汪清銳，呂林芳

(山西省桑干河楊樹豐產(chǎn)林實(shí)驗(yàn)局科技服務(wù)中心，山西 大同 037000)

三倍體歐洲山楊(TriploidPopulustremula)具有超速生性，但常規(guī)的扦插、嫁接繁殖方法容易傳染母株致病菌和病毒，不適合大規(guī)模的生產(chǎn)經(jīng)營。組織培養(yǎng)技術(shù)的建立能解決營養(yǎng)繁殖速度慢、受季節(jié)限制的問題。筆者采集三倍體歐洲山楊根萌生的幼苗莖段作為外植體，建立三倍體歐洲山楊組織培養(yǎng)體系。

1 材料和方法

1.1 外植體材料

三倍體歐洲山楊無性系是歐洲山楊花粉和來自加拿大的美洲山楊花粉雜交而來的，由原山西省中德林業(yè)技術(shù)合作項(xiàng)目從德國漢明登山楊家系林中引進(jìn)并培育。7月初，取三倍體歐洲山楊大田根萌生的幼苗莖段作為外植體材料。

1.2 消毒

由于使用的根萌生幼苗處于生長旺盛季節(jié)，所攜帶的病菌較多。所以，應(yīng)對(duì)準(zhǔn)備接種的幼苗莖段進(jìn)行嚴(yán)格消毒。預(yù)處理：用軟刷在流水中清洗莖段表面約10 min，之后將莖段切成約10 cm長的小段，剪去葉子留1 cm的葉柄，以便保護(hù)芽。用80 μmL/L青霉素加入數(shù)滴吐溫80浸泡半小時(shí)，并清洗。

消毒：在70%乙醇中浸泡20 s～30 s，用無菌水清洗2次。再用0.1% HgCI2或2.5% NaCIO消毒，之后用無菌水清洗5次(每次1 min左右)。根據(jù)消毒方法不同設(shè)3個(gè)處理，見表1.

表1 不同的消毒處理方法

1.3 接種

將莖段切成約1 cm長帶芽小段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基TPTL：MS基本培養(yǎng)基(蔗糖濃度為30.0 g/L，瓊脂濃度為5.5 g/L，同下)+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，培養(yǎng)在光強(qiáng)度約為3 000 Lx，光周期為16 h，溫度為25 ℃的培養(yǎng)室中。

1.4 芽和幼苗的快繁

從外植體上誘導(dǎo)出的幼苗長至2 cm～3 cm時(shí)，把其切成帶節(jié)間的小段接種到增殖培養(yǎng)基中，根據(jù)添加植物激素不同設(shè)4個(gè)處理，見表2.

每個(gè)小段在增殖培養(yǎng)基上可以分化成10倍以上的幼苗，約20 d可以繼代1次，這樣在生根培養(yǎng)以前可以使幼苗成指數(shù)增加。

1.5 生根培養(yǎng)

選擇生長狀態(tài)良好、直立，長2 cm以上帶有2個(gè)～3個(gè)主要節(jié)間的幼苗用于生根培養(yǎng)。把選擇的幼苗接種到附加IBA的TPTR培養(yǎng)基(MS+0.1 mg/L IBA)上，培養(yǎng)15 d以上即可生根。通常生長狀態(tài)不好、彎曲、微黃的幼苗較難生根。

2 結(jié)果與討論

2.1 外植體對(duì)芽誘導(dǎo)成功率的影響

研究發(fā)現(xiàn)，外植體的老嫩會(huì)影響芽的誘導(dǎo)成功率。7月份采集的根萌生幼苗莖段，幼嫩部分無法徹底消毒，全部污染。半木質(zhì)化莖段適宜作為外植體，可以徹底消毒而成活。根萌生的幼苗莖段經(jīng)消毒后接種在TPTL上，誘導(dǎo)率達(dá)98%.

2.2 消毒對(duì)芽誘導(dǎo)成功率的影響

三倍體歐洲山楊根萌生的幼苗莖段外植體較難消毒，攜帶內(nèi)生菌較多。如果用2.5% NaClO溶液進(jìn)行消毒，再生植株接種后3 d內(nèi)幾乎全部褐化爛掉，說明三倍體歐洲山楊對(duì)NaClO溶液極其敏感。如果用HgCl2溶液消毒，莖段污染率為75%，但沒有褐化爛掉的現(xiàn)象。用3 g/L的多菌靈溶液浸泡半小時(shí)后清洗數(shù)次，之后幼苗莖段全部褐化爛掉，而半木質(zhì)化莖段部分成活。因此，應(yīng)避免用多菌靈對(duì)幼嫩外植體進(jìn)行浸泡清洗。

2.3 植物激素對(duì)芽分化的影響

將誘導(dǎo)出的小苗切成1 cm以上帶莖節(jié)的莖段，在不同的TPTS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能夠分化成芽簇。添加KT可以促進(jìn)芽大量分化，是三倍體歐洲山楊高倍數(shù)增殖的主要激素因子。GA3可以有效促進(jìn)莖節(jié)增長，所以，最理想的分化增殖培養(yǎng)基為TPTS 3，增殖系數(shù)達(dá)到15.

2.4 植物激素對(duì)生根的影響

增殖培養(yǎng)基TPTS 3中的莖段，在未添加NAA和IBA的情況下，發(fā)生大量生根現(xiàn)象。說明，三倍體歐洲山楊組培生根極其容易。生根配方中加入IBA，生根率可達(dá)90%.

3 結(jié)論

7月初取大田根萌生的幼苗，剪成莖段作為外植體材料，建立三倍體歐洲山楊組織培養(yǎng)快繁體系。將幼苗的莖段進(jìn)行嚴(yán)格消毒后再接種，可以取得理想結(jié)果。理想誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，試管苗增殖采用配方MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L GA3，增殖系數(shù)為15，生根配方采用MS+0.1 mg/L IBA.本研究結(jié)果可為三倍體歐洲山楊根萌生幼苗的組織培養(yǎng)墊定技術(shù)基礎(chǔ)。