高效氟吡甲禾靈+乙羧氟草醚在(64.8+45)g/hm2劑量下加入安融樂混合使用。