方 聰， 郭治明， 線薇微， 陳明茹， 楊圣云

(1.廈門大學(xué)海洋與地球?qū)W院，福建 廈門 361102； 2.中國科學(xué)院海洋研究所海洋生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點實驗室，山東 青島 266072； 3.青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實驗室海洋生態(tài)與環(huán)境科學(xué)功能實驗室，山東 青島 266071； 4.浙江環(huán)科環(huán)境咨詢有限公司，浙江 杭州 311121)

耳石作為硬骨魚類內(nèi)耳膜迷路內(nèi)的結(jié)石，會在魚類生長發(fā)育過程中持續(xù)生長。魚類耳石形態(tài)(如輪紋的寬度、清晰度、顏色深淺、耳石外輪廓、長短軸比例等)常常會因魚體生理或生存環(huán)境的脅迫表現(xiàn)出與正常個體間存在一定的特殊差異，進而有效地記錄魚類在生長和發(fā)育過程中所經(jīng)歷的某些重要節(jié)點及特殊生活事件，如孵化、初次攝食、變態(tài)、棲息地的遷入或遷出及生活環(huán)境的劇烈變化[1-2]。且同種魚類的不同生態(tài)群體由于受外界環(huán)境因子的影響，生長發(fā)育常常存在顯著性差異，從而影響耳石的沉積，形成群系特異性[3-4]。

小黃魚作為中國近海重要的經(jīng)濟魚類，其資源量在近幾十年一直處于動態(tài)變化當中。目前，小黃魚在各海域均遭受充分或過度開發(fā)，資源出現(xiàn)一定的衰退[5]。因此，科學(xué)的生物學(xué)研究方法對其資源的合理開發(fā)和可持續(xù)利用具有重要意義。耳石作為可以記錄魚體生長的特殊結(jié)構(gòu)，其形態(tài)學(xué)研究已在魚類生物學(xué)及漁業(yè)資源評估中得到廣泛應(yīng)用，且石首魚科魚類的耳石較其它科屬的魚類更為明顯，預(yù)測具有更好的生物學(xué)意義。本研究探討了10個耳石度量指標與魚體體長、體質(zhì)量的關(guān)系，耳石形態(tài)與小黃魚特殊生活史階段的關(guān)系，并對耳石形態(tài)在小黃魚群體識別方面的應(yīng)用做了初步探索，對豐富我國底層洄游型魚類的生活史研究及對小黃魚不同生態(tài)群體劃分具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料選取

本研究的小黃魚耳石取自中國科學(xué)院海洋研究所于長江口所采集的小黃魚樣本，調(diào)查采樣租用底層雙拖網(wǎng)漁船(300 HP)，調(diào)查網(wǎng)具為150.5 m×96.5 m輕拖網(wǎng)，采樣區(qū)域見圖1，樣本組成見表1，本研究左右耳石重量無顯著性差異(t=-0.604，P=0.546)，故統(tǒng)一采用右耳石作為研究材料。

圖1 長江口小黃魚采樣站位圖(黑色實線內(nèi))Fig.1 Stations of L.polyactis sampling from the Yangtze River Estuary(within black solid line)

采樣時間Sampling time體長范圍Body length/mm體質(zhì)量范圍Body weight/g年齡范圍Age/a樣本數(shù) Size(n)雌Female 雄Male雌雄未辯Unidentified2009.11111～16523.0～82.00+～2+ 36 4802010.05122～19024.0～104.01+～3+ 32 2002011.0596～16316.0～68.00+～2+31 9402011.1185～15810.0～70.70+～2+30 17372012.05103～16216.4～72.00+～2+25 1952012.11107～17022.0～95.00+～2+14 17672013.0595～16012.9～63.60+～2+18 25342013.1193～16015.4～59.30+～2+7 550

1.2 耳石形態(tài)學(xué)測定

解剖小黃魚頭部，于內(nèi)耳的球狀囊內(nèi)采集耳石(見圖2)，置于離心管中。此時，需將離心管對應(yīng)魚體進行編碼，以確保數(shù)據(jù)的對應(yīng)性。向盛有耳石的離心管中加入蒸餾水，浸泡耳石24 h，再于超聲波清洗器中50 ℃清洗30 min，而后50 ℃烘箱內(nèi)干燥完全，置于室內(nèi)冷卻至恒溫。將清洗、干燥后的小黃魚耳石放于分析天平上進行稱重(精確度0.1 mg)，利用EXPLOIT游標卡尺測量耳石最大厚度(OT)(精確度為0.01 mm)(見圖3)。

由于小黃魚耳石屬曲面型耳石，在進行耳石圖像采集時會因為角度擺放不同而造成人工誤差，為減小誤差，本研究將耳石內(nèi)側(cè)面朝下，外側(cè)面朝上，利用Motic三目體視顯微鏡僅對耳石外側(cè)面進行圖像拍攝。將拍攝完畢后的耳石圖像利用軟件Image-pro plus6.0進行圖像分析，得到的耳石度量指標：耳石面積(OA)、耳石周長(OP)、耳石寬(OW)(ab)；耳石長(OL)(cd)；耳石最小半徑(ORmin)(oe)；耳石最大半徑(ORmax)(of)；耳石最小Feret徑長(Fmin)(gh)；耳石最大Feret徑長(Fmax)(gi)；O為幾何中心[6](見圖4)。再利用耳石度量指標換算得到耳石形態(tài)指標(見表2)。

圖2 小黃魚耳石采集

圖3 小黃魚耳石厚度測量

圖4 小黃魚耳石度量指標

在耳石形態(tài)指標中，環(huán)率和圓度表征耳石外輪廓趨近于圓形的程度，環(huán)率越小或是圓度越大，表明耳石外輪廓更趨近于圓形；矩形趨近率表征耳石輪廓與其最小外接矩形的關(guān)系；橢圓率表示外緣點到長短軸間的距離是否成比例；耳石密度描述了單位面積內(nèi)耳石的質(zhì)量，值越大，表明耳石越厚，反映了耳石的三維特征；形態(tài)因子描述了耳石輪廓的規(guī)則程度，值越大，耳石輪廓越規(guī)則；幅形比、F比、半徑比都是表示耳石長軸與短軸的生長差異。以上耳石形態(tài)指數(shù)在一定程度上消除了因耳石本身大小不同或是人為擺放位置的差異等各種客觀因素對耳石形態(tài)分析的影響(見表2)。

表2 小黃魚耳石度量指標和形態(tài)指標Table 2 Otolith measurement indexes and shape indexes of L. polyactis

Note:①Otolith weight；②Otolith thickness;③Otolith area;④Otolith perimeter;⑤Otolith maximum radius;⑥Otolith minimum radius;⑦Otolith length;⑧Otolith width;⑨Otolith maximum feret radius;⑩Otolith minimum feret radius

本研究還探討了耳石絕對尺寸和耳石相對尺寸與魚體生長的關(guān)系。其中耳石絕對尺寸是指直接利用標尺度量的耳石指標，耳石相對尺寸=100%×耳石絕對尺寸/體長

1.3 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)分析都是利用軟件shape、spss20.0、sigmaplot12.5、Image-Pro Plus 6.0及excel 2010完成。

利用Image-pro plus6.0圖像處理軟件得到小黃魚10項耳石度量指標后，利用線性函數(shù)、冪函數(shù)和指數(shù)函數(shù)探討其與體長、體質(zhì)量的關(guān)系，并分析耳石絕對尺寸和耳石相對尺寸隨魚體生長的變化關(guān)系。

利用SPSS20.0對10項耳石形態(tài)指標進行主成分分析(PCA)，得到最具代表性的耳石形態(tài)指標并用于描述小黃魚的耳石形態(tài)特征，分析其與魚體體長的關(guān)系[7]。

利用shape軟件對小黃魚進行耳石外輪廓的傅里葉分析，其中需將前3個固定系數(shù)(a1=1，b1=c1=0)剔除，僅保留77個系數(shù)值用于耳石外輪廓的后續(xù)分析。最后利用SPSS20.0中的Fisher逐步判別法對小黃魚不同生態(tài)群體進行判別，得到判別成功率。群體判別成功率%=(判別正確個體數(shù)/群體總個體數(shù))×100%。

在利用耳石形態(tài)進行群體判別時，為消除體長及年齡對耳石生長的影響，本文選取的小黃魚樣本為體長范圍130～140 mm的1齡個體(t=-1.221，P=0.223)，且T檢驗發(fā)現(xiàn)不同性別間的10項耳石形態(tài)指標無顯著差異(P=0.150～0.912)。同時，對春秋兩季群體分別進行各年份間配對樣本T檢驗，發(fā)現(xiàn)同一群體在不同年份間并無顯著性差異，排除因年份不同而帶來的群體差異(見表3)。而后，對所有的耳石形態(tài)指標進行對數(shù)[log(X+1.1)]轉(zhuǎn)換，以提高數(shù)據(jù)分析的準確度[8]。

表3 小黃魚春秋兩季群體不同年份間耳石形態(tài)指標差異性比較(體長范圍130～140 mm，1齡)Table 3 Comparison of otolith shape indexes of L. polyactisbetween different groups(Body length range from 130 mm to 140 mm,1 year)

Note:①Spring group(May);②Autumn group(Nov.)

2 結(jié)果分析

2.1 耳石度量指標與體長、體質(zhì)量關(guān)系

在進行耳石度量指標與魚體體長、體質(zhì)量關(guān)系函數(shù)擬合之前，先對數(shù)據(jù)進行異常值檢驗，剔除異常值。本研究分別利用線性函數(shù)、冪函數(shù)及指數(shù)函數(shù)3個函數(shù)模型擬合耳石度量指標與體長、體質(zhì)量間的關(guān)系，得到相關(guān)系數(shù)R2(見表4)。

表4 耳石度量指標與體長、體質(zhì)量相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis between otolith measurement indexes and body length、body weight respectively

Note:①Body length(L)-Otolith weight(OW)；②Body length(L)-Otolith thickness(OT)；③Body length(L-Otolith area(OA)；④Body length(L-Otolith perimeter(OP)；⑤Body length(L)-Otolith maximum radius(ORmax)；⑥Body length(L)-Otolith minimum radius(ORmin)；⑦Body Length(L)-Otolith length(OL)；⑧Body length(L)-Otolith width(OW)；⑨Body length(L)-Otolith maximum feret radius(Fmax)；⑩Body length(L)-Otolith minimum feret radius(Fmin)；Body weight(W)-Otolith weight(OW)；Body weight(W)-Otolith thickness(OT)；Body weight(W)-Otolith area(OA)；Body weight(W)-Otolith perimeter(OP)；Body wieght(W)-Otolith maximum radius(ORmax)；Body weight(W)-Otolith minimum radius(ORmin)；Body weight(W)-Otolith length(OL)；Body weight(W)-Otolith width(OW)；Body weight(W)-Otolith maximum feret radius(Fmax)；Body weight(W)-Otolith minimum feret radius(Fmin)

觀察20組關(guān)系式發(fā)現(xiàn)，冪函數(shù)在20組關(guān)系間擬合效果最佳。耳石質(zhì)量和耳石最大半徑與體長和體質(zhì)量的擬合效果較好(R2=0.781～0.833)。同時發(fā)現(xiàn)，耳石長軸(耳石最大半徑、耳石長、耳石最大Feret徑長)與體長、體質(zhì)量的關(guān)系擬合度較短軸(耳石最小半徑、耳石寬、耳石最小Feret徑長)更佳(見表4)。

2.2 耳石絕對尺寸和相對尺寸與體長的關(guān)系

耳石絕對尺寸隨魚體的生長不斷增大(見圖5A、C、E)，其中耳石絕對厚度在體長110～170 mm之間出現(xiàn)波動，表現(xiàn)為快速增大的趨勢(見圖5E)。

耳石相對尺寸中，只有耳石相對質(zhì)量(OW/L)隨體長的增加逐漸增大，從體長為80 mm時的0.037%上升至體長為190 mm時的0.089%(見圖7B)；耳石相對周長(OP/L)、耳石相對厚度(OT/L)、耳石相對最大半徑(ORmax/L)、耳石相對最小半徑(ORmin/L)、耳石相對長度(OL/L)、耳石相對寬度(OW/L)、耳石相對最大Feret徑長(Fmax/L)、耳石相對最小Feret徑長(Fmin/L)都隨體長的增加逐漸減小，分別從體長為80 mm時的17.886%、2.012%、3.514%、2.065%、6.757%、4.423%、6.756%、4.364%下降至體長為190 mm時的14.279%、1.700%、2.929%、1.506%、5.575%、3.229%、5.596%、3.227%(見圖5D、F)。觀察發(fā)現(xiàn)，耳石相對厚度在體長110～170 mm時出現(xiàn)大幅增長，隨后有所下降(見圖5F)。

圖5 耳石絕對尺寸和耳石相對尺寸與體長的關(guān)系

2.3 耳石圓度(I2)、耳石Feret比(I9)與體長的關(guān)系

2.3.1 主成分分析(PCA) 對小黃魚10個耳石形態(tài)指標進行主成分分析，發(fā)現(xiàn)前3個主成分(特征值>1)累積貢獻率達80.414%(見表5)。根據(jù)主成分載荷系數(shù)(見表6)發(fā)現(xiàn)，耳石圓度(I2)、F比(I9)與第一主成分的關(guān)系最為密切，主要反映了耳石的長、短軸差異。所以本研究利用耳石圓度(I2)、F比(I9)來代表10項耳石形態(tài)參數(shù)并用于描述小黃魚的耳石形態(tài)特征，分析其與魚體生長的關(guān)系。

表5 主成分分析累積結(jié)果

表6 耳石形態(tài)指標主成分分析

2.3.2 耳石圓度(I2)與體長的關(guān)系 耳石圓度(I2)隨魚體體長的增加逐漸減小，當體長為80～110 mm時，耳石圓度(I2)下降趨勢明顯，當體長為110～160 mm時，耳石圓度(I2)下降趨勢變緩，當體長大于160 mm時，耳石圓度(I2)下降趨勢逐漸趨向平穩(wěn)(見圖6)。

2.3.3 耳石Feret比(I9)與體長的關(guān)系 耳石Feret比(I9)隨魚體體長的增大逐漸增大，當體長為80～110 mm時，耳石Feret比(I9)上升趨勢明顯，當體長為110～160 mm時，耳石Feret比(I9)上升趨勢變緩，當體長大于160 mm時，耳石Feret比(I9)上升趨勢逐漸趨向平穩(wěn)(見圖7)。

圖6 耳石圓度(I2)與魚體體長的關(guān)系Fig.6 Relationship between otolith roundness(I2) and body length of L. polyactis

圖7 耳石Feret比(I9)與魚體體長的關(guān)系Fig.7 Relationship between otolith Feret ratio(I9) and body length of L. polyactis

2.4 耳石形態(tài)與生態(tài)群體判別

2.4.1 耳石形態(tài)指標法 利用10項耳石形態(tài)指標進行小黃魚春秋2個生態(tài)群體識別時，利用T-test分析去除2個生態(tài)群體中不存在顯著差異的圓度(I2)(t=0.51，P=0.608)和耳石密度(I5)(t=-0.399，P=0.690)，只保留其他8項耳石形態(tài)指標進行不同生態(tài)群體間的判別分析，得到以6個耳石形態(tài)指標(I1、I6、I7、I8、I9、I10)為自變量的判別方程，且春秋2個生態(tài)群體的判別成功率分別為85.4%和81.7%。

Y春季群體=42 783.165I1+450.512I6+807 511.473I7+46 415.586I8+22 840.093I9+932.460I10-693 903.941。

Y秋季群體=42 770.327I1+444.129I6+807 241.230I7+46 566.987I8+22 864.692I9+951.066I10-693 642.020。

2.4.2 傅里葉分析法 利用傅里葉分析法進行小黃魚春秋兩個生態(tài)群體識別時，首先利用shape軟件提取耳石外輪廓(見圖8)，得到描述耳石外輪廓的77個傅里葉諧值，利用T-test分析去除2個生態(tài)群體中不存在顯著差異的49個傅里葉諧值(P>0.05)，僅保留28個諧值進行后續(xù)的Fisher判別分析，最終得到以11個傅里葉諧值(C6、C25、C30、C43、C45、C46、C53、C56、C62、C64、C77)為自變量的判別方程，且春秋兩個生態(tài)群體的判別成功率分別為84.8%和85.2%。

Y春季群體=-120.979C6+132.162C25+134.023C30-40.525C43+103.203C45+2.939C46-84.282C53-20.134C56+110.447C62-98.148C64-412.498C77-4.211。

Y秋季群體=-320.662C6+30.355C25+301.533C30-120.716C43+272.818C45+144.579C46-459.547C53-228.838C56+166.620C62-191.374C64-843.904C77-9.807。

2.4.3 綜合指標法 最后本研究利用8個耳石形態(tài)指標和28個傅里葉諧值綜合判別小黃魚春秋2個生態(tài)群體，得到判別成功率分別為92.7%和91.3%(見圖9、表7)。

圖8 小黃魚耳石外輪廓(春季群體(上)、秋季群體(下)Fig.8 Outer contour of otolith of L. polyactis spring group(up)，autumn group(down)

(左：春季群體；右：秋季群體。Left: spring group; Right: autumn group.)圖9 小黃魚群體判別分析圖Fig.9 Discriminant analysis of different groups of L. polyactis)

群體類別Groups分析法 Methods形態(tài)指標法Shape indexes傅里葉分析法Fourier coefficients綜合指標法Comprehensive indexes計數(shù)Count春季群體129221282314011秋季群體2194179810105百分比Percentage/%春季群體85.414.684.815.292.77.3秋季群體18.381.714.885.28.791.3

3 討論

3.1 耳石形態(tài)與魚類生活史的關(guān)系

耳石隨魚體發(fā)育會呈現(xiàn)一定的生長規(guī)律，當觀察魚體生長受限時，?？赏ㄟ^耳石來評估魚體的生長，因此，耳石與魚體生長關(guān)系的研究一直是國內(nèi)外魚類學(xué)研究的熱點[9-12]，在漁業(yè)資源評估及管理中具有一定的意義。

很多研究認為，耳石尺寸與魚體大小之間一般存在顯著的線性相關(guān)，如太湖新銀魚(Neosalanxtaihuensis)、中華沙鰍(Botiasuperciliaris)、赤鼻棱鳀(Thryssakammalensis)、細條天竺鯛(Apogonlineatus)等[13-15]。本研究統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，除了耳石厚度以外，其余小黃魚各耳石形態(tài)指標與體長(R2=0.639～0.833)、體質(zhì)量(R2=0.555～0.801)基本呈顯著的冪函數(shù)關(guān)系。通過比較分析發(fā)現(xiàn)，耳石長軸(耳石最大半徑、耳石長、耳石最大Feret徑長)與體長、體質(zhì)量的關(guān)系擬合度較短軸(耳石最小半徑、耳石寬、耳石最小Feret徑長)更好。且在耳石相對尺寸中，長軸的變化趨勢相對穩(wěn)定，因此在近海小黃魚的漁業(yè)資源評估中，利用耳長軸來推算魚體體長及體質(zhì)量更為合理。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小黃魚耳石圓度(I2)和耳石Feret比(I9)隨魚體體長的增加分別逐漸減小和增大，且減小和增大的趨勢逐漸變緩。在體長為110和160 mm時，耳石圓度(I2)分別出現(xiàn)減小速率變緩的拐點，F(xiàn)eret比(I9)分別出現(xiàn)增大速率變緩的拐點。通常認為，耳石形態(tài)的特殊變化常常是因為魚體經(jīng)歷了生長發(fā)育中的特殊時期，如生長階段的轉(zhuǎn)變、棲息地的改變及生存環(huán)境的突變等[16]。小黃魚耳石圓度(I2)和耳石Feret比(I9)的2個變化拐點恰好分別與性成熟體長(108 mm)和生長速率變緩的拐點體長(169.2 mm)接近。小黃魚生長速率變緩的拐點年齡(2齡)落后于性成熟年齡(一般為當齡魚)[17-18]，會在性成熟后仍有一段快速生長的階段[19]。推測此時耳石形態(tài)受魚體生長率的影響，表現(xiàn)出一定的特殊性。同時，耳石絕對厚度和耳石相對厚度在性成熟體長和生長速率變緩的拐點體長之間出現(xiàn)異?？焖僭鲩L的現(xiàn)象。可見，耳石二維特征和三維特征都可有效記錄小黃魚特殊生長階段的變化，這為今后研究小黃魚的生長發(fā)育及生活史研究提供有效依據(jù)，豐富了底層洄游性魚類生物學(xué)研究。

相關(guān)研究已表明，在小黃魚仔稚魚期，耳石半徑與體長就已存在顯著的生長一致性[20]。因此，加強小黃魚整個生長階段的耳石形態(tài)學(xué)研究可為了解小黃魚生長發(fā)育特征、生活史、漁業(yè)資源管理提供有效依據(jù)。

3.2 耳石形態(tài)在群體識別中的應(yīng)用

合理有效地篩選表征性強的耳石形態(tài)參數(shù)對提高魚類群體識別能力至關(guān)重要，使用單一耳石形態(tài)參數(shù)一般會造成較大的誤差，如Longmore利用單一耳石參數(shù)對北大西洋的4個圓吻突吻鱈(Coryphaenoidesrupestris)群體進行判別，發(fā)現(xiàn)判別成功率僅為43%[21]；Petursdottir研究了冰島3個大西洋鱈(Gadusmorhua)群體，發(fā)現(xiàn)利用單一耳石形態(tài)進行群體判別時，判別率僅為21.1%～60.3%，而多個耳石形態(tài)參數(shù)使判別成功率達到50.9%～79.5%[22]，所以通常認為多個耳石形態(tài)參數(shù)往往更有利于進行魚類物種及群體間的判別分析。

本研究僅利用耳石形態(tài)指數(shù)得到小黃魚5月春季群體及11月秋季群體的判別率分別85.4%和81.7%，10個耳石形態(tài)指數(shù)有6個納入最終判別分析，信息有效占比60.0%；利用傅里葉分析得到的判別率分別為84.8%和85.2%，矢耳石提取77個橢圓傅里葉諧值中有28個諧值經(jīng)篩選納入判別分析，信息有效占比36.4%[23]；結(jié)合2個形態(tài)指標得到的判別率達92.7%和91.3%?？梢?，無論是耳石形態(tài)指標還是耳石傅里葉指數(shù)，都可有效地進行小黃魚不同群體的判別分析，而綜合指標能有效地提高判別成功率。如果單用一種耳石形態(tài)指標進行群體判別時，耳石形態(tài)指數(shù)可更有效地提取耳石信息。因此，在今后小黃魚耳石形態(tài)研究中，應(yīng)合理挑選耳石有效參數(shù)，準確、高效地提高群體間的判別結(jié)果。

以往利用小黃魚耳石進行判別分析多關(guān)注于不同地理區(qū)域的群體[24-25]，鮮有應(yīng)用于同一區(qū)域不同季節(jié)的生態(tài)群體。相關(guān)研究已表明，魚類生存環(huán)境的異質(zhì)性可導(dǎo)致同一魚種的不同群體之間產(chǎn)生個體耳石形態(tài)差異[26]。本研究中，耳石形態(tài)在春秋兩季生態(tài)群體中有較高的識別率，個體耳石形態(tài)差異較大，認為這與長江口不同季節(jié)的環(huán)境變化有關(guān)。王茂林(2009)發(fā)現(xiàn)，魚類耳石的生長與海水中鈣濃度有直接關(guān)系[27]，河口區(qū)碳酸鈣的沉降作用與懸浮泥沙的沉積存在關(guān)聯(lián)[28]，而懸浮泥沙的季節(jié)性變化主要受徑流量的影響[29]。12～5月為枯季，長江口輸沙量較少，碳酸鈣沉降作用較弱，5月春季群體所處環(huán)境中碳酸鈣濃度較低；相反，6～11月為雨季，長江口輸沙量增多，碳酸鈣沉降作用明顯，小黃魚秋季群體所處環(huán)境中碳酸鈣濃度較高。同時，有研究表明，高溫能加快耳石的沉積速率[30]。小黃魚屬底層洄游型魚類，因此本研究比較了不同月份間研究區(qū)域底層的平均溫度，發(fā)現(xiàn)11月溫度明顯高于5月(見圖10)，且經(jīng)T-test發(fā)現(xiàn)兩個月份間的溫度存在極顯著性差異(P<0.01)，這可能也是導(dǎo)致11月耳石形態(tài)異于5月的原因之一。因此，在利用耳石進行小黃魚不同地理群體判別時，需要考慮同一區(qū)域內(nèi)不同季節(jié)的樣本異質(zhì)性，以免帶來判別誤差。

圖10 5月及11月底層平均溫度比較

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