李春麗

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了桑椹顆粒中綠原酸的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸 （10：10：80）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。綠原酸在0.01～3.2mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。綠原酸的平均回收率為99.6%，RSD為0.88%；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于桑椹顆粒中綠原酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：桑椹顆粒；綠原酸；含量

桑椹顆粒滋陰益腎，補(bǔ)血潤(rùn)燥。桑椹顆粒用于陰虧血燥引起的腰膝酸軟，眩暈失眠，目昏耳鳴，腸燥便秘，口干舌燥，須發(fā)早白。桑葚子別名桑實(shí)、文武實(shí)、黑椹、桑棗、桑果等，為?？坡淙~喬木桑樹(shù)的成熟果實(shí)。桑葚子具有滋陰養(yǎng)血、生津、潤(rùn)腸的功效?！侗静菅芰x》記載：“桑根白皮條中言：桑之用稍備；然獨(dú)遺烏椹，桑之精英盡在于此?！鄙］刈雍绪匪幔╰annic acid）、蘋果酸（malicacid）、維生素（vitamin）B1、油酸（oleic acid）、辛酸（caprylic acid）、肉豆蔻酸（myris-tic acid）、牻兒醇（geraniol）、芳樟醇（linalool）、a-蒎烯（α-pinene）等。本文采用高校液相測(cè)定了桑椹顆粒中綠原酸的含量。

1 儀器與試藥

電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；LU230四元低壓梯度液相色譜分析系統(tǒng)（大連依利特分析儀器有限公司）；司）；EasyGuard保護(hù)柱（島津技邇上海商貿(mào)有限公司）；BT-V20A/B高精度恒溫水槽（上海百典儀器設(shè)備有限公司）；PH510臺(tái)式精密酸度計(jì)（安萊立思儀器科技（上海）有限公司）；美國(guó)澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；Globus超聲波萃取設(shè)備（賽普泰克有限公司（上海比朗儀器制造有限公司）；UV-5500（PC）掃描型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）。綠原酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（河南薩默生物科技有限公司）、乙酸銨（天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司）、醋酸銨（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、醋酸（河南薩默生物科技有限公司）、磷酸（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、三乙胺（南京化學(xué)試劑股份有限公司）、磷酸二氫銨（南京化學(xué)試劑股份有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取桑椹顆粒，研細(xì)，精密稱取，精密加入流動(dòng)相30mL，超聲提取5分鐘，放冷，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶?jī)?nèi)用流動(dòng)相定容，搖勻，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品約10mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含0.2mg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取桑椹顆粒輔料，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在綠原酸出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒(méi)有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，綠原酸對(duì)照品在0.01～3.2mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.4項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.63%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批桑椹顆粒樣品6份，分別依照2.2項(xiàng)下供試品制0.89%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.2項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，0.2，0.，4，0.6、0.8、1.0小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品綠原酸峰面積積分值的RSD為0.86%。結(jié)果表明綠原酸至少在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的綠原酸對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.6%，RSD為0.88%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定桑椹顆粒三批樣品中綠原酸的含量，含量分別為0.18mg/g、0.23mg/g、0.21mg/g。

3 討論

分別考察乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80），乙腈-0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）磷酸（體積比25：75），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸調(diào)PH值為6.0），甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70），甲醇-異丙醇-乙腈（37∶61∶2），0.2%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)pH至5.3）-乙腈（65∶35），0.045mol.L-1磷酸二氫銨溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺調(diào)pH值至6.5），0.1mol/L磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸調(diào)PH值為6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于桑椹顆粒中綠原酸的含量測(cè)定。桑椹顆粒中綠原酸的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95-105%。

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