漆 亮，劉增再，薛 爽，陳 智，譚 丹，唐愛明，賴詩嘉，寧華杰

（長沙市動物疫病預(yù)防控制中心，湖南長沙 400013）

豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒（PCV）、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HPPRRSV）和口蹄疫病毒（FMDV）是近年來規(guī)模豬場流行和危害最為嚴(yán)重的疫病病原，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。

為了解湖南省臨床健康豬群主要疫病的流行情況，根據(jù)“2017年湖南省動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃”要求（以下簡稱“監(jiān)測計劃”），長沙市動物疫病預(yù)防控制中心于2017年3月-2018年3月在雨花區(qū)紅星盛業(yè)屠宰場，采集臨床健康豬群的組織樣品，應(yīng)用實時熒光定量PCR方法，對以上6種主要疫病開展病原學(xué)監(jiān)測，并分析感染情況，為湖南省主要豬群疫病的防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

按照“監(jiān)測計劃”中“國家級、省級定點專項監(jiān)測計劃”的相關(guān)規(guī)定，每月從紅星盛業(yè)屠宰場采集2群臨床健康豬的扁桃體和淋巴結(jié)，每群采集15份，共采集390份，送長沙市動物疫病預(yù)防控制中心實驗室。

豬群主要來自長沙、岳陽、衡陽、株洲、婁底、永州、郴州7個市（州）。

1.2 試劑

豬瘟病毒/豬藍(lán)耳病毒/偽狂犬病毒/豬圓環(huán)病毒Ⅰ型四通道核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）和口蹄疫病毒核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）：均購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司；核酸提取試劑盒（磁珠法）：購自蘇州天隆生物科技有限公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

MM400組織研磨儀：購自德國萊馳公司；NP968 核酸提取儀：購自西安天隆科技有限公司；Light Cycler 480 II 熒光定量PCR 儀：購自Roche公司。

1.4 方法

1.4.1 病毒核酸提取 取采集的組織樣品（2 g/份），按1∶5加入生理鹽水研磨，12 000 r/min離心3 min，取200 μL上清備用。運(yùn)用西安天隆科技有限公司的核酸提取儀以及配套核酸提取試劑盒（磁珠法）提取病毒核酸[1]，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4.2 實時熒光定量PCR檢測 按照相應(yīng)疫病的病毒核酸檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作及結(jié)果判定。1.4.3 感染情況鑒定 同一份組織樣品只檢測到1種病原核酸陽性的為單一感染，同時檢測到2種的為二重感染，同時檢測到3種的為三重感染，同時檢測到4種的為四重感染[2]。

2 結(jié)果與分析

對390份組織樣品分別進(jìn)行CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、HPPRRSV和FMDV核酸檢測；根據(jù)檢測結(jié)果，進(jìn)行感染率、單一感染、二重感染和多重感染分析。

2.1 不同病原感染情況

在這6種病原中，陽性檢出率最高的是PCV2，為77.95%；其次是HPPRRSV和PRRSV，分別為24.10%和23.85%；再次是PRV和CSFV，分別為8.46%和5.13%；最低的是FMDV，為0.51%。結(jié)果表明，臨床健康豬群的主要感染病原是PCV2，其次是PRRSV（圖1）。

圖1 屠宰場豬群6種病原陽性率比較

2.2 不同時間感染情況

每月的PCV2陽性檢出率普遍較高，除2017年8月未檢出外，其他月份的陽性率均在50%以上，說明屠宰豬群PCV2的隱性感染情況較為普遍。HPPRRSV和PRRSV幾乎每月都有檢出，表現(xiàn)出一定的季節(jié)性，秋冬季節(jié)陽性率明顯高于夏季，說明這兩種病毒的感染在秋冬季節(jié)高發(fā)。PRV、CSFV和FMDV檢出陽性的月份較少，多數(shù)月份無陽性，說明這3種病毒在屠宰豬群中的攜帶率很低；部分月份的PRV和CSFV檢出率偏高，說明屠宰豬群中仍存在局部的嚴(yán)重隱性感染（表1）。

表1 屠宰場豬群6種病原不同時間陽性率比較單位：%

2.3 不同地區(qū)感染情況

390份豬組織樣品中，有195份來自岳陽，其余來自長沙、衡陽、株洲、婁底、永州和郴州等地。分析發(fā)現(xiàn)，PCV2、HPPRRSV、PRRSV感染范圍較廣，病原分布差異不明顯，而CSFV、PRV、FMDV具有明顯的區(qū)域特征，只在局部地區(qū)存在（表2）。

表2 不同地區(qū)豬群6種疫病病原陽性率比較 單位：%

2.4 單一感染情況

PCV2的單一感染率最高，為77.95%，F(xiàn)MDV最低，為0.52%（表3）。

2.5 二重感染情況

PCV2和其他病原的混合感染最為多見。其中：感染率最高的是“PRV+PCV2”，陽性率為7.43%；其次是“PRRSV+PCV2”，陽性率為2.31%；再次是“HPPRRSV+PRRS”，陽性率為2.05%（表4）。這表明“PRV+PCV2”混合感染最為普遍。

表3 單一感染情況

表4 二重感染情況

2.6 多重感染情況

“H P P R R S V+P R R S V+P C V 2”三 重 感 染 率 最 高， 為115.4%；“CSFV+HPPRRSV+PRRSV+PCV2”四重感染陽性率最高，為3.85%；“CSFV+PRRSV+PCV2”“CSFV+HPPRRSV+PRRSV”“HPPRRSV+PRRSV+PRV+PCV2”等其他三重以上感染陽性率分別為0.26%、0.77%和0.77%（表5）。

表5 三重以上感染情況

3 討論

近年來，隨著我國養(yǎng)豬業(yè)規(guī)?；潭仍黾雍图s化發(fā)展，病毒的變異頻率在加速，導(dǎo)致豬病日趨復(fù)雜，免疫失敗、新老疫病混合感染時有發(fā)生，在流行特點上以多重感染、繼發(fā)感染、免疫抑制、繁殖障礙癥候、呼吸道癥候等為主要表征。

檢測發(fā)現(xiàn)，PCV2感染最為嚴(yán)重。PCV2可導(dǎo)致免疫抑制，降低機(jī)體抵抗力，從而繼發(fā)其他疾病[2]，造成多重感染。這可能是導(dǎo)致豬群兩種或多種病毒混合感染普遍存在的主要原因之一?！癙RRSV+HPPRRSV”混合感染較為嚴(yán)重，感染毒株類型較為復(fù)雜，使得這兩種病原的防控工作難度加大。PRV近幾年導(dǎo)致的發(fā)病率逐漸上升，與PCV2、PRRSV的混合感染也越來越多，需要加快開展豬群的PRV凈化，以減少PRV的野毒感染。CSFV陽性率較低，這是因為多年來實施的強(qiáng)制免疫，使豬群獲得了較好的保護(hù)力，部分豬場甚至達(dá)到了豬瘟免疫凈化狀態(tài)。FMDV陽性率偏低，可能與采樣和檢測方法有關(guān)，導(dǎo)致檢出陽性率與真實陽性率出現(xiàn)一定的偏差。

對6種病原的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，PCV2與其他病毒的混合感染最為常見。二重感染中，PCV2與PRV的混合感染率最高，為7.43%；三重感染中，與“PRRSV+HPPRRSV”混合感染率最高，為11.54%；四重感染中，與“CSFV+HPPRRSV+PRRSV”的混合感染率最高，為3.85%。韋顯凱等[3-4]研究發(fā)現(xiàn)，2014年廣西部分地區(qū)屠宰場“CSFV+PCV2+PRV”的三重感染率為0.67%。由此可見，湖南省臨床健康豬群主要疫病的混合感染情況較為嚴(yán)重。

檢測結(jié)果提示：一要繼續(xù)落實以免疫為主的綜合防控措施，做好豬瘟等主要豬病的基礎(chǔ)免疫工作；二要擴(kuò)大主動監(jiān)測范圍，加大采樣監(jiān)測頻次，及時掌握豬群疫病流行狀況；三要深入推進(jìn)豬偽狂犬病、豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征等主要疫病的凈化工作，降低豬群主要疫病的隱性感染率。

4 結(jié)論

本研究采用實時熒光定量PCR方法，對紅星盛業(yè)屠宰場采集的390份組織樣品進(jìn)行了6種主要豬群疫病病原的核酸檢測，發(fā)現(xiàn)PCV2的陽性率最高，其次是HPPRRSV、PRRSV。感染情況分析發(fā)現(xiàn)，臨床健康豬群的多重感染較為嚴(yán)重，尤其是PCV2與PRRSV、HPPRRSV和PRV的混合感染。因此，要重點加強(qiáng)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)PCV2、HPPRRSV、PRRSV和PRV感染的防控。

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[2] 郎洪武，陳曉春，吳華偉，等. 豬圓環(huán)病毒病及其生物制品學(xué)的研究進(jìn)展[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)，2012，42（5）：545-550.

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[4] 韋顯凱，閉璟珊，蔣曉霞，等. 2016年廣西部分地區(qū)豬群五種疫病感染情況監(jiān)測 [J]. 中國動物檢疫，2017，34（8）：20-22.