孫明波 李勇 余洋 于瀅 遼寧省醫(yī)療器械檢驗(yàn)檢測院 （遼寧 沈陽 110179）

隨著醫(yī)用可生物降解聚合物材料研究的不斷發(fā)展，脂肪族聚酯以其獨(dú)特的生物降解性、生物相容性和生物可吸收性廣泛應(yīng)用于醫(yī)用生物降解材料領(lǐng)域。其優(yōu)異的生物降解性來源于聚合物分子鏈中的酯鍵，在自然環(huán)境和生物體內(nèi)均易受到進(jìn)攻而發(fā)生斷鏈，進(jìn)而降解。目前，在此領(lǐng)域研究的最多，應(yīng)用最廣泛的是聚左旋乳酸（PLA）、聚乙交酯（PGA）、聚己內(nèi)酯（PCL）等。同樣為脂肪族聚酯的聚對二氧環(huán)己酮（poly（p-dioxanone），PPDO）也具有非常優(yōu)異的生物相容性、生物可吸收性和生物降解性；此外，由于其分子鏈中具有獨(dú)特的醚鍵，所以具有良好的柔韌性，是理想的手術(shù)縫合材料，同時(shí)還可以用于制造骨板和組織修復(fù)材料，具有廣泛的應(yīng)用前景[1]。本試驗(yàn)通過醫(yī)用可吸收合成縫合線對鼠傷寒沙門氏TA系列菌株體外染毒，進(jìn)行遺傳毒性測定。

1.資料與方法

1.1 一般資料

儀器：多用生化培養(yǎng)箱（沈陽市偉明醫(yī)療設(shè)備廠）；立式滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）；電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；雙功能水浴恒溫振蕩器（江蘇金壇億通電子有限公司）。

試驗(yàn)材料：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、瓊脂粉（北京索萊寶生物科技有限公司）；碳酸氫鈉銨、檸檬酸、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；磷酸氫二鉀、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂（天津大茂化學(xué)試劑廠）；硫酸鎂（天津博迪化工股份有限公司）；萄糖-6-磷酸鈉鹽、輔酶-Ⅱ（氧化型）（SIGMA-ALDRICH公司）；2-氨基芴（2-AF，Dr.Mao公司）；甲基磺酸甲酯（MMS，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）、敵克松（Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）；醫(yī)用可吸收合成縫合線（材質(zhì)：聚對二氧環(huán)己酮）由企業(yè)提供。

試驗(yàn)菌株：TA97，TA98，TA100，TA102（美國Moltox公司）來源于上海寶錄生物科技有限公司。

1.2 方法[2-5]

1.2.1 試驗(yàn)菌液制備

取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基5mL，加入無菌試管中，接種TA97、98、100、102，在（37±2）?C、（115～125r/min）振蕩培養(yǎng)18h至對數(shù)生長期，活菌數(shù)不少于1×109個(gè)/mL。試管用黑紙包裹，以防光線照射細(xì)菌。

1.2.2 供試液制備

取可吸收合成縫合線按6cm2/mL比例浸提，浸提介質(zhì)為無菌生理鹽水，37?C浸提24h。

1.2.3 平板摻入法

①融化頂層培養(yǎng)基分裝于無菌小試管，每管2mL，在45?C水浴中保溫。②在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入每種試驗(yàn)菌株新鮮菌液0.1mL，混勻；試驗(yàn)樣品組分別加0.1mL試驗(yàn)材料浸提液，活化組再加10%S9混合液0.5mL，無活化組加0.2mol/L磷酸鹽緩沖液0.5mL，每組3管，再混勻，迅速將每管溶液分別傾入底層培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使頂層培養(yǎng)基均勻分布在底層上，平放固化。③陰性對照組分別加入0.1mL浸提介質(zhì)，活化組再加10%S9混合液0.5mL，無活化組加入0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液0.5mL。陽性對照組分別加陽性誘變劑0.1mL，活化組再加10%S9混合液0.5mL，無活化組加0.2mol/L磷酸鹽緩沖液0.5mL，其他步驟同“②”。④全部平皿倒置于37?C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48～72h，觀察結(jié)果。重復(fù)試驗(yàn)1次。

2.結(jié)果

表1、表2結(jié)果顯示，在+S9與-S92種測試系統(tǒng)下，陽性誘變劑誘發(fā)回變菌落數(shù)均明顯增加，樣品組回變菌落數(shù)與陰性對照相比無明顯差異。

3.討論

在試驗(yàn)中，醫(yī)用可吸收合成縫合線浸提液制作的方法上參考了GB/T 16886.12-2005所規(guī)定的浸提液制備方法，采用了Ames試驗(yàn)方法中的平板摻入法，試驗(yàn)結(jié)果為陰性，說明材料無明顯的致突變性。但由于存在菌株變異等原因，尚需進(jìn)行染色體畸變試驗(yàn)、DNA損傷試驗(yàn)等相關(guān)的試驗(yàn)，才能對其致突變性作出較全面的預(yù)測。

表1.醫(yī)用可吸收合成縫合線細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)第一次試驗(yàn)(±s)

表1.醫(yī)用可吸收合成縫合線細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)第一次試驗(yàn)(±s)

組別 TA97 TA98 TA100 TA102-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9空白對照 148.7±17.6 155.0±5.4 52.7±3.8 44.7±1.2 143.3±5.8 149.7±2.4 197.3±6.2 204.3±7.4溶劑對照 140.3±10.8 166.7±8.8 49.0±2.2 50.7±3.1 145.0±2.2 151.7±6.2 205.3±9.0 193.3±5.8樣品組 (0.6cm2/皿 ) 146.3±8.6 155.0±6.7 51.0±1.6 49.3±3.8 136.3±7.8 153.7±8.8 195.3±6.7 199.3±6.1 2-AF(10μg/皿) —— —— —— —— —— 578.7±27.0 —— ——敵克松(100μg/皿) 455.0±16.9 636.3±31.4 751.3±29.5 739.7±44.7 679.3±30.7 —— —— ——MMS(10μg/皿) —— —— —— —— —— —— 678.7±26.4 759.7±36.5

表2.醫(yī)用可吸收合成縫合線細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)第二次試驗(yàn)(±s)

表2.醫(yī)用可吸收合成縫合線細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)第二次試驗(yàn)(±s)

組別 TA97 TA98 TA100 TA102-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9空白對照 155.3±5.8 150.3±10.5 34.7±1.9 36.0±3.7 179.7±11.1 170.3±7.7 214.0±7.2 218.0±10.2溶劑對照 169.0±2.2 159.7±12.6 38.7±2.0 42.0±1.6 159.3±9.0 167.3±9.0 218.7±15.6 223.3±12.8樣品組 (0.6cm2/皿 ) 163.3±7.9 163.3±9.5 43.7±1.2 41±1.6 155.3±10.5 161.0±2.9 215.3±14.8 215.7±11.1 2-AF(10μg/皿) —— —— —— —— —— 721.7±15.9 —— ——敵克松(100μg/皿) 518.7±12.2 728.3±24.2 676.3±28.8 763.7±14.7 703.7±16.3 —— —— ——MMS(10μg/皿) —— —— —— —— —— —— 690.3±11.1 684.0±16.1

[1]徐向奎,馮亞凱,薛燕.對二氧環(huán)己酮及其聚合物的研究進(jìn)展[J].化學(xué)工業(yè)與工程,2008,25(3):259-263.

[2]GB/T16886.3-2008《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第3部分:遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn)》[S].2008.

[3]YY/T0870.1-2013《醫(yī)療器械遺傳毒性試驗(yàn)第1部分:細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)》[S].2014.

[4]譚玉婷,劉如練,蒙亞江,等.黃芩苷膠囊細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)[J].西北藥學(xué)雜志,2009,24(5),380-381.

[5]胡燕平,宋捷,馬銳,等.骨水泥的遺傳毒性研究[J].中國醫(yī)療器械雜志,2011,35(6):425-427.