李高璽，林志健，張　冰，王海鴿

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京　100029)

鵪鶉生長速度快，體型適中，是雞形目中最小的品種，易于飼養(yǎng)管理，作為一種新型實驗動物，鵪鶉已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)與醫(yī)學(xué)研究[1]。鵪鶉血液的獲取是檢測血清中相關(guān)生化指標(biāo)的前提和基礎(chǔ)。而簡便、快速、有效的采血技術(shù)是獲取實驗用足夠血液量、成功分離血清及準(zhǔn)確測定指標(biāo)的保證。本研究以雄性迪法克鵪鶉為研究對象，通過對鵪鶉翼根靜脈、左頸靜脈、右頸靜脈三部位采血操作，評價鵪鶉不同采血方法，進而為醫(yī)學(xué)研究中實驗鵪鶉血液獲取提供基礎(chǔ)技術(shù)支持。

1　材料和方法

1.1　實驗動物

迪法克鵪鶉300只，5周齡，雄性，體重(170±10)g，均購自北京市德嶺鵪鶉養(yǎng)殖場，生產(chǎn)許可證號：110113600218082。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)普通級動物實驗室[SYXK(京)2016-0038]。倫理審查證號：1100000013479。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20℃～26℃，相對濕度40%～60%。

1.2　主要試劑

一次性使用無菌注射器2 mL(山東頤興醫(yī)療器械有限公司)；酒精消毒液(邯鄲市捷利康商貿(mào)有限公司)。

1.3　實驗方法

1.3.1實驗分組

鵪鶉隨機分為3組，分別為翼根靜脈組、左頸靜脈組、右頸靜脈組，每組100只；各組均正常飲食飲水，每10 d對三組鵪鶉分別采用翼根靜脈、左頸靜脈、右頸靜脈采血部位采血1次，實驗重復(fù)5次。動物采血前稱重并禁食不禁水12 h，在實驗人員統(tǒng)一、操作環(huán)境一致的情況下，對鵪鶉三部位進行采血操作。

1.3.2鵪鶉捉持與固定方法

右手捉持鵪鶉，右手食指和中指分別扣于鵪鶉左右兩肩之上，右掌心貼鵪鶉背，右手拇指和無名指、小指扣于鵪鶉腹部左右兩側(cè)，力度適中，避免鵪鶉死亡。左手自然平伸，上覆20×40 cm2清潔白布，軟硬適中；使鵪鶉蜷腿臥于左掌心，左手拇指順勢帶布繞過鵪鶉，右手向左裹住鵪鶉，交叉重復(fù)，完成包裹。(如圖1)

注：(A)鵪鶉捉持；(B)鵪鶉固定。圖1　鵪鶉捉持與固定Fig.1　The capture (A) and fixation (B) of a quail

1.3.3右頸靜脈采血法

鵪鶉包裹完成后，使鵪鶉呈45°角放置腿部。左手食指與中指將鵪鶉脖頸夾于兩指根縫部，中指微上挑，食指彎曲如半圓形整體向后推拂羽毛并略微下按，左右手拇指輔助食指將頸部羽毛按于食指之下，清除障礙，暴露血管，拇指輕壓頸靜脈近心端。此時，鵪鶉右頸部靜脈血管怒張，若無怒張或怒張不顯時，可左右拇指推移血管、指尖輕輕點壓血管，同時左手食指下壓、中指上挑微用力使鵪鶉頸部彎曲，暴露血管。在進針周圍用碘伏或酒精消毒干燥后，右手持帶針頭2.0 mL注射器(6號針頭)沿與靜脈血管10°角進針0.3 cm左右，右手中指緩緩后移注射器管塞，食指稍放松，血量達到要求后，拔出針頭，用棉球稍按壓針口止血數(shù)秒至無出血，不能揉動采血部位，以防出血或瘀青。(如圖2)

1.3.4左頸靜脈采血法

鵪鶉左頸靜脈采血手法與右側(cè)相似；左手以食指和中指夾住鵪鶉頭部，鵪鶉頭部偏左，無名指、小指、手掌固定鵪鶉身體，拇指輕壓頸部使血管怒張，在進針周圍用消毒后，右手持帶針頭2.0 mL注射器(6號針頭)沿與靜脈10°角進針0.3 cm左右，抽取血液，采血結(jié)束后，棉球稍按壓針口止血數(shù)秒至無出血，不能揉動采血部位，以防出血或瘀青。左頸靜脈采血手法同理。(如圖3)

1.3.5鵪鶉翼根靜脈采血法

鵪鶉固定后，將其翅膀展開，露出腋窩，將細絨羽毛拔去，即能見到翼根靜脈。在進針周圍用碘伏或酒精消毒干燥后，左手拇指、食指壓迫血管向心端，血管怒張后，右手用2.0 mL帶針頭注射器(6號針頭)沿與靜脈10°角進針0.3 cm左右，即可采血，采血成功后，用棉球按壓止血數(shù)秒至無出血。(如圖4)

1.3.6評價原則

在實驗人員統(tǒng)一、操作環(huán)境一致的情況下，對鵪鶉三部位進行采血操作。對比三種采血方式，以短、中、長分別代表每只鵪鶉采血平均用時，以1～2 min、2～4 min、>4 min評價采血用時；以優(yōu)劣代表血清質(zhì)量，以血清析出量和血清是否溶血評價血清質(zhì)量；以少、一般、多分別代表采血后皮下出血量，以每只鵪鶉進針位置平均出血圓周直徑0～0.5 cm、0.5～1 cm、>1 cm評價皮下出血量。

2　結(jié)果

2.1　不同采血方式評價

每只鵪鶉平均采血用時：翼根靜脈法>左頸靜脈法>右頸靜脈法；其中，如能熟練掌握右頸靜脈采血技術(shù)，可將每只鵪鶉采血時間控制在3 min以內(nèi)，此法創(chuàng)傷小，短時間內(nèi)可對鵪鶉循環(huán)采血。血液質(zhì)量：左右頸靜脈法優(yōu)于翼根靜脈法；皮下出血量：翼根靜脈法>左頸靜脈法>右頸靜脈法。(見表1)

注：(A)鵪鶉右頸靜脈進針；(B)鵪鶉右頸靜脈采血。圖2　右頸靜脈采血法Fig.2　Puncture into the right jugular vein (A) and after blood collection (B) of a quail

注：(A)鵪鶉左頸靜脈；(B)鵪鶉左頸靜脈采血。圖3　左頸靜脈采血法Fig.3　The exposed left jugular vein (A) and drawing blood from it (B) in a quail

注：(A)鵪鶉翼根靜脈；(B)鵪鶉翼根靜脈采血。圖4　鵪鶉翼根靜脈采血法Fig.4　The wing root vein is exposed (A) and blood sample is collected from it (B) in a quail

采血方法Blood sampling methods評價Evaluation采血用時Time for blood collection血清質(zhì)量Serum quality 皮下出血量Subcutaneous bleeding翼根靜脈法The wing root vein method長Long一般Fiar多A lot左頸靜脈法Left jugular vein blood一般Fair優(yōu)Good一般 Fair右頸靜脈法Right jugular vein blood短Short優(yōu)Good少Scanty

2.2　鵪鶉采血30 min后鵪鶉狀態(tài)、飲食、活動情況

實驗觀察到翼根靜采血后，鵪鶉狀態(tài)一般，活動減少，食欲降低,飲水量增加；左頸靜脈采血后，鵪鶉狀態(tài)一般，閉眼次數(shù)較少，俯臥時間長，食欲降低, 飲水量增加；右頸靜脈采血后，鵪鶉狀態(tài)正常，活動情況與采血前無明顯差異，食欲正常,飲水量增加。

2.3　鵪鶉不同采血部位比較

鵪鶉左、右兩側(cè)脖頸部均有約3×3 cm2面積皮膚均無羽毛生長，其表皮完全裸露，可看到清晰頸靜脈。其中右頸靜脈血管全部存于右側(cè)，較為粗壯，存于淺表，血流量大，皮下脂肪較少，容易采血，操作簡便，但其血管位置靠近氣管，易使針頭刺到氣管，導(dǎo)致鵪鶉死亡；左側(cè)頸靜脈由右側(cè)斜繞過脖頸至左側(cè)，存于淺表，但血管相對較細，血流量相對少，針頭易刺穿血管，引發(fā)血管周圍血腫，同時也容易刺入頸椎，導(dǎo)致鵪鶉死亡；翼根靜脈存于翅膀下，淺表皮下，血管微細且軟嫩，血流量較少，皮下脂肪多，采血困難，易刺破血管，血流量較少，采血速度慢，易使血液注射器中堵塞，采血效率不高，采血后也極易形成進針口周圍血腫。但操作對鵪鶉可保證其生命安全，不會因刺入頸椎或刺破氣管而死亡。

3　討論

鵪鶉，學(xué)名為Coturnixjaponica，具有體型小、易飼養(yǎng)、生長發(fā)育快、適應(yīng)性廣、耐密集型飼養(yǎng)、抗病力強、世代間隔短等優(yōu)點。鵪鶉已被應(yīng)用于遺傳學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、疾病防疫學(xué)、組織學(xué)、胚胎學(xué)、藥理學(xué)的研究[2-3]。結(jié)合飼養(yǎng)以及實驗操作的可行性，鵪鶉可作為實驗動物塑造各種動物模型，如高尿酸血癥模型[4-5]、高血尿酸高甘油三酯血癥模型[6]、動脈粥樣硬化治療模型[7]、高脂血癥[8-9]、脂肪肝模型等[10]。鵪鶉血清中各項生化指標(biāo)常被作為評價藥物的藥效以及疾病模型的評價標(biāo)準(zhǔn)。如血清蛋白(TP)、血尿酸、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、總膽固醇(CHO)黃嘌呤氧化酶(XOD)等一系列尿酸、脂、糖代謝指標(biāo)[13-16]。本課題組長期從事鵪鶉疾病模型塑造與中藥防治研究，鵪鶉證候模型已被《中藥藥效研究方法學(xué)》《痛風(fēng)病學(xué)》等工具書收載[11-12]。作為新型實驗動物，鵪鶉的采血技術(shù)在文獻中少見記載。成年鵪鶉體重在150～180 g之間，血液總量約占體重的6.5%。若采血操作不規(guī)范，會導(dǎo)致出血量過大，既危及鵪鶉的生命安全同時對后期血清中各項指標(biāo)的檢測產(chǎn)生影響。

本研究采用圖文形式對鵪鶉采血方法對比展示，既適用于鵪鶉采血初學(xué)者，又對改良禽類采血方法有積極啟示作用。通過對鵪鶉三個采血部位的對比與評價，研究人員可根據(jù)需要選擇合適的取血部位。

3.1　鵪鶉采血部位選擇

操作熟練的情況下，鵪鶉左、右頸靜脈采血技術(shù)均簡便、快速、采血量均可至1.0 mL以上，也可微量采血；能滿足對不同日齡鵪鶉固定周期內(nèi)連續(xù)采血的需求；對采血部位的損害相對?。贿m用于對需長期大批量采血的鵪鶉進行采血操作。鵪鶉翼根靜脈翼根靜脈血管微細且嬌嫩，血流量較少，采血較困難，可進行微量或采血量0.5 mL以下的采血操作。

鵪鶉大量采血時可選用左右頸靜脈采血法，少量或微量采血時三種方法均可采用。建議需血量0.5 mL以下采血操作熟練時，可以根據(jù)情況選擇三者任一采血方法均可，若采用翼根靜脈采血，建議使用4號針頭或毛細點樣管采血。若采血量需大于0.5 mL時，可選用左右頸靜脈部位采血。

3.2　鵪鶉采血注意事項

采血環(huán)境與衛(wèi)生：采血環(huán)境要適宜，注意嚴(yán)格消毒，采血實驗室要有充足的光線，室溫保持14℃～28℃；采血人員要注意個人衛(wèi)生防護?？谡?、橡膠手套等。

鵪鶉體質(zhì)量：采血時，鵪鶉體質(zhì)量和日齡不宜過小，以防血管細小，出血量少；一般鵪鶉到達35日齡左右，體重在160 g左右時即宜選作為采血對象。

采血針器選擇：采血時帶針頭注射器要干燥清潔，注射器要密封良好，避免漏氣，導(dǎo)致采血失??；采血針頭不宜過大，以防采血后針口創(chuàng)傷大，止血困難，可根據(jù)采血需要選擇采血針頭。一般頸靜脈采血時可選用6號針頭注射器；翼根靜脈采血時可選用4號或5號針頭注射器。

采血期間：采血時抽血速度要保持均衡緩慢，旋轉(zhuǎn)針頭，避免因回血慢產(chǎn)生血管閉塞，影響采血；進針后，若抽不出血，勿回推，否則鵪鶉易發(fā)生栓塞死亡；采血時按壓血管力度要適度，太緊則不易出血，太松則針頭易滑動，刺破血管；因鵪鶉左右頸靜脈部位皮膚松弛，采血結(jié)束后應(yīng)稍用力按壓進針口，防止過量出血。