王煉詞

【摘要】姜黃素是目前受世界各國科學家非常關注的一個藥物，也是世界各國花大量人力財力來開發(fā)和研究的一個藥物。中國人從古代就開始使用中藥姜黃來治療各種疾病。本文主要從三個方面進行分析了姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P-gp ATP酶活性的關系研究。

【關鍵詞】姜黃素 肝癌多藥耐藥性 P-gp ATP酶活性 研究

一、姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P-gp ATP酶活性的關系研究的重要意義

惡性腫瘤是危害人類健康最嚴重的一類疾病，尋找高效低毒的抗腫瘤藥物對提高化學治療水平具有重要意義。

姜黃素是從姜黃中提取的一種植物多酚，以往研究表明姜黃素具有多種藥理活性，如抗炎、抗病毒、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等。據(jù)臨床實踐發(fā)現(xiàn)，姜黃素是有效的抗突變劑，也是抗促癌劑。以前的研究在姜黃素抗腫瘤轉移方面?zhèn)戎赜趯ρ擂D移的腫瘤細胞的研究，但尚未見對小鼠腹水型肝癌細胞淋巴道轉移影響的報道。本篇文章主要從姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P-gpATP酶活性的關系研究進行了探討分析，同時對姜黃素抗腫瘤作用機理進行初步的探討。因此，此處研究既有理論意義，又有潛在的應用價值，同時也為開發(fā)價格低廉、高效低毒的天然抗腫瘤藥物提供了可靠的理論依據(jù)。

二、姜黃素的主要功效以及藥用價值

（1）姜黃素與癌癥之間的關系。姜黃素可以有效治療大多數(shù)癌癥及其它炎性誘發(fā)的疾病。經(jīng)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素能阻斷結腸癌蛋白質一一皮層蛋白。皮層蛋白對于癌細胞運動是必需的蛋白質，它經(jīng)常在癌癥中過度表達，從而促使癌細胞轉移到身體其他器官。姜黃素是姜黃的活性成分，已被科學研究用于許多類型癌癥的治療。

姜黃素已被證明具有癌化學預防作用，能扭轉，抑制或阻止癌癥發(fā)展的能力。新的研究發(fā)現(xiàn)了姜黃素阻止結腸癌細胞轉移的機制之一。姜黃素與沙利度胺合璧殺死癌細胞。

（2）姜黃素與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關系。姜黃素類似物可有效抵御阿爾茲海默氏癥，能夠防治帕金森氏病，姜黃素或可開發(fā)成治療老年癡呆癥藥物。含姜黃素藥物有助中風病患腦細胞再生，姜黃素有助延長壽命，利用姜黃發(fā)現(xiàn)延長壽命及控制老化的現(xiàn)象。

（3）姜黃素在臨床實踐中的藥用價值。姜黃素也有重要的經(jīng)濟價值和廣泛的藥理作用：第一，姜黃素針對降血脂、抗氧化、抗發(fā)炎、抗動脈粥樣硬化等具有顯著的效果。第二，2004年時發(fā)現(xiàn)姜黃素能抑制HIV-1整合酶活性用于艾滋病的臨床試驗。第三，抗癌是姜黃素的主要藥理活性之一，其抑制腫瘤的作用已在許多動物實驗中得到反復證實，其具體抗癌機制已成為近期研究熱點。

三、姜黃素聯(lián)合FAP對于P-gp ATP酶活性的影響

研究姜黃素聯(lián)合FAP對于P-gp ATP酶活性的影響，進一步探討MJ聯(lián)合FAP對肝癌多藥耐藥的逆轉作用及其機制。該研究對進一步揭示肝癌發(fā)病的分子機制、設計合理的治療藥物及判斷預后，提高我國肝癌的治療水平具有重要意義。

（1）細胞株與動物。H22肝癌細胞株由本實驗室保存，H22/FAP肝癌多藥耐藥細胞株由本實驗室模擬臨床FAP方案，采用藥物ADR、CDDP、5-FU濃度梯度遞增誘導法誘導而成。

（2） MTT法檢測姜黃素、VER對H22/FAP的最大無毒劑量。抽取小鼠H22/FAP腹水瘤細胞，PBS洗2次，采用Ficoll -H ypaqie不連續(xù)密度梯度法，圓2000r/min，20min水平離心后收集Ficoll- Hypaqie液和細胞懸液間的腫瘤細胞。PBS洗1次，0.4%臺盼藍染色，計活細胞率（藍染率

（3）耐藥倍數(shù)的測定和計算。用MTT法測定肝癌H22/FAP細胞對ADR、CDDP、5-FU的耐藥倍數(shù)。分別抽取H22肝癌敏感小鼠和H22/FAP肝癌多藥耐藥小鼠的腹水瘤細胞，按方法2處理制得H22和H22/FAP腫瘤細胞并培養(yǎng)細胞，然后依實驗要求加入不同濃度測試藥物ADR、CDDP、5-FU，另設不加藥的空白對照組，繼續(xù)培養(yǎng)48h后，加入MTT和DMSO，490nm和630nm雙波長下測定吸光度（ OD），并計算耐藥倍數(shù)。細胞生長抑制率%=（對照組吸光度平均值一加藥組吸光度平均值）/對照組吸光度平均值×100%；求出IC50；RI=A/B，A為化療藥物對H22/FAP瘤細胞的IC50值；B為化療藥物對H22瘤細胞的IC50值。

（4）質膜的制備。BALB/c小鼠腹腔接種H22/FAP細胞（每只0.2ml，1×108/L），隨機分成9組，每組10只：①NS組；②FAP+姜黃素（20mg/Kg）組；③FAP+姜黃素（10mg/Kg）組；④FAP+姜黃素（5mg/Kg）組；⑤FAP+姜黃素（2.5mg/Kg）組；⑥FAP+VER（ 3.Omg/Kg）組；（0FAP+ VER（1.5mg/Kg）組；⑧FAP+VER（o.75mg/Kg）組；⑨FAP+VER（0.375mg/Kg）組；尾靜脈注射給藥，F(xiàn)AP給藥方案同“1.4”，7d后抽取腹水瘤，按照MTT法中的步驟制取腫瘤細胞，加入6ml裂解液，在4℃下孵育20min后，4000g下離心10min，收集上清，100000g下離心1h，取沉淀，加入含0.25mol/l蔗糖的裂解液，備用。

（5）P-gp ATP酶活性的測定。每只實驗小鼠取20μg質膜，加入以下試劑（mmol/l）：Tris-HCL 50μl（ pH6.8），二硫蘇糖醇2μl，Mgcl25μl，毒毛花苷圓2μl（清除Na+，K+-ATP酶活性），依他酸2μl（清除Ca2+- ATP酶活性），疊氮化鈉5（清除線粒體ATP酶活性），然后加入Mg-ATP反應開始。加入Iml定磷試劑，37℃下反應30min，以分光光度計測定720nm下吸光度（OD）值。

四、結論

發(fā)現(xiàn)不同濃度姜黃素對p-gp ATP酶的活性有影響！到目前為止，體外實驗研究證明姜黃素能逆轉人類癌癥耐藥細胞多藥耐藥性，但對于逆轉肝癌多藥耐藥的體內(nèi)研究，尤其通過影響P-gpATP酶活性的體內(nèi)研究比較少見。據(jù)臨床實踐觀察發(fā)現(xiàn)，肝癌患者更易對多柔比星、順鉑、5-氟尿嘧啶產(chǎn)生耐藥，通過建立BLAB/c小鼠肝癌多藥耐藥的模型，研究姜黃素聯(lián)合FAP對P-gp ATP酶活性的影響，深入探討MJ聯(lián)合FAP對肝癌多藥耐藥的逆轉作用及其機制。

參考文獻：

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